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1、分子生物学实验课,生物工程与生物技术教研室 2010年11月,主讲人：曾令江 13640581292,内 容 提 要,一、分子生物学实验课程介绍,分子生物学是生物学科中的前言学科，发展速度快，内容更新快，是高等院校生命科学学科的主干基础课，是生命科学中公认的核心学科。,分子生物学实验课，原来附属于理论课程，因其重要性，现已独立成一门单独学科，主要围绕能更好培养学生的动手能力和创新能力。,我院从1997年开始开设本科生的分子生物学课程及其实验课，2006年该课程已列为学校重点课程建设。 大三上期开设，学分1.5，27学时。,二、分子生物学实验课程内容,实验一、DNA的提取及检测 实验二、PCR扩
2、增目的基因及检测 实验三、目的基因片段的回收、连接 实验四、大肠杆菌DH5感受态细胞的制备 实验五、连接产物的转化、筛选及PCR检测 实验六、质粒DNA的抽提、酶切（生工专业选作） 实验七、RNA的抽提与检测（生科专业选作）,技术路线,三、分子生物学实验课课程要求,2、由专人负责收集本实验课的所有中间实验结果，包括电泳图片、照片、电子资料等。,3、安全：人生安全、仪器设备、试剂药品安全。如:离心机、移液器(枪)的使用。,1、根据集中实验课的实际进程安排上课时间，要求准时到实验课堂。,4、清洁：每次实验课结束，各组要收拾整理实验台面、仪器设备、试剂药品等，再由当天值班清洁小组最后收拾整理。,四、
3、分子生物学实验课课程考核,1、本课程为考查科目。总成绩为100分，由考勤、实验过程表现（个人）、小组平时成绩（各实验环节结果）、实验报告四部分组成，分别占总成绩的20、20、 20、 40。,2、实验报告的写作按照毕业论文的格式，包括：标题、中文摘要、英文摘要、文献综述、材料与方法、结果与分析、实验总结（体会）等，每个实验小组提交一份实验报告。,五、分子生物学实验课课程准备,1、清洗培养皿、三角瓶等，包装灭菌。清洗研钵并烘干备用。（5班）,2、分装10ul（白色）、200ul（黄色）、1000ul（蓝色）枪头并高压灭菌（ 2班）,3、分装200ul、10mlEP管并高压灭菌。（2班）,4、配置
4、100mlCTAB抽提液：配方见黑板。（5班）,5、配制LB液体培养基400，LB固体培养基+AMP抗生素600,6、研钵、液氮，抗生素配制等。,实验一：甘薯DNA的提取,采用CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）法提取甘薯DNA，并用琼脂糖凝胶电泳检测所抽提DNA。,收集电泳图片,实验二：PCR扩增adk基因及检测,第一链cDAN的合成用试剂盒 反应体系： 1: DEPC-treated water 9 ul 2: oligo(dT)18 primer 1 ul 3: Template RNA 2 ul 4: 5Raction buffer 4 ul 5: RNase inhibitor 1 ul
5、 6: 10mM Dntp Mix 2 ul 7: MVReverse Transcriptase 1 ul total volume 20ul,反应条件：1: 42-60min; 2: 70 -5min,每个小组做2个50ul体系 反应体系：1：MiniQ H2O 36.5ul 2：10PCR buffer 5ul 3：25mM MgCl2 3ul 4： 10mM dNTP mix 1ul 5：引物1(10M) F-ADK 1ul 6：引物2(10M) R-ADK 1ul 7：Taq(2 to 5 units/ul) 0.5ul 8：模板（cDNA） 2ul 终体积为 50 ul,反应条件： I） 94 5min II） 94 45S 56 45S 72 1min（33个循环） III） 72 8min,实验二：PCR扩增adk基因及检测,胶回收,TIANGEN公司： 普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒-离心柱型 操作步骤按照试剂盒说明做。,回收DNA片段与T载体连接,1、连接体系： T-载体 0.5ul 回收片段 2ul 灭菌蒸馏水 2.5ul Solution 5ul 总体积： 10ul,2、连接条件： 16连接过夜,生物工程与生物技术教研室,Thank You !,
