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1、实验九 抗 酸 染 色,临床病原生物学教研室,一、实验目的： 掌握抗酸染色的原理和方法 掌握结核分枝杆菌痰涂片的结果报告,分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，一般水溶性染料不易进入，所以分枝杆菌一般不易着色且一旦染色后不易脱色，所以要经过加热和延长染色时间来促使其着色。 因分枝菌酸与染料结合后，很难被酸性脱色剂脱色，故分枝杆菌又称抗酸杆菌。,二、实验原理：,三、实验材料： 细菌：结核杆菌 染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液 其它：接种环、酒精灯、载玻片等,四、实验方法 1、细菌涂片的制备 1）涂片：20mm*15mm厚涂片，竹签挑取，涂2-3遍 2）干燥：自然干燥
2、，或火焰 3）固定：火焰固定，必须,2、染 色 1）初染：滴加石炭 酸复红适量，在火焰高处徐徐加热， 切勿沸腾，出现蒸汽暂时离开火焰；若染液蒸 发减少，应再加染液，以免干涸，加热5min （可延长），待标本冷却后用水冲洗。 2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30sec1min至无红色液体 流下，再用水冲洗。 3）复染：用碱性美兰溶液复染1min，用水冲洗后 用吸 水纸吸干。 3、油镜观察,五、实验结果：,1.结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。 2.背景及非抗酸性细菌呈兰色。,六、注意事项：,1、涂片要充分研磨，防止细菌成团 2、涂片大小、厚度要适中 3、固定温度合适 4、初染加热的温度，勿沸腾 5、染色时间 6、冲洗,
