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1、第四章 革兰氏阴性需氧杆菌,布氏杆菌又名布鲁氏菌 ,1887年Bruce从死亡士兵脾脏中分到第一株布鲁菌，可引起多种动物发病。主要寄居于肝、脾和淋巴组织内的单核细胞中，是胞内寄生菌。,布氏杆菌属（Brucella）,主要侵害：生殖器官和关节 主要特征是：生殖器官、胎膜以及多种器官组织发炎、坏死和肉芽肿的形成，引起流产、不孕、睾丸及关节炎症等症状。 人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。,一、形态及染色特性,球形、球杆形或短杆形，新分离者趋向球形。多单在，不形成芽胞和荚膜 ，无鞭毛不运动。革兰氏染色阴性 ，但着色不佳。柯兹罗夫染色法染成红色，其他菌呈绿色或蓝色。,二、培养特性,本菌专
2、性需氧，在初代分离培养时尚需5%-10% CO2，泛酸钙和 内消旋赤藓糖醇可刺激某些菌株生长。在培养基中加入少量血液、 血清或肝浸液可促进生长，不溶血。生长缓慢，常需5-10d甚至 20-30d。 液体培养基上呈轻微浑浊生长，时间长可形成很厚的菌膜；在固体 培养基上有S、M、R型菌落，大小不一。,三、抗原性及变异性,（一）属内抗原 ：A、M、R抗原 光滑型布氏杆菌有A和M二种菌体抗原成分 (外露的多糖侧链），是 细菌的凝集抗原，各菌种含量不同。与S型菌发生交叉凝集。 R抗原：非S型菌的共同抗原，不与S型菌发生凝集。 变异：SR 丧失A、M抗原，暴露R抗原 （二）属外抗原 可与巴氏杆菌、变形杆菌
3、、大肠杆菌等属细菌发生交叉凝集反应。,1）A抗原与M抗原 是细胞壁表面的脂多糖蛋白复合物。 光滑型布氏杆菌具有A和M两种表面抗原，两者含量有差异（约1：20），流产布氏杆菌以A为主，马尔他布氏杆菌以M抗原为主，分别能与相应的单项抗血清表现凝集反应。 猪布氏杆菌两种抗原含量相近，可凝集两种单相抗血清。因此，可用凝集试验鉴别种和生物型,2）R抗原 为细胞壁中的脂多糖复合物。 是大多数非光滑型布氏杆菌的共同抗原决定簇，其抗血清可与绵羊种和犬种布氏杆菌凝集 光滑型菌株发生S到R的变异后，丧失A和M抗原后，暴露出R抗原，可与R抗血清发生凝集。,绵羊种和犬种布氏杆菌是天然的R型种，其他种为S型。,2、属外
4、抗原,是指布氏杆菌能与巴氏杆菌、变形杆菌、弗朗西斯杆菌、弧菌、弯曲菌、钩端螺旋体、假单胞菌、沙门氏菌、耶耳森菌和大肠杆菌等属的细菌发生交叉反应的抗原。,五、变异性,1、布氏杆菌最常见的变异是SR变异，此种变异很少发生回变 2、发生SR变异后，细菌特异性多糖链发生改变，丧失A和M抗原。 3、变异细菌毒力减弱，凝集原性较差，对吞噬细胞缺乏抵抗力，同时易于发生自凝现象。,四、种及致病性,（一）分类 6个种 马耳他布氏杆菌Br. melitensis（羊型）1-3 流产布氏杆菌Br. abortus （牛型）1-9 猪布氏杆菌Br. suis 1-5 绵羊布氏杆菌Br. ovis 沙林鼠布氏杆菌 Br
5、. neotomae 犬布氏杆菌 Br. canis,其中1、2、3三个种危害最大，我国流行的也主要是这三种，其中以羊布氏杆菌病最为多见。 ： 羊种天然感染羊， 猪种天然感染猪， 牛种感染牛 但1、2、3可以互相感染，同时对人、马等动物都能致病， 人类感染以羊种最多见，且毒力最强，猪种次之，牛种最弱,布氏杆菌可通过胎盘、羊水、流产胎儿、乳汁、阴道分泌物、精液等排出体外， 通过皮肤、伤口、消化道、呼吸道、眼结膜、交配等途径感染。,主要致病物质有内毒素、荚膜和透明质酸酶。侵袭力强， 可通过完整的皮肤、粘膜进入体内，并有很强的繁殖与 扩散能力。 动物体内常局限于腺体组织与生殖器官（与赤藓醇含量 较高
6、有关），故病畜主要表现为睾丸炎、附睾炎、乳腺 炎、子宫炎等。孕期动物对布氏杆菌最敏感，感染后常 引起流产。,（二）致病性,细菌学检查：柯兹罗夫斯基染色。 血清学检查：用已知的布氏杆菌检查动物的血清抗体 凝集试验（虎红平板凝集试验） 感染初期检测。大动物血清凝集价达1：100时阳性， 1：25可疑；小动物1：50为阳性，1：25为可疑。 补体结合试验 慢性布氏杆菌病诊断。规定1：10被检血清阻止溶血 在50%以上即阳性。 变态反应检测 不宜作早期诊断。布氏杆菌水解素注射，观察红肿反 应。1-2cm为弱+；2-3cm为+；4-6cm为强+。,五、微生物学诊断,微生物学诊断,布氏杆菌病常表现为慢性或
7、隐性感染，其诊断和检疫主要依靠血清学检查及变态反应检查，细菌学检查仅用于发生流产的动物和其他特殊情况。 发达国家规定 凡涉及本菌样本检测应在生物安全2级实验室进行 涉及本菌培养则需在生物安全3级实验室操作,（一）细菌学诊断鉴定程序如下,最好用流产胎儿的胃内容物、肺、肝和脾以及流产胎盘和羊水等。 也可采用阴道分泌物、乳汁、血液、精液、尿液以及急宰病畜的子宫、乳房、精囊、睾丸、附睾、淋巴结、骨髓和其他与局部病变的器官。,1、病料的采集及显微镜检查,病料直接涂片，作革兰氏和柯兹洛夫斯基染色镜检。 若发现革兰氏阴性、鉴别染色为红色的球状杆菌或短小杆菌，即可作出初步疑似诊断,2、分离培养鉴定,加有放线菌
8、酮0.1mg/ml、杆菌肽25IU/ml、多黏菌素B 6IU/ml和加有色素的选择性琼脂平板。,无污染病料,肝汤琼脂或胰化酪蛋白大豆琼脂或血平板,污染病料,含菌数量较少的病料,增菌培养,每3d观察1次，如有细菌生长，可挑选可疑菌落细菌鉴定。如无细菌生长，可继续培养到30d，仍无生长者可认为阴性。,两套培养,大气环境,5-10CO2环境，37培养,挑取可疑菌落，做涂片、染色和镜检，确定为疑似菌后进行纯培养， 以布氏杆菌抗血清做玻板凝集试验， 以上两相试验结果并结合菌落特征，可做出布氏杆菌的诊断,若动物一直未发病死亡，可于接种后5周左右扑杀豚鼠，进行同样检查。,3、动物试验,病料乳悬液,豚鼠,腹腔
9、或鼠蹊部皮下注射每只12m1，,（1）每隔7l0d采血检查血清抗体，如凝集价达到1：50以上，即认为感染了布鲁氏菌。,（2）皮肤过敏试验进行诊断。,（3）动物发病死亡后，剖检取肝、脾、淋巴结及少许骨髓，进行细菌检查和分离。,血清中布氏杆菌抗体检查 病料中布氏杆菌检查两类方法。,（二）血清学检查,有多种检查方法,归纳起来,动物在感染布氏杆菌715d可出现抗体，检测血清中的抗体是布氏杆菌病诊断和检疫的主要手段。,大规模检疫时可采用操作较简便的方法进行初步筛选(初筛试验)，然后再用准确性较高方法予以复核(确定试验)。,抗球蛋白试验 琉基乙醇凝集试验 琼脂扩散试验 或酶联免疫吸附试验等,国内常用,玻板
10、凝集试验 虎红平板凝集试验 乳汁环状试验,现场或牧区大群检疫,试管凝集试验 补体结合试验,实验室最后确诊,作为疑难的病例辅助诊断方法。,判断标准,（1）牛、马、骆驼等大动物血清凝集价(或玻板试验中相当的凝集价)达：,1：100时判为阳性 1：50为可疑,（2）羊、猪、狗等血清凝集价,1：50为阳性 1：25为可疑。,（3）人血清凝集价1：100时为阳性。,皮肤变态反应一般在感染后的2025d出现，因此不宜作早期诊断。本法适于动物的大群检疫，主要用于绵羊和山羊，其次为猪。,（三）变态反应检查,感染初期阶段，凝集反应常为阳性，补体结合反应或为阳性或为阴性，变态反应则为阴性。 到晚期慢性或恢复阶段，
11、则凝集反应与补体结合反应均转为阴性，仅变态反应呈现阳性。 因此，为了彻底消除各类病畜，应同时使用三种方法进行综合诊断。,六、抵抗力,1、对外界环境的抵抗力较强，在污染的土壤和水中可存活1-4个月，皮毛2-4个月，乳、肉食品中约2个月，粪便中120d，流产胎儿中至少75d，子宫渗出物中200d。 2、对湿热的抵抗力不强，60加热30min或70 5min即杀死，煮沸立即死亡。 3、对消毒剂的抵抗力也不强。,临床表现,布鲁氏菌的主要临床表现与生殖道有关，一般情况下，动物 不表现明显的全身性疾病。在雌性动物，流产是最普遍的表现，没有预兆的症状通常是明显的。对于公畜，附睾炎和睾丸炎是最普遍的症状，损伤
12、通常是单侧的，但也可能是双侧的。公畜生殖道的感染导致生育降低，在一些情况下，导致不育。 生殖 道外症状表现在许多动物种类。感染猪布鲁氏菌的猪可能发展为关节炎，尤其在肢体的大关节或腰部脊椎。腰部脊椎的损伤导致在脊髓加压的组织坏死，并且导致后来的瘫痪。感染了犬布鲁氏菌的狗能够发生脑膜炎、骨髓炎和眼色素层炎。,人的布鲁氏菌病主要是一种网状内皮系统疾病。可能出现一种温和的淋巴结病，脾肿大和肝肿大。在暴露后的23周，开始出现症状。临床症状是非特异的，并且包括间歇性发热和盗汗的寒战，疲劳、肌肉和关节痛、背痛，压抑和失眠是普遍的。感染的特异性临床表现包括关节炎、骨髓炎和心内膜炎。,九、免疫防治,目前研究认为
13、,在绝大多数情况下,使用疫苗是控制牛、羊布病的有效方法。由于布氏杆菌主要为胞内寄生,抗生素对其效果甚微,机体的细胞免疫对抑制该病起了至关重要的作用。因此对布氏杆菌病疫苗的研究主要集中在筛选弱毒株,构建突变株以及寻找亚单位疫苗等方面。 布氏杆菌的控制和预防手段依赖于所涉及的动物种、布鲁氏菌种、管理习惯、疫苗的利用和有效性。,假单胞菌属 一、鼻疽假单胞菌 （一）致病性 引起马、驴、骡、单蹄兽的鼻疽，也感染人和其它家畜。病变特征为皮肤、鼻腔粘膜、肺脏及其他实质器官形成典型的鼻疽结节和溃疡。 strass反应：当接种细菌于雄性豚鼠腹腔后，可引起典型的睾丸炎和睾丸周围炎，睾丸肿胀化脓而破溃称为stras
14、s反应。,（二）形态染色特征 G，矢直或微弯曲的中等大小杆菌，无运动性，无芽胞，无荚膜。 （三）培养特性及抗原性（了解） （四）微生物学诊断 主要采用变态反应检查和血清学检查，而细菌学检查具有在特殊病例中才应用，,1 变态反应检查： 是鼻疽诊断和检疫的最常用方法，所用的反应原是鼻疽菌素（马来因,mallein ） 。 方法：有5种方法，其中以点眼法最常用，将鼻疽菌素3-4滴滴入马匹一侧眼结膜囊内，分别于点眼后3，6，9，12，24h观察，若眼膜红肿并排出脓性分泌物则为阳性反应。,2血清学检查 方法：补体结合反应。此法特异性高，但敏感性不高，检出马匹多为活动性，对慢性病例只检出10-20%，所以
15、它吸能作为对鼻疽菌素点眼试验阳性动物的附加诊断。,(五）免疫防治 无疫苗：采用全面检疫，检出阳性补杀或隔离。,伪鼻疽伯氏菌（过去叫伪鼻疽杆菌） 引起人和动物的类鼻疽，表现为急性败血症，但也可以是皮肤，肝脏、脾脏淋巴结等处形成慢性的结节或脓肿病灶，与鼻疽相似。,铜绿假单胞菌（绿脓杆菌） 1G极生单鞭毛，运动，有2种菌落，一种为大而光滑边缘平坦，中央凸起的油煎蛋样，另一种为小而粗糙，隆起菌落，临床病料为大菌落，环境分病离株为小菌落。多数菌产生水溶性绿脓素（蓝色）和荧光素（带绿色荧光）。溶血,2抗原性：O，H，粘液抗原，R抗原 3致病性：可产生内毒素，致死毒素，肠毒素，溶血素，杀白细胞素，多种胞外酶广泛引起各种病变。马的流产和化脓性肺炎，牛的下痢，乳腺炎，肉芽肿，子宫炎及流产，人的肺炎，脑膜炎，肠炎。,复习思考题,1 布氏杆菌有哪些种，其致病性如何？ 2 布氏杆菌病的微生物学诊断方法。,
