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1、阴道分泌物检查,武汉大学中南医院检验科 周俊英,阴道分泌物检查,阴道分泌物（vaginal discharge） 阴道分泌物是女性生殖系统分泌的液体。 主要有： 分泌物的混合物，俗称“白带”(leucorrhea).,阴道粘液 宫颈腺体 前庭大腺 子宫内膜,白带常规的检查,1、阴道PH值：正常阴道PH值在4-4.5之间，呈弱酸性，可防止致病菌在阴道内繁殖，患有滴虫性或细菌性阴道炎时白带的pH值上升，可大于56。 2、阴道清洁度：一般分为四度，一般、度为正常的，、度提示有阴道炎，即分泌物图片上可以看到大量白细胞或杂菌。 3、微生物检查： 4、胺试验：患细菌性阴道病的白带可发出鱼腥味，它是由存在于
2、白带中的胺通过氢氧化钾碱化后挥发出来所致。 5、线索细胞：线索细胞是细菌性阴道病的最敏感最特异的体征。,微生物学检查,(一) 真菌 阴道真菌多为白色念球菌，可通过性传播，引起真菌性阴道炎。 (二) 淋病奈瑟菌 直接涂片、染色； 淋球菌培养； 凝集法或其他（PCR技术）；,(三) 阴道加德纳菌（ Gardnerella vaginalis ，GV ）,加德纳菌为革兰染色阴性或染色不定的细长杆菌。 加德纳菌以非性行为方式传 播，还可引起孕妇系列病 症。,GV的检验程序,细菌性阴道炎诊断标准, 阴道分泌物呈灰白色， 粘稠，甚至象面糊状， 均匀一致 分泌物pH 4.5 胺试验阳性 湿片检出线索细胞,B
3、V细菌性阴道病快速检测,根据BV患者阴道分泌物中存在的特异性唾液酸酶与特殊的唾液酸酶底物作用, 使该底物迅速水解,加入适当的显色剂后, 发生明显的颜色变化,黄色为阴性,蓝色或绿色为阳性,颜色越深说明酶活性越高。,(四) 衣原体与支原体的检查,是引起性传播疾病常见的病原体，也称非淋病性尿道炎。 检查方法：,(五) 梅毒螺旋体的检查,梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种性传播疾病。 梅毒主要通过三种途径传播：直接接触(性接触传播与非性接触传播) ；间接接触；经血传染 。 血清学方法：非特异性反应素试验 （USR、RPR），特异性的螺旋体抗体试验（TPHA)。,(六) 病毒的检查, 单纯疱疹病毒（HSV）
4、有HSV-I和HSV-II，生殖道感染以 HSV-II为主。 巨细胞病毒（HCMV） 是最常见的先天性感染病毒，孕妇检测HCMV 有重要意义。 人乳头瘤病毒（HPV） HPV有23个型，引起女性生殖道感染的主要有6、11、16、18、 31、 33型。,实验方法与技巧,1滴虫检查：将白带用生理盐水涂片，用高倍镜检查，见到有活动的滴虫为确诊滴虫性阴道炎的依据。阴道滴虫呈梨形，一般比白细胞大2倍，顶端有4根鞭毛借以运动。,注意事项,l检查前24小时避免性生活及阴道冲洗。 2天冷时试管内盐水保持在37度或接近体温，以防滴虫死亡。,实验方法与技巧,2假丝酵母菌检查：取白带用生理盐水涂片，高倍镜检查，镜
5、下多为白色假酵母菌，在湿片中可见到卵圆形孢子，革兰染色可见假菌丝与出芽细胞连接。,实验方法与技巧,3阴道清洁度：将白带用生理盐水涂片， 用高倍镜检查，按阴道杆菌、白细胞、上皮细胞的多少分四度。,实验方法与技巧,4线索细胞：取白带放入装有生理盐水的试管中，制成混悬于盐水中的分泌物涂片，在显微镜下可见大量脱落上皮细胞内粘附大量细小细菌，使上皮细胞呈锯齿状而不清晰，形成所谓的线索细胞（clue cell）。,实验方法与技巧,5沙眼衣原体：检查方法有酶免疫（EIA）、直接荧光素标记抗体法（DFA）、PCR等，EIA特异性强，阳性预期值基本可靠。DFA是应用最多的检测方法之一，荧光素标记抗体和衣原体结合
6、后发出苹果绿色荧光，此法操作简单、特异性强，需要有经验的实验室技术人员完成。 沙眼衣原体胶体金法,沙眼衣原体胶体金法,检验原理：用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜，并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂，应用胶体金免疫层析技术，采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法。,Colloidal gold immunochromatography strip,0755-83376489,主要组成成份,沙眼衣原体抗原快速检测试剂卡； 溶液A 1瓶（含0.2M NaOH溶液，7.5ml）。溶液B 1瓶（含0.2M HCl溶液，7.5ml）。样品处
7、理管。,检验方法,A.处理样品加入6滴溶液A于反应管中。将采样拭子放入含有溶液A的样品处理管中，不断旋转并在管壁挤压拭子，使液体不断被挤出，重复多次，处理2分钟。加入6滴溶液B，旋转并挤压拭子，尽量使液体流出，然后按感染物品的处理方法将拭子丢弃。处理后的样品如在60分钟内使用，并不影响试剂盒的检测结果。注意：用A、B液处理样本拭子滴加的溶液量应相等。,B.检测步骤,将已处理的样品滴加23滴至检测试剂盒的加样孔中，10分钟时可判读结果。 为了确保阴性结果，请勿在15分钟后判断结果。 为保证检测结果的正确性，须做阳性、阴性质控对照品检测。,检验结果的解释,阴性结果：仅质控线（C）有一条红线。 阳性
8、结果： C 和T 都有一条红线。 无效结果：质控线不出现红线。 注意：检测线很强时，质控线可能相对减弱，属正常现象。,实验方法与技巧,6生殖道支原体：取子宫颈管内的分泌物（拭子或刮片）。把标本直接分离接种于支原体鉴别培养基和增菌培养于一组含有指示剂（酚红）和尿素或精氨酸或葡萄糖的培养基中观察其分解反应，是诊断支原体感染的唯一可靠方法。,生殖道支原体,R1 =支原体标本处理液 营养低 仅维持存活 含抗生素 抑制其他菌生长 保存: 2 - 8C 标本采集后, 20 - 25C 45 h内必须转种 2 - 8C 48 h内必须转种,生殖道支原体,R2 = 尿素- 精氨酸冻干肉汤 非平衡营养适合支原体
9、生长 针对性强的抗生素 马血清:富含胆固醇 添加营养素 底物:尿素,精氨酸 pH指示剂:酚红 用3 ml R1溶解 尿素- 精氨酸肉汤 用涡旋振荡器,生殖道支原体,方法,R1,R2,运送,溶解,R1+R2,接种试剂条(55 l) + 2滴矿物油,OUuMhUuMh 104 1044211410.1212,Mycoplasma IST2,37C培养2448 h,生殖道支原体,鉴定 生长对照: 首先判断 如果(+) 观察其他孔 如果(-) 不再判断 1孔鉴定解脲脲原体: 高浓度林可霉素抑制Mh生长 1孔鉴定人型支原体: 高浓度红霉素抑制Uu生长 红色 阳性 (+) 黄色 阴性 (-),生殖道支原体
10、,计数 原理 : 含标准抑制剂浓度104 CCU (颜色变化单位) 结果: 如果标本中菌数等于或大于104 颜色发生变化红色 (+) 计数 104 CCU 黄色 (-) 计数 104 CCU Uu : 结果判断必须在20和24 h Mh : 结果判断在 24和48 h后,生殖道支原体,药敏试验 治疗常用的9种抗生素: 环素类: 四环素和多西环素 大环内酯类: 交沙霉素, 红霉素, 阿奇霉素,克拉霉 喹诺酮类: 氧氟沙星, 环丙沙星 林可酰胺类: 原始霉素 检测 2个浓度: 结果以S, I, 或 R表示,生殖道支原体,结果判断 首先检查尿素- 精氨酸肉汤: 确认肉汤不混浊(污染) 观察颜色 试剂条: 即使颜色由黄色至橙黄色轻微变化也应判断为阳性 除计数孔:阳性结果必须是红色 特殊情况 :,谢谢,
