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1、 TS2004-10 美国安伟捷育种公司北京代表处 顾敏清(编译)禽 支 原 体 病败血性支原体(MG)和滑液支原体(MS)是一种没有细胞壁的细菌，可以感染鸡和其它家禽, 在某些情况下引发疾病。 有些感染虽不表现临床症状但仍对生产造成影响，譬如：减少总产蛋/产雏数或降低肉鸡生产性能。败血性支原体(MG)通常更易致病，因而比滑液支原体（MS）对生产造成的影响更大。然而，不同的种类和分离株之间的特性差异很大，包括毒力与动力学血清学反应。疾病的表现（和血清学反应）受其它许多因素如管理，环境和免疫力的影响而不同。支原体导致的临床疾病通常是呼吸道疾病，单纯的感染大体上可见到气囊炎，（见图1）。有时也会见
2、到关节炎，气管炎，窦肿胀和结膜炎，（见图2）。肉鸡感染MG和MS会增加屠宰次品率。父母代种鸡产蛋期感染MG和MS会降低产蛋率，胚胎气囊炎及后期死胚增加（已啄壳的胚胎可看到气囊炎）。在商品蛋鸡中，无临床症状下感染MG预计每只入舍母鸡可减少产蛋10-20枚。图1. 经实验：同时感染MS和传染性支气管炎10天后的气囊炎 在呼吸道病毒，灰尘，氨气和条件性致病菌（如大肠杆菌及类似细菌）的相互作用下，MG和MS都能使呼吸道疾病恶化。这样就导致慢性呼吸道病（CRD）的发生，死淘率有所提高，这通常称之为大肠杆菌性败血症。良好的空气质量和足够的最小通风量具有保护作用。（见图3）。图2. 肉用父母代种鸡野外感染M
3、S并发病毒性关节炎的情形。MS的有些毒株更易引发腿病问题。 MG在许多国家是官方控制与监测的疾病，但MS 则常常由企业自主控制。育种公司会控制MS，但这种控制会减少下一代次的产蛋性能。在商品蛋鸡常常很难控制MS的感染，因为产蛋期间鸡群通常被置于多个年龄的鸡场中，也是其它鸡群转群后留下的感染源。因为邻近的商品蛋鸡有可能就是一个巨大的感染源，所以肉用父母代种鸡群在控制MS的方式方法方面是一个重大问题。自从发现MG在鸡群呼吸道病中的重要性后，家禽业想方设法来生产无MG感染的鸡群。由于MG的垂直传播，传统的诊断方法不能诊断所有感染鸡群，有些感染缺乏临床症状，慢性自然感染的状态以及抗生素无法可靠地消除感
4、染等等使控制MG变得甚为复杂。无细胞壁的支原体意味着它非常脆弱，并且离开鸡体会很快死亡。作用于细胞壁的抗生素如青霉素,头孢霉素对支原体没有效果。支原体对四环素，泰乐菌素，泰妙菌素，喹诺酮类（恩诺沙星）较敏感，但这些抗生素大多数是抑菌性的而非杀菌性的抗生素。抗生素有多种给药途径如注射，饮水或添加于饲料中，大多数药物会产生抗药性。磺胺类药物现已被限制使用。一般来说，抗生素不能根除支原体感染但可以减轻临床症状和减少支原体数量。我们必须认识到鸡群一旦发生感染，这种感染会伴随鸡群整个一生，这样对未感染的鸡群就是一种威胁。为防止垂直传播，原种鸡群就要根除MG和MS并要进行连续监测。无支原体鸡群来源是控制支
5、原体的第一步。败血性支原体（或滑液支原体）大肠杆菌 灰尘、氨气沙门氏菌 呼吸道病毒空气质量差图3. 多种因素的相互影响发展成慢性呼吸道疾病。这样一个模式对控制支原体有助于降低CRD导致的死亡率和其它损失，同时控制其它相关因素也会有作用。如果生物安全控制的非常好就有可能防止水平传播。支原体在鸡群中的感染主要是通过气源性传播，接触其它家禽，人员的机械性传播或者是这些因素共同作用所致。距离能尽可能地保护鸡群免受气源性感染。鸡群与鸡群之间MS的传播距离似乎比MG远的多。与鸡群密切相关的其它禽类如火鸡，珍珠鸡，鹧鸪，野鸡，鹌鹑，鸭等等都是鸡群感染支原体的最大威胁。机械性传播也是可能的：人类鼻孔和头发上携
6、带的支原体可存活三天。洗澡和必要的检疫隔离时间可有助于防止这种传播。某些管理方法如替换公鸡能造成鸡场内传播支原体。必须采取预防措施及检测试验以减少这些管理程序造成传播感染的危险。生物体检测诊断细菌培养和聚合酶链式反应（PCR）试验是目前最好的确诊试验。气管或鼻管棉试放入支原体培养基后送实验室。这种样品或风干的棉试也能进行PCR测定。（见图4）。图4. 干棉试PCR试验取样。 有些家禽支原体是无致病性的，所以培养后进行特异性鉴定对判定问题是十分必要的。可以用特定抗体进行鉴定。培养支原体时培养基中必须有额外的烟酰胺腺嘌呤二核杆酸（NAD）。图5. 支原体菌落具有典型的煎蛋型外观，支原体种类应进行鉴
7、定因为无致病性的支原体也能感染鸡群。支原体培养比较特别，并不是任何地方都能轻易做到。如果在实验室进行PCR试验时不小心会使样品受到污染，就会出现PCR试验假阳性反应。例如，所收集的一日龄苗鸡样品的PCR试验结果阳性，但是种鸡群常规的血清学监测却是阴性，很可能PCR的结果不正确。对PCR试验方案要持怀疑态度。最近的环状试验（试管凝集试验）7家实验室中有5家被报告MG PCR试验有假阳性反应。（图6-PCR试验例子）。图6. 支原体PCR带显示样品中特定的支原体。许多不同的支原体也会产生PCR试验反应,但是,如果不是特定品种,试验结果与临床样品不能确定。血清学监测对鸡群的MG和MS感染情况的日常监
8、测通常采用RSA（快速血清凝集试验），RSA（也被称作平板试验SPA）或ELISA试验。在高风险地区通常建议每3周检测一次，以便发现问题时可以把种蛋从孵化器中取出销毁，免疫接种死苗后3周内不应进行检测因为常常会产生假阳性反应。RSA试验应将血清在72小时之内进行并小心处理样品尽可能减少假阳性反应。对血清进行热处理（56度30分钟）是普遍的操作方法可以使试验时血清反应与滴定更积极。MS和MG都要进行检测，因为新近感染的MS会引起MG假阳性反应。RSA试验出现少量反应时对鸡群进行隔离检疫并且用血清学或PCR重新检测或进行细菌培养以确认结果。当出现大量阳性反应时（热处理后大于15%的样本出现阳性）鸡
9、群很可能真正感染了支原体，应该采取适当的隔离措施并进行确认检测。蛋黄样本可以被用来进行ELISA试验而且比较实用，特别是由于生物安全原因而不能接近种鸡群时。检测一日龄苗鸡的血清尚存在一定的问题，但所有样本试验应进行热处理或假阳性比例明显地超过15%时。不要依赖于一日龄雏鸡的血清检测结果，假阳性的结果非常常见。RSA试验需要全方位的质量控制以确保操作准确，（见图7）。通常抗原应用标准的冻干阳性（和阴性）血清滴定。新批号抗原应该进行检测以确信抗原的特异性是否适合需要。不适合的抗原退还给厂家。图7. 4+血清凝集试验免疫接种对支原体而言，市场上有二种商品化的疫苗活苗和死苗。事实上这二种疫苗都有不同的
10、应用。死苗能在支原体感染时减轻临床症状并可大大地减少垂直传播，但是不能阻止野毒支原体的感染。这样，免疫鸡群会对非免疫鸡群产生一个潜在危害。例如，父母代鸡群免疫后阻止了垂直传播但对肉鸡群的水平传播是很大的风险。死苗的一个有利方面是能够对阳性鸡群进行接种并产生一些有益作用。父母代鸡群感染支原体几乎无症状，所以免疫的鸡群也许看不到任何优势，事实上，六十年代所建议的是用自然免疫来控制育雏期的感染。活苗应在野毒支原体感染大部分鸡群前进行接种。有证据表明这样可以排斥野外菌株的感染并且减少免疫鸡群成为感染源的风险。另外，也可以减轻临床症状并减少垂直传播。在制定支原体活苗免疫程序时必须要了解鸡场支原体感染的流
11、行病学，并至少于野毒支原体感染前一个月进行免疫接种。支原体活苗免疫之前，免疫期间，或免疫后的一段时间内不能使用抗支原体药物。现今世界上广泛使用着二种支原体活：6/85（英特威产品），一种粗雾滴喷雾免疫的冻干苗，和TS-11（澳大利亚生药制品厂，或世界上其他授权单位），发运时用干冰冷冻，点眼免疫。MS-H（澳大利亚生药制品厂）发运时用干冰冷冻，是仅有的一种MS活苗。在支原体爆发比较普遍的地区可以对所有鸡群进行日常免疫，鸡群在产蛋期就不会受支原体感染而使产蛋下降。用同种的抗原进行ELISA试验可以监测疫苗反应，在RSA试验时6/85产生少量的抗体反应，TS-11变异大，但MS-H能产生规律性反应。
12、这些反应可以从一日龄苗鸡中的母源抗体上看到，但抗体应该3周后就消失。清洁与消毒支原体是一种非常脆弱的有机体，除非受湿度和有机物质的保护，否则离开宿主很快就会死亡。所以鸡舍必须进行彻底清扫，先将所有设备全部搬出，而后用洗涤剂清洗，最后进行消毒。要小心处理垫料以避免污染其它鸡场。受污染的垫料在处理之前应该先堆放三个星期。肉鸡生产体系五十年代的粮食生产过剩使肉鸡生产得到突飞猛进的发展并使之成为一个产业。通过五十多年来持续不断的遗传改进，饲养管理及疾病控制，使生产和效益得到最大发挥的技术已日趋完善。现代的生物安全可以作为控制支原体感染的有效措施，使肉鸡生产中的慢性呼吸道疾病减少到最低程度。以往整个世界
13、所使用的肉鸡生产体系大都是大型企业，父母代种鸡场和肉鸡场通通设在一个区域范围内。规模经济、充分利用劳动力和设备驱使着最初的这些设计。遗憾的是这种生产体系很容易被鸡群的病原体利用而使商品肉鸡的健康和生产性能大打折扣。按技术术语来描述，就是众所周知的慢性呼吸道病（CRD）或者有时被称作大肠杆菌病。这些鸡场也许会被称之为“鸡只发病场”。通常这些鸡场在受到病原体感染或病原体发展成有临床症状之前的某段时期内生产还好，然而大约到28日龄时死亡率通常会增加并一直持续到屠宰。从此这些鸡场再也见不到鸡群会有良好的生产性能表现。病原体的积蓄使死亡率大幅度地增加，或死亡率开始提前。尽管使用多种药物，有时短期内死亡率
14、和生产性能会有所改善，但最终的生产性能又变坏。病原体可以通过垂直传播与水平传播。临床调查研究显示：1). 大肠杆菌和类似细菌逐渐对抗生素药物产生同步抗药性。ORT（鼻气管鸟疫杆菌）也可能被发现。2). 有MG或MS的存在，对抗生素也会产生抗药性。3). 多种呼吸道病毒包括NDV，IBV，APV（TRT肿头综合症）及有时ILT也会被发现。这些当中有的可能是疫苗毒。4). IBDV或马立克也可能是其中的一部分。5). 其它因素包括灰尘，不恰当的湿度，空气质量差（不适当通风产生的氨气及其它气体），冷或热应激以及不良的卫生条件等也可能存在。考虑到CRD的流行病学与发病机理，最初由呼吸道病毒或空气质量差
15、损伤呼吸道，支原体感染使这种情况进一步加重。随着情况发展，外加大肠杆菌感染，鸡群就发生死亡。 另外，剩下的鸡群均匀度差。极端的环境温度使有效的通风系统变为无效。必须根据鸡群的体重来确定和调整最小通风量。通常不要求对大规模的临床工作进行细菌、支原体的药敏试验和PCR监测病毒试验。简单的生物安全措施就可以阻止病原体连续的水平重复感染并可以永久地消除细菌。生物安全措施就是无条件地隔离鸡只与病原体如细菌、病毒或寄生虫。“全进全出”意味着把鸡只与病原体一起清除，除非它们很难清除（例如球虫病、IBD或马立克病），清除鸡群也是清除支原体和呼吸道病毒，因为这些病原体离开宿主存活时间不长。鸡场中只有一个年龄的鸡群也不会使疫苗毒在鸡群与鸡群之间传代而造成毒力返强危害以后的鸡群。控制人员、设备、汽车等流通也能控制病原体的传播。如果不能绝对控制这些病原体的传播，可以通过免疫接种来帮助控制潜在的危险。感染造成的后果常常与发病的数量和时间息息相关。鸡只发病时间越晚产生的问题越少，因为鸡只的组织器官比以前发育的更加完善，或者疫苗接种后也许产生一定的免疫力。病原体通过水平传
