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1、生化分离1. 动物脏器DNA提取实验中，加入NaCl-SSC缓冲液的原因？ 答：形成等渗液 PH中性，维持DNA稳定 抑制DNA酶活2. 动物脏器DNA提取实验中，如何鉴定分析DNA的纯化？答：当A260/A280=1.8DNA最纯 ，2.0混有RNA， 1.61.8较纯3. DNA提取实验中，加氯仿-异戊醇的作用是什么？震荡离心后，分几层？每一层的主要成分是什么？答：使核蛋白质变性、乳化；分三层；上层为DNA和核蛋白的水层，中层为变性蛋白凝胶，下层为氯仿二异戊醇的有机溶剂层。4. 在DNA提取时，RNP（脱氧核糖核蛋白）是如何去除的？答：用氯仿一异戊醇剧烈震荡10min，使其乳化，然后离心除
2、去变性蛋白。5. 茶叶咖啡因提取实验中，加生石灰的作用？答：吸水 吸收单宁酸 使提取液受热均匀（热缓冲）6. 索氏提取和传统提取有何不同？答：传统提取耗时，效率低。索氏提取利用溶剂回流、虹吸原理，反复多次纯萃取，减短提取时间，节省材料，效率高。7. 茶叶咖啡因提取的原理是什么？答：利用咖啡因易溶于乙醇，易升华等特点，以95%乙醇作溶剂，通过索氏提取、浓缩、焙炒、升华得到纯化咖啡因。8. 离子交换柱层析实验中，离子交换剂为什么要进行预处理？答：使离子交换剂充分溶胀 酸碱除杂 把活性离子（反离子）转型为cl。9. 离子交换柱层析实验中，TCA和丙酮的作用是什么？答：在PH在3.50.2时，TCA：
3、使杂质蛋白变性，多得黏蛋白。丙酮：沉淀黏蛋白10. 离子交换柱层析实验中，加TCA后，为什么要将PH调3.5？答：TCA变性能力与PH值密切相关；PH，TCA变性能力减弱；PH，TCA变性能力增强 当PH在3.5时，黏蛋白是最稳定的，卵清蛋白等杂质蛋白不稳定易沉淀，可得到相对较纯的黏蛋白。11. 离子交换柱层析实验中，为什么要维持PBS的PH在6.5？答：黏蛋白的PI值约3.4，小于6.5，蛋白质带负电，又由于大多杂蛋白PI值约为10，不易于转型的离子交换剂交换而被洗脱PH6.5时利用交换剂与蛋白结合程度不同而把它们分离开来，达到纯化的目的。12. 请画出离子交换柱层析分离鸡蛋卵黏蛋白的预期实
4、验结果图，并对该图作合理分析。答：分析：第一个波峰：稀土ode杂蛋白；第二个波峰：目标蛋白洗脱13. 简述大蒜SOD提取中，SOD活性测定原理。答：邻苯三酚在碱性条件下自氧化释放O2，生成有色中间产物，初始阶段中间产物积累在滞留3045s后，与时间成线性关系（4min内），在420nm有强烈吸光值。当SOD，它催化O2与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止中间产物积累，因此，通过计算可求出SOD酶活。14. 栀子黄色素提取实验中，吸附前为什么滤液PH调制3？答：藏红花素结构中带R-COOH，在溶液中发生电离R-COOH=（可逆符号）R-COOH，将PH调至3时，溶液中的H+增多，反应向逆向进行
5、，使藏红花素不被电离15. 栀子黄色素提取实验中，如何鉴定栀子黄色素中栀子苷的去除情况？答：根据吸附前后A238/A440比值确定，比值越变越小，去除就越来越干净。当比值小于0.2时，可以避免变绿现象。 16.栀子黄提取实验中，说明D101树脂的性质以及主要吸附何种物质？答：D101性质：疏水性、非极性、聚合物吸附剂，具有较大表面比与合适孔径。主要吸附藏红花素。 17.反胶团萃取甘薯中的淀粉酶的实验中，反胶团萃取的主要步骤是什么？答：甘薯中淀粉酶提取（切块、搅碎、抽滤）反胶团系统制备前萃取（取上层）反萃取（取下层）淀粉酶活测定 18.反胶团萃取甘薯中的淀粉酶的实验中，简述淀粉酶活性测定的原理？答：一定量淀粉酶在适宜条件下会分解淀粉产生还原糖，用DNS测还原糖A540光吸收量，从而求得酶活 19. 反胶团萃取甘薯中的淀粉酶的实验中，反萃取中加入pH4.0 3MKCl溶液有何作用？答：破坏水池外的水膜和表面活性剂极性头，使蛋白质又回到水相中，从而分离纯化。 20反胶团萃取甘薯中的淀粉酶的实验中，简述反胶团萃取的原理？答：表面活性剂在有机相中自发形成反胶团，其内部有稳定的水池，蛋白质溶解于小水池中，其周围有一层水膜及表面活性剂极性头的保护，使其避免与有机溶剂接触而失活。改变PH、盐浓度等条件蛋白质又可回到水相（反萃），实现了蛋白质的萃取分离、纯化的目的。
