《{城乡园林规划}基因工程的基本操作步骤赵莉公开课pptPowerP》由会员分享，可在线阅读，更多相关《{城乡园林规划}基因工程的基本操作步骤赵莉公开课pptPowerP（24页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1.2 基因工程的基本程序,任课教师：赵莉,1、基因工程包括哪些步骤？,3、基因工程中的核心环节是哪一步？,4、基因表达载体导入到受体细胞有哪些方法？,5、目的基因导入受体细胞就会成功表达吗？ 如何检测和鉴定？,2、什么是目的基因？获取的方法有哪些方法？,思考讨论问题：,银烛秋光冷画屏，轻罗小扇扑流萤； 天阶夜色凉如水，坐看牛郎织女星。,基因工程的基本操作程序,一、目的基因的获取,二、基因表达载体的构建,三、将目的基因导入受体细胞,四、目的基因的检测与鉴定,主要是指编码蛋白质的基因,(一）目的基因,目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因
2、等。,一、目的基因的获取,（二）获取目的基因的方法,1、从基因文库中直接获取,2、PCR技术扩增,3、人工合成, 核心,二、基因表达载体的构建,科学家在培育抗虫棉时，起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。,资 料:,然后在插入抗虫基因的质粒中插入抗虫基因启动子，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入抗虫基因终止子，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。,编码区,非编码区,非编码区,启动子,启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基
3、因就不能转录。,RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.,终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。,终止子,编码区,非编码区,非编码区,启动子,终止子,A G G T C A C G T C G,T C C A G T G C A G C,RNA聚合酶,A G G U C A C G U C G,基因表达载体的组成：,b、目的基因,a、启动子,c、终止子,d、标记基因,e、复制原点,1、下列属于获取目的基因的方法的是 利用mRNA反转录形成 从基因组文库中提取 从受体细胞中提取 利用PCR技术
4、 利用DNA转录 人工合成 A. B. C. D.,小试牛刀,2、有关基因工程的叙述中，错误的是 A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶,小试牛刀,3、1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功。请据右下图回答问题。 (1)此图表示的是采取_合成基因的方法获取_基因的过程。 (2) 图中DNA是以为_ _ 模板，形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的目的基因。,人工,目的,控制胰岛素合成的信使RNA
5、,小试牛刀,(3) 图中代表 ， 它往往含 基因，以便对 目的基因的检测。,重组DNA分子,标记,欢迎各位领导老师莅临我校,再见,1、从基因文库中直接获取,（1）基因文库的概念,将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库,含有一种生物的全部基因,只包含了一种生物的部分基因，如:cDNA文库,（2）基因文库的建立方法,提取某种生物的全部DNA,用适当的限制酶酶切,一定大小的DNA片段,将DNA片段与运载体连接,导入受体菌中储存,基因组文库,方法一：直接分离法(鸟枪法),某种生物的单链mRNA,单链互补DNA,双链cDNA片段,
6、导入受体菌中储存,与运载体连接,cDNA文库,反（逆）转录酶,DNA聚合酶,方法二：反转录法-cDNA的合成流程图解,PCR技术聚合酶链式反应,PCR扩增仪,DNA双链复制的基本原理,一段已知目的基因的核苷酸序列,四种脱氧核苷酸,一对引物,热稳定DNA聚合酶(Taq酶）,模板DNA,2、利用PCR技术扩增目的基因,原理：,前提：,原料：,条件：,利用PCR技术扩增目的基因,高温变性,低温退火,中温延伸,1.目的基因DNA受热变性，解链；,2.引物与单链互补结合；,3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。,蛋白质的氨基酸序列,mRNA的核苷酸序列,结构基因的核苷酸序列,目的基因,推测,推测,化学合成,3、人工合成,
