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1、病原生物学实验（二）,细菌接种技术,实验目的 1 掌握常用的细菌接种方法 2 熟悉细菌生长现象的观察方法,（一）细菌的分离培养和接种技术,接种工具 接种针和接种环 L型涂布棒 接种环境 接种罩、超净工作台或无菌室内进行。,分区划线,划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂. 第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/41/5. 划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复. 每次划完后应灭菌.,2.斜面接种法： 用于菌种移种，以进一步鉴定 和保存菌种。,3.半固体穿刺接种法：保存菌种或观察细菌的动力和生化反应。 4.液体
2、接种法：用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体培养基的接种。,四种接种方法,将上述已接种细菌的培养基置37恒温培养箱中孵育1824h，观察细菌的生长现象。,（二）细菌在培养基上的生长现象,1. 细菌在固体培养基中的生长现象,菌落 定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。,菌落与菌苔,菌落,菌苔,2. 细菌在液体培养基中的生长现象,浑浊：大多数细菌，如E.c. 沉淀：多见于链状排列的细菌。 菌膜：专性需氧菌（如结核分枝杆菌、枯草杆菌） 。,细菌在液体培养基
3、中的生长现象,菌膜,菌沉淀,均匀浑浊,对照,3. 细菌在半固体培养基中的生长现象,有鞭毛细菌： 在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌： 只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。,细菌在半固体培养基中的生长现象,有动力 现象,无动力 现象,肠道致病菌的分离培养(1),主要内容,（一）肠道杆菌的生物学性状,埃希菌属：大肠埃希菌 沙门菌属：伤寒沙门菌 甲型、乙型、丙型副伤寒 志贺菌属：痢疾志贺菌,肠杆菌科的重要菌属及代表菌种,1.相似的形态染色从形态上无法区别,中等大小的G-杆菌,多有鞭毛、菌毛,乳糖发酵试验,2.活泼的生化反应,初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌,三种细菌的生化反应
4、,（二）SS培养基 （Salmonella Shigella Agar ）,胆盐抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。 中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红。 常用于肠道致病菌的分离培养。,（二）SS培养基,SS培养基中菌落特点,将粪便标本以平板分区划线法接种到SS培 养基。 (每个实验室8个SS平板，每组做好标记，班长用胶布按班级绑好) 放入37温箱中培养24h；取出放4冰箱中保存备用。,（三）粪便标本的分离培养,1.空气中细菌的检查（每个班2个平皿） 原理：根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是
5、分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。 方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放置15min，即盖上皿盖，放入37 培养24小时，观察结果。,细菌在自然界的分布,2.紫外线对细菌的影响 （每个实验室2个培养皿）,取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，打开一半平皿盖，置于紫外灯下照射30分钟，然后盖好平皿，置37培养24h后取出观察结果。,密涂接种,分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。,3. 咽喉部细菌的检查（每班4个平皿） 取血琼脂平板1块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前10cm处，受试者用力咳嗽几次； 盖上平皿盖，置37温箱中倒置培养24h后取出观察结果。,4.化学消毒剂对细菌的影响,方法：取一普通平皿培养基， 一部分写上“前”，另一部分 写上“后”，然后将手指在写 有“前”的部分沾一下，再将 手指用酒精进行消毒，在写 有“后”的部分沾一下。放入 37温箱培养24小时后观察。,（每个实验室4个平皿）,5.自选细菌进行培养(4个),方法：取一普通平皿培养基，用棉签沾取生理盐水后，在手机、台面等物品上擦拭，然后涂布在平板上。,下次实验,细菌的形态学检查 药敏试验 肠道致病菌分离培养,
