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1、第八章 体液蛋白质检验,人类白蛋白分子,本章内容概要：,第二节 体液蛋白质测定,第一节 概述,第一节 概 述,机体蛋白质：,体液蛋白质的检测：,机体主要的 生物大分子,含量：人体固体成分的45%,种类：10万，30005000种/单细胞,功能：生长，代谢、血凝、运动、免疫、信息传递等,疾病发生,体液蛋白质异常,一、血浆蛋白质的功能和分类 蛋白质（protein)：是人体内含量和种类最多的物质。有10万多种。 血浆蛋白质（plasma protein):血浆中含量最多的成分。有1000多种。目前已研究的不下500种，其中已分离出纯品的有200多种。,（一）蛋白质概述： 研究进展领域： 生物化学家
2、：分离纯化各种组分。研究其物理性质、氨基酸的组成及其顺序，以及某些蛋白质中结合的 糖、脂类、金属化合物、活性多肽、类固醇激素等，研究其合成、降解、转换更新与代谢调节的研究。 生理学家与病理生理学家；注重蛋白质的生理功能，研究其胶体性质、缓冲性质和生理作用，运输、结合功能等。,血浆蛋白质 具有遗传的变异：如Hp、TFP等在不同的人群中常见有结构上的差异，以及某些蛋白质的缺乏表现出一定的临床症状，具有临床意义；遗传学家利用蛋白质结构上的差异作为研究人群与家族遗传特征的标志。 临床生化检验中，微量蛋白质的检测及其技术的进展，用于诊断各种恶性肿瘤或各种病理变化过程等。 在进化与个体发育的生物化学研究中
3、，已发现有不少正常胎儿时期的蛋白质可以在恶性肿瘤病人中重新出现，如甲胎蛋白。血浆蛋白质合成的调控，如APR的表达与释放，在临床医学中长期受注意而又未完全解决的课题，它与限制炎症过程密切相关。,血浆蛋白质广泛应用于组织和细胞的培养，血浆中含有各总细胞刺激因子和抑制因子，它们对稀薄啊的活力、增殖、分化、胞内酶的合成及细胞特殊功能起者特殊的作用。 在人类不少疾病，包括两种常见的疾病动脉粥样硬化及肿瘤的发病学研究，以及最常见的糖尿病及其并发症的发病机制中，血浆蛋白质均有广泛涉及。,（二）血浆蛋白质的分类 1.电泳分类法 2.功能分类法,1、电泳法：（醋纤膜电泳） 正常人血清的区带电泳结果和扫描图像 从
4、左至右的5个区带依次为白蛋白及1、2、和球蛋白区。有时在慢电泳时球蛋白可分为1球蛋白和2球蛋白。 白蛋白区的成分包括白蛋白、前白蛋白和部分1脂蛋白; 1区包括1抗胰酶蛋白、1脂蛋白、c球蛋白; 2区包括触珠蛋白、铜蓝蛋白、2巨球蛋白等; 1区包括转铁蛋白、补体3、C4等; 2区包括3、 2微球蛋白、Fb; 区包括IgA、Ig、Ig、CRP等。,正常血清蛋白电泳（serum protein electrophoresis,SPE) 正常参考值：Alb:57%-68%1:1.0%-5.7%2:4.9%-11.2%:7%-13%:9.8%-18.2%,2.功能分类法 运输载体类 补体蛋白类 血清酶类
5、 血浆蛋白质 蛋白酶抑制物 免疫球蛋白 凝血蛋白类 蛋白类激素,运输载体类: 血浆脂蛋白 前清蛋白和清蛋白 甲状腺素结合球蛋白 皮质素结合球蛋白 视黄醇结合蛋白转铁蛋白 结合珠蛋白 血色素结合蛋白 铜蓝蛋白,补体蛋白类 补体蛋白C B因子 D因子 备解素,P因子又称备解素（properdin），是替代途径中除C3以外最先发现的一种血浆蛋白。现已探明，P因子以聚合体形式而存在：即三聚体（54%）、二聚体（26%）和四聚体（20%）都有，但特异活性的顺序依次为：四聚体三聚体二聚体。P因子为由4条相同的肽链（分子量各55kDa）组成的四聚体分子，链间以非共价键相连接，分子量为220kDa。P因子的生
6、物学活性是以高亲和力与c 3bBb和C 3bnBb相结合，结合后通过发生构象改变而加固C3b与Bb间的结合力，从而可使其半衰期由2分钟延长至26分钟。另外，P因子还可封闭H因子的抑制作用，更增加了上述两种酶的稳定性及活性，有利于促进替代途径级联反应的继续进行。因此，P因子实际上是替代途径中的一个重要的正调节分子。因其常成为c 3bBb和C3bnBb复合物中的组成成分之一，故将其作为补体系统的固有成分在此一并描述。此外，在膜增生性肾小球肾炎病人血清中发现有一种C3肾炎因子（C3nephritic factor,C3NeF）实际为C 3bBb的自身抗体，也可与C3bBb结合而增加c 3bnBb的稳
7、定性，使其半衰期处长10-30倍。,凝血蛋白类: 14个凝血因子中的13个均为蛋白质。 免疫球蛋白: IgG 、IgA、IgM、IgD、IgE,蛋白酶抑制物 A1-抗胰蛋白酶（a1-AT） A1-抗糜蛋白酶（a1-ACT) A2-巨球蛋白（ a2-MG),血清酶类: 血浆固有酶LCAT、脂蛋白酯酶、凝血酶原、纤溶酶等 蛋白类激素 胰岛素、胰高血糖素、生长素等,3、血浆蛋白质的功能： 营养：其中的氨基酸 缓冲与胶体渗透压：维持血液渗透压 运输：类固醇、甲状腺激素、维生素A、D、脂类、金属、微量元素、药物等； 免疫与防疫功能：免疫球蛋白、补体 凝血与纤溶 酶的特殊功能 代谢调控,（三）影响血浆蛋白
8、质浓度的因素 1、关于血浆蛋白质的正常参考值 A、年龄组的差异 AFP、AGM、a1AT浓度在新生儿期显著高于成人；AlbFibIgG与成人接近。其他成分特别是IgMIgA及C3、C4补体成分均偏低。 对895岁的年龄组分布调查有以下几个特征 Alb在50岁以前保持恒定，50岁以后有下降趋势；AA天灾男30岁、女40后有上升趋势；a1脂蛋白、AAT40后有上升趋势；Hp随年龄增加而增加；AGM在40岁以前随年龄增加而下降，到年老时 由有上升。,B、关于性别差异 男性成人略高于女性的有：Alb、AAT、IgA等 女性略高于男性成人的有：CER、AGM、a1脂蛋白等；在妊娠期明显增高的有：CER、
9、TRF等。 C、个体不同时期的差异及个体间的差异,五种血浆蛋白在个体内与人群间的差异 血浆蛋白 个体内不同时间的变异（CV%） 不同个体间的变异（CV%） 结合珠蛋白 9.5 71 1-酸性糖蛋白 11 42 转铁蛋白 2.5 9 1-抗胰蛋白酶 3 16 2-巨球蛋白 3 17,2、急性时相反应蛋白（acute phase reactants,APR) 概念：在炎症、创伤、心肌梗塞、感染、肿瘤等情况下血浆中浓度显著上升或降低的蛋白质。 升高的有：AAT、AAG、CER、C3、C4、CRP、Flb、hP等 降低的有：PA、Alb及TRF，称为负性APR。,3、类固醇激素,二、血清蛋白质电泳组分
10、的临床分析,1、正常血清蛋白电泳（serum protein electrophoresis,SPE) 正常参考值：Alb: 57%-68%1: 1.0%-5.7%2: 4.9%-11.2%: 7%-13%: 9.8%-18.2%,方法：琼脂凝胶电泳染料：氨基黑,正常血清蛋白电泳图,2、异常血清蛋白电泳 （1）双白蛋白血症型：主要特征：在白蛋白部位有两个区带，光密度计扫描出现双峰，呈剪刀状。 产生原因：双白蛋白血症分为持久型和暂时型两种。持久型主 要是一种家族性血清蛋白异常的疾病，极少见，为 常染色体不完全显性遗传；而暂时型主要是指肾功 能不全的患者在治疗期间使用大剂量的-内酰胺类 抗生素，可
11、形成快泳动性的白蛋白成分，治疗中断 即逐渐消失。,（2）先天性白蛋白缺陷型：主要特征：由于血清白蛋白的显著降低，血清总蛋白也随之降 低，1、2球蛋白明显增高，球蛋白也增高。 严 重无白蛋白血症时，白蛋白有时可降为零。 产生原因：本病是极少见的先天性疾病，可能由于肝细胞内白 蛋白合成功能遗传性缺陷或明显低下所致。该病患 者的白蛋白含量尽管只有正常人的0.05%， 而其血 浆胶渗透压仍为正常人水平的 1/2左右， 这是由于球蛋白代偿性增加所致，如传铁蛋白为正常人的 2 -3倍， 1巨球蛋白为正常人的3.5倍， 脂蛋白为3 倍，IgM为3倍，这时血清白蛋白的半衰期也明显延长， 可为正常人的3-4倍，
12、 对维持血浆胶体渗透压 均有一定作用。,（3）低白蛋白血症型： 主要特征：血清总蛋白浓度明显减低，其中以白蛋白减低为主。 产生原因：由于合成蛋白质所需的氨基酸长期供应不足，以致 血清中的主要成分白蛋白合成减少。常见于慢性营 养失调、肝硬化、肝炎、肾炎、肾病综合症、大面 积烧伤或内分泌紊乱、垂体病等。,检查结果：Alb 44.2%()；1 4.6%(N)；2 14.6%() 18.3%()； 18.3%(N)；慢性肾炎患者。,（4）1球蛋白缺陷型： 主要特征：1球蛋白明显降低，有时可接近零，血清总蛋白及 其它各组分的蛋白通常没有明显变化。 产生原因：此病通常认为是先天性或家族性的，系由于1抗胰
13、蛋白酶合成低下所致。因为血中1抗胰蛋白酶减少 或缺乏，致使血中或组织中的胰蛋白酶活性相对增 加，肺结缔组织破坏亢进，对青年可以发生肺气肿 ，当合并感染时，可见白蛋白减低，但由于1抗胰 蛋白酶减少，即使有炎性病灶，1区带也不增加。,（5）.2球蛋白缺陷型：主要特征： 2球蛋白带有时可轻度减低，其它组分多正常。 产生原因：在此区带出现缺陷的主要有结合珠蛋白、血浆 铜蓝蛋白，分别称无结合珠蛋白血症和铜蓝蛋 白缺乏症。前者极少见，没有特别症状，有时 可伴有轻度贫血。铜蓝蛋白缺陷已知有Willson 氏病，特别在肝、脑和角膜较多。,3、r球蛋白增多与M蛋白 正常SPE中球蛋白区带：IgG；IgM；IgA
14、；IgD；IgE M蛋白是浆细胞或B淋巴细胞单克隆恶性增殖所产生的一种大量的异常免疫球蛋白，因其多见于多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、巨球蛋白血症(macroglobulinemia)及恶性淋巴瘤(malignant lymphoma)，都是以M开头的疾病，故称为“M蛋白”。,特点是区带窄而浓,扫描峰高而尖,基底部窄,在区高与宽的比例2,区则1(正常时小于此比例),其他区带明显减少。,三、血浆蛋白质种类及其异常,1、前白蛋白（prealbumin,PA）：分子量5.4万，由肝细胞合成。在pH8.6电泳中移速比白蛋白快而得名。 功能：营养 半衰期12小时； 运载 结合T3、T4
15、、结合维生素A。 意义：测定其在血浆中的浓度对于了解蛋白质的营养不良和肝功能不全，比白蛋白和TFR具有更高的敏感性，在急性炎症、恶性肿瘤、肝硬化或肾炎时其浓度下降。,2、白蛋白（aibumin,Alb)：由肝实质细胞合成，半衰期1519天，含量最多的蛋白质，占40%60%。在肝细胞中没有贮存。 分子结构1975年阐明，含585个氨基酸残基的单链多肽，分子量66458，含17个二硫键（SS），不含糖的组分。 功能 运载：胆红素、长链脂肪酸、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇激素、金属离子（铜、镍、钙等）； 营养：内源性氨基酸 维持血浆蛋白质胶体渗透压、缓冲酸碱作用。 血液中80的渗透压是由白蛋白承担的。
16、,临床意义 可以作为个体营养状态的评价指标 血浆白蛋白明显减少时，可以影响许多配体在循环血液中的存在形式； 白蛋白增高较少见，在严重失水时，对监测血浓缩有诊断意义；,白蛋白减少在不少疾病时常见：白蛋白的合成减少急性或慢性肝炎；营养不连或吸收不良；遗传性缺陷无白蛋白血症是一种极少见的代谢性缺损，血浆白蛋白含量常低于1g/L，但可以没有症状（如水肿等），可能部分由于血浆中球蛋白含量代偿性升高；组织损伤（外科手术或创伤）或炎症（感染性疾病）引起的白蛋白分解代谢增加；白蛋白的异常丢失肾病综合症、慢性肾小球肾炎、糖尿病、SLE等尿中白蛋白损失，烧伤及渗出性皮炎可以从皮肤丧失大量蛋白质；白蛋白的分布异常门静脉高压引起腹水中有大量蛋白质。是从血管内渗漏入腹腔。 白蛋白的遗传变异：已发现20多中种。,3、a
