《{医疗药品管理}杜平华某某某年版药典附录无菌检查和微生物限度检查办法增》由会员分享，可在线阅读，更多相关《{医疗药品管理}杜平华某某某年版药典附录无菌检查和微生物限度检查办法增（87页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法增修定内容,杜平华,起草的指导思想,一、以科学发展观为统领，服务于资源节约型社会、环境友好型社会的要求；落实科学监管理念，着力解决发展中的问题。 二、与时俱进，广泛吸纳先进技术与成果；坚持自主与创新；积极推进药品标准化战略，提高我国药品标准总体水平，着力提升中国药典在国际社会中的地位和作用，提高综合竞争力，促进医药产业的健康发展，为构建社会主义和谐社会作出贡献。,2010年版无菌检查法增修订内容,一、进一步确定了无菌检查法的定义： 无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。 二、进一步明确了无菌检查保
2、障 1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，但采用的措施不得影响微生物的生长。 2 、无菌检查要进行环境检测增加了日常检验还需进行环境检测。 2、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。,三、培养基增修订内容,删去硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的使用范围(用于培养好氧菌、厌氧菌及用于培养真菌) 删去选择性培养基使用的表面活性剂种类对氨基苯甲酸、聚山梨酯-80等。 理由 经验证试验选择适宜的中和剂、灭活剂和表面活性剂,培养基适用性检查增修订内容3、培养基灵敏度试验 删除 菌悬液制备中黑曲霉菌悬液的制备 “（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）”
3、 修改为“用适宜的方法吸出孢子悬液”。 增加在稀释液0.9%无菌氯化钠溶液中加入0.05v/v）聚山梨酯80。,四、试验稀释液、冲洗液增修订为 增加根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。 试验中使用的中和剂、灭活剂和表面活性剂除证明其有效性外还应证明对污染的微生物无影响修改为无毒性。,五、方法验证试验增修订内容,试验菌株 删除铜绿假单胞菌增加大肠埃希菌及大肠埃希菌菌液的制备(同金黄色葡萄球菌)。 薄膜过滤法 供试品用量 将规定量供试品 按薄膜过滤法过滤 修改为取每种培养基规定接种的供试品总量。,六、供试品的无菌检查增修订内容,检验量 直接接种法除另有规定外，每份培
4、养基接种的供试品量按表2、表3规定删除采用直接接种法时的规定。 阴性对照 无菌试验中若使用表面活性剂等应证明其有效性且对微生物生长无影响修改为无毒性。,薄膜过滤法 增加了抗生素供试品滤膜选择的指导应选择低吸附的滤器及滤膜。 若需要冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为100ml，且冲洗量不宜过大修改为总冲洗量不得超过1000ml 。 水溶液供试品 含抑菌成分需用适量的冲洗液冲洗膜修改为所用的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验.,装有药物的注射器供试品 取规定量，删去装上无菌针头.修改为排出注射器中的内容物至无菌容器中，若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，或非水溶性制剂供试品项下方法操作。 无菌气雾
5、剂供试品 供试液的制备将供试品置冰室修改为置至少 -20的冷冻室约1小时。,直接接种法删除内酰胺类或磺氨类供试品。,表1 、表2 、表3增修订,表1 （第3列）接种每种培养基改为所需的最少检验数量 表2 （表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量修改为液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量 第二列每支样品接入每管培养基的最少样品量修改为每支供试品接入每管培养基的最少样品量 第三列最少检验数量（瓶或支）1 全量 0 修改为供试品最少检验数量（瓶或支） 0 注 每种培养基各接种支供试品修改为若供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检验数量加倍。,表3 （表题）将上市抽
6、验样品（固体制剂）的最少检验量 修改为固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量” 第三列最少检验数量、1 全量 0 修改为供试品最少检验数量（瓶或支） 0 注 每种培养基接种支培养基修改为若供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检验数量加倍。,微生物限度检查增修定内容,修改内容,1、培养条件 控制菌培养温度3537修改为3035(细菌、控制菌培养温度相同)。 修改理由 此温度适于所有中温菌生长，一些高温菌在该温度下也可以生长。,增修订内容,2、结果报告 特殊品种可以最小包装单位报告 特殊品种包括 药典规定微量包装药品的检验量可以酌减。 还有一些贵重药品也应考虑检验量。,
7、3、检验量增修订内容,中药膜剂检验量50 cm2 修改为100cm2 。 沙门菌检验量修改为检验量为20 g或20ml并注明（其中10 g用于阳性对照）。,4、供试液的制备增修订内容,供试品检查时使用表面活性剂应证明其对 微生物生长和存活无影响修改为无毒性。 供试液的制备若需加温时，可采用其他经 验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超 过45。,新增贴剂供试液制备,供试液的制备 经验证方法制备成供试液在无菌环境进行。 避免粘贴面粘合在一起。 置于含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）的稀释剂中，制成供试液。 充分振摇。 也可采用以其他适宜的方法制备成供试液。,具抑菌活性的供试品增修订内容,删
8、除应消除供试液的抑菌活性修改为当供试品具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便、快速的方法，应避免损伤供试品中污染的微生物。在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法。,离心沉淀集菌法,两次离心修改为一次离心； 500转/分离心，不超过3分钟，取全部上清液用于检查。 影响因素 供试品 污染菌特性 适用范围 仅使用于微生物限度检查供试液的制备。 尽量避免使用，不可使用快速离心。,细菌、霉菌及酵母菌计数增修订内容,新增计数培养基的适用性检查 菌种 大肠埃希菌（Escherichia coli）CMCC（B） 44102 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC（ B）
9、 26 003 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC（B） 63 501 白色念珠菌（Candida albicans）CMCC（F） 98 001 黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC（F） 98 003, 增加了菌悬液的制备及保存条件。 菌悬液制备后在室温下放置应在2小时内使用，若保存在28可以在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 28，在验证过的贮存期内使用，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，按规定条件培养计数，同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 增加了对照培养。,2.新增常见干扰物的中和剂和灭活方法 参见 表1常见干扰物的
10、中和剂或灭活方法,6、供试品检查增修订内容,平皿法 删去采用平皿法进行菌数测定时，连续23个稀释级的供试液。 修改为按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备。,培养时间修改内容 除另有规定外，细菌培养48小时改为3天，霉菌、酵母菌培养72小时改为 5天，必要时，可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。,菌数报告规则增修订内容,若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。 细菌、酵母菌和霉菌平均菌落数在30300 、30100之间的稀释级修改为选取菌落数小于300cfu和100cfu的稀释级作为菌数报告的依据。,薄膜过滤法增修订内容,新增内容 采用其它
11、直径的滤膜，冲洗量应相应的进行调整（如使用膜直径增大冲洗液量也应相应增加，可保证冲洗液覆盖整个滤膜）。 删去每片滤膜的总过滤量不宜过大，修改为总冲洗量不得超过1000ml。,7、控制菌检查增修订 增加控制菌检查用培养基的适用性检查； 检查项目包括促生长、抑制及指示能力检查参照表2,新增培养基适用性检查方法 液体培养基促生长能力检查。 固体培养基促生长能力检查。 培养基抑制能力检查。 液体培养基指示能力检查。 固体培养基指示能力检查。 试验结果与对照培养基比较,控制菌检查用培养基的适用性检查,控制菌检查用培养基的促生长、抑制及指示能力检查 控制菌检查 培养基 特性 试验菌株 大肠埃希菌 胆盐乳糖
12、 促生长能力 大肠埃希菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 MUG 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌 曙红亚甲蓝 或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌 大肠菌群 乳糖胆盐 促生长能力 大肠埃希菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 乳糖发酵 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌 曙红亚甲蓝 或麦康凯 促生长能力+指示能力 大肠埃希菌,沙门菌 营养肉汤 促生长能力 乙型付伤寒沙门菌 四硫磺酸钠亮绿 促生长能力 乙型付伤寒沙门菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 胆盐硫乳琼脂或沙门、 志贺氏属琼脂培养基 促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌 曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基 促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌
13、三糖铁琼脂 培养基 指示能力 乙型付伤寒沙门菌 铜绿假单 胆盐乳糖 促生长能力 铜绿假单胞菌 胞菌 抑制能力 金黄色葡萄球菌 溴化十六烷基三 促生长能力 铜绿假单胞菌 甲铵琼脂 抑制能力 大肠埃希菌 绿脓菌素测定 用培养基 促生长能力+指示能力 铜绿假单胞菌 金黄色葡 亚碲酸盐肉汤 促生长能力 金黄色葡萄球菌 萄球菌 抑制能力 大肠埃希菌 卵黄氯化钠琼脂促生长能力+指示能力 金黄色葡萄球菌 或甘露醇盐琼脂 抑制能力 大肠埃希菌 梭菌 梭菌增菌培养基 促生长能力 生孢梭菌 哥伦比亚琼脂 促生长能力 生孢梭菌 白色念 沙氏葡萄糖肉汤 促生长能力 白色念珠菌 珠菌 沙氏葡萄糖琼脂 促生长能力+指示能
14、力 白色念珠菌 念珠菌显色培养基 促生长能力+指示能力 白色念珠菌 吐温80玉米琼脂 促生长能力+指示能力 白色念珠菌,控制菌检查法增修订内容,疑似致病菌的确证 微生物控制菌检查中没有规定进一步确证疑似致病菌的方法。选择已被认可的菌种鉴定方法。如伯杰氏细菌鉴定手。 控制菌检查方法验证 删去阴性菌对照组。,大肠菌群检查用胆盐乳糖培养基改为乳糖胆盐。 改梭菌检查用庖肉培养基为梭菌增菌培养基。 改梭菌培养时间7296小时为48小时。,增加了白色念珠菌检验方法,增菌培养 沙氏葡萄糖肉汤培养基。 分离培养 划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。,鉴定试验,典型菌落 沙氏葡萄糖琼脂培养基 菌落呈乳白色偶见
15、淡黄色，表面光滑有浓 酵母气味，时间稍久则菌落增大，颜色变 深、质地变硬或有皱摺。 念珠菌显色培养基 菌落呈绿色或翠绿色菌落生长。,确认试验取1%吐温80-玉米琼脂 培养基培养物进行染色，镜检及芽管 试验。 结果判断 非革兰阳性菌，显微镜下未见厚膜孢子、假菌丝、芽管判未检出白色念珠菌。,新增微生物限度检查法指导原则,一、抑菌剂效力检查法指导原则 二、药品微生物检验替代方法验证指 导原则 三、微生物限度检查法应用指导原则 四、药品微生物实验室规范指导原则,一、抑菌剂效力检查法指导原则,指导原则的目的 是为测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终产品的抑菌效力及生产企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定提供指导。 为防止药品由于微生物污染而引起变质，对服用者造成不良反应，在药品生产过程中加入一定剂量的抑菌剂。 抑
