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1、第七章 苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析,安徽医科大学 陈纭 QQ:29583133 手机：13856020743,具有收缩血管、升高血压、舒张支气管等药理作用，临床用于升压、平喘、充血治疗等，应用广泛。 具有碱性的脂肪乙胺侧链，易被氧化 结构特点 苯环上有活泼的酚羟基取代 代表药物： 拟肾上腺素类药物,第一节 结构与性质,R,1,C,H,C,H,N,H,R,2,O,H,R,3,*,拟肾上腺素类药物,常见的苯乙胺类药物,常见的苯乙胺类药物,硫酸沙丁胺醇,常见的苯乙胺类药物,盐酸克仑特罗(瘦肉精 ),主要性质 1、酚羟基特性 多数药物苯环上有酚羟基； 肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素
2、等分子结构中苯环的3，4位上都有2个邻位酚羟基 与重金属离子络合呈色 置空气中或遇光易氧化变色 在碱性溶液中更易变色 发生三氯化铁反应,2、弱碱性 烃氨基侧链，氮为仲胺氮，显弱碱性，游离碱溶于有机溶剂，难溶于水；而盐能溶于水 3、具手性碳原子， 旋光性 4、苯环上的取代基可供分析用 5、有紫外吸收与红外吸收特征,第二节 鉴别试验 一、与铁盐的反应,二、与甲醛-硫酸反应 与甲醛-硫酸试液反应，形成具有醌式结构的有色化合物。可用于区别同类药物。,三、氧化反应,碘、过氧化氢、铁氰化钾,具有酚羟基,例：盐酸异丙肾上腺素,加硫代硫酸钠使过量碘的棕色消失,溶液显淡红色,H+,例:肾上腺素 例:重酒石酸去甲
3、肾上腺素 (与异丙肾上腺素和肾上腺素区别),肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素可被氧化产生明显的红棕色或紫色,在pH为6.5的条件下，是无法区分,H2O2,肾上腺素红 显血红色,H+,棕色多聚体,是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱（盐酸伪麻黄碱）、盐酸去氧肾上腺素鉴别：,四、氨基醇的双缩脲反应,盐酸麻黄碱,显蓝紫色,乙醚,醚层紫红色,水层蓝色,CuSO4+NaOH,盐酸去氧肾上腺素溶液,CuSO4试液,NaOH试液,显紫色,加乙醚振摇,醚层不显色,与盐酸麻黄碱区别,五、脂肪伯胺的Rimini实验 分子结构中含有脂肪伯氨基的化合物，显脂肪族伯胺专属的Rimini显色反应 例：,丙酮中不能含有甲
4、醛,六、紫外特征吸收与红外吸收光谱 中国药典规定利用紫外特征吸收与红外吸收光谱可以用来鉴别苯乙胺类药物。 例：盐酸异丙肾上腺素可采用其水溶液 (浓度为0.O5mg/ml)在280nm处的吸收度为0.50，进行鉴别;盐酸异丙肾上腺素亦采用红外吸收光谱进行鉴别。,第三节 特殊杂质的检查 一、酮体检查 杂质来源：原料残存（氢化不完全） 检查范围：肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素等药 检查原理：利用酮体在310nm处有最大吸收，而药物本身在此波长几乎没有吸收。 检查方法 吸收度法 例：以重酒石酸去甲肾上腺素为例。,例：重酒石酸去甲肾上腺素,2.0mg/ml， 310n
5、m处测定， A0.05，酮体的限量0.05%,二、光学纯度的检查 中国药典采用比旋度法进行光学纯度检查。（表7-5） 目前常用的方法：液相色谱法和毛细管法,三、有关物质的检查 盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇TLC 盐酸苯乙双胍-PC 盐酸氨溴索HPLC 采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查,盐酸氨溴索的检查方法 对照样品制备：本品供试品溶液对照溶液 供试样品制备：本品甲醇溶解加甲醛溶液加热吹干溶剂用水和流动相溶解HPLC分析 色谱条件：RP-HPLC 0.01mol/lNH4H2PO4-CH3CN (50:50); 248 nm 分析：对照溶液主成分峰为满量程的2025%，记录至主成分峰保留
6、时间的2倍，注入供试品溶液，如有杂峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积的三分之一。,Main peak,第四节 含量测定 原料药:非水溶液滴定法、溴量法、亚硝酸钠法 制剂:紫外分光光度法、比色法和高效液相色谱法等。 (一)非水溶液滴定法 原料药,脂烃胺基侧链，显弱碱性 测定条件:用冰醋酸做溶剂，加入醋酸汞试液消除氢卤酸的干扰，并以结晶紫指示液指示终点，0.1mol/L的高氯酸作滴定液。 同时作空白试验。,（一）酸碱滴定的局限 酸碱滴定是在水溶液中进行的 溶剂-水 局限性： (1)许多弱酸或弱碱, Ka或Kb小于10-8，不能直接滴定 (2)有些有机酸或有机碱在水中溶解度小，使滴定不能直接
7、准确进行,(3)-些多元酸或碱，混合酸或碱由于Ka(Kb)值较接近，不能分步或分别滴定。 非水滴定法：非水酸碱滴定，氧化还原滴定，配位滴定及沉淀滴定等,（二）非水溶剂 1、溶剂分类 （1）质子溶剂 能给出质子或接受质子的溶剂，称为质子溶剂。 酸性溶剂 按接受质子的能力大小，可分为 碱性溶剂 两性溶剂,酸性溶剂 给出质子的能力较强的溶剂，称为酸性溶剂。如甲酸、冰醋酸、丙酸等是常用的酸性溶剂。 适于作滴定弱碱性物质的介质。 碱性溶剂 能接受质子的溶剂称为碱性溶剂。如乙二胺、乙醇 胺、丁胺等为常用的碱性溶剂。碱性溶剂适于作滴定弱酸性物质的介质。,两性溶剂 既易接受质子又易给出质子的溶剂称为两性溶剂。
8、 特点：溶质是较强的酸时，溶剂显碱性 溶质是较强的碱时，溶剂显酸性 种类有：醇类;如甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇等 两性溶剂(或与极性小的溶剂混合)适于作滴定不太弱的酸、碱的介质,（2）无质子溶剂 分子中无转移性质子的溶剂称为无质子溶剂 偶极亲质子溶剂 溶剂分子中无转移性质子，与水比较几乎无酸性亦无两性，但却有较弱的接受质子的倾向和程度不同的成氢键的能力。,种类：酰胺类、酮类、乙腈、二甲基亚砜、吡啶等皆是。 其中二甲基甲酰胺、吡啶和二甲基亚砜的碱性较明显，成氢键的能力较丙酮、乙腈强。 适于作弱酸或酸强度不同的混合物的滴定介 二甲基酰胺和吡啶也常被认为是碱性溶剂。,惰性溶剂 溶剂分子本身几乎无酸碱
9、性，不参与溶质酸碱反应，也无成氢键的能力，这种溶剂称为惰性溶剂 种类：苯、甲苯、氯仿等 惰性溶剂常与质子溶剂混合使用，以改善样品的溶解性能，增大滴定突跃，从而使终点时指示剂变色敏锐,（三）溶剂的选择 对供试品的溶解能力要大，并能溶解滴定产物 (2) 能增强供试品的酸碱性，而又不引起副反应 (3) 溶剂应能使滴定突跃明显。降低溶剂的介电常数()，能使滴定突跃明显。 溶剂的极性大小是以介电常数为判断的，介电常数大的极性大，介电常数小的极性小。 (4) 考虑使用完全、价廉、粘度小、挥发性低、易于回收和精制等。,（四）基本原理非水碱量法,(五)一般方法 具弱碱性，在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴
10、定液直接滴定，以指示剂或电位法确定终点。并用空白试验校正 （六）问题讨论 1、适用范围： 主要用于Kb10-8的有机碱盐 例：Kb在10-810-10时，选用冰醋酸做溶剂 Kb在10-1010-12时，选用冰醋酸和醋酐的混合溶液做溶剂 Kb在10-12时，选用醋酐做溶剂,2、酸根的影响 在醋酸介质中的酸性排序为： 高氯酸 氢溴酸 硫酸 盐酸 硝酸 例：氢卤酸盐 结论： 加入的醋酸汞量不足时，会影响滴定终点而使结果偏低 过量的醋酸汞(理论量的13倍)并不影响测定的结果,磷酸盐：直接滴定 硫酸盐：硫酸为二元酸，但在非水介质中只显示一元酸解离为HSO4，目视终点灵敏度较差，电位突跃也不明显，用大量醋
11、酐代替冰醋酸，为溶剂，可以提高终点的灵敏度 硝酸盐：硝酸会使指示剂退色，用电位滴定法指示终点,3、标准溶液的稳定性 （1）配制和标定 注意：冰醋酸和高氯酸的除水 标定用邻苯二甲酸氢钾作基准，以结晶紫为指示剂 （2）温度的校正 水的体积膨胀系数较小 ，0.21*10-3/ 冰醋酸的体积膨胀系数为1.1*10-3/ 要求：温差超过10 ，重新标定 温差未超过10 ，按公式校正,4、终点指示法 电位法和指示剂法 在以冰醋酸作溶剂，用高氯酸酸滴定弱碱时，最常用的指示剂是结晶紫，其酸式色为黄色，碱式色为紫色。 特点： 在不同的酸度下，变色较为复杂，由碱区到酸区的颜色变化为紫、蓝紫、蓝绿、绿、黄 在滴定不
12、同强度的碱时，终点颜色不同 滴定较强碱时，以蓝色或蓝绿色为终点 滴定较弱碱时，以黄绿色或黄色为终点,(二)溴量法 盐酸去氧肾上腺素 、重酒石酸间羟胺原料药采用溴量法测定含量。 例：以盐酸去氧肾上腺素为例讨论溴量法 原理：,操作要点 (1) 操作过程中必须防止逸失 (2)溴液不能太过量: 过量：溴代反应中会引起酚羟基的氧化或溴化 一般加入的溴液以过量2%为宜 (3)进行空白试验：校正操作中溴及碘的可能逸失,盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂,三、提取酸碱滴定法,依据性质,游离碱不溶于水，易溶于有机溶剂,方法一：,方法二：,硫酸苯丙胺的含量测定：,BH2SO4 + NaOH + NaCl,乙醚,提取B
13、,+ H2SO4,蒸去乙醚,终点,四、紫外分光光度法和比色法 利用药物分子结构中的芳伯氨基进行重氮化偶合反应，以及分子结构中的Ar-OH与Fe3络合显色，进行比色测定。 分之结构中的苯乙胺结构采用紫外法测定 分子结构中的酚羟基可与亚铁离子络合显色 分子结构中的芳伯氨基进行重氮化反应显色 用于制剂的含量测定,五、高效液相色谱法 例：重酒石酸去甲肾上腺素注射液 离子对反相高效液相色谱法 内标法定量 调节溶液pH为3.8，加入离子对试剂十二烷基磺酸钠,六、亚硝酸钠法 例：盐酸克伦特罗原料药含量测定,其它分析技术与方法,高效毛细管电泳法用于饲料中盐酸克伦特罗与沙丁胺醇含量的测定 毛细管：75 m(i.
14、d) 50 cm，有效长度39 cm，未涂层石英毛细管柱(河北永年锐沣色谱器件有限公司)；缓冲液：60 mmolL的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲溶液，pH为6.32；分离温度25；分离电压12 kV；检测波长200 nm；压力进样：3.4 kPa , 20 s实验前，依次用0.1 molL的NaOH溶液、水和缓冲溶液冲洗毛细管5、2、2 min，两次进样间用缓冲溶液冲洗2 min,空白饲料,盐酸克伦特罗,沙丁胺醇,练习与思考,A型题,1盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B. 间氨基酚 C.水杨酸 D.对氨基苯甲酸 E. 氨基酚 2对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B. 间氨基酚 C. 对氨基酚 D.苯甲酸 E.苯酚 3肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B. 间氨基酚 C. 对氨基酚 D.酮体 E. 苯甲酸,B型题,A。硫酸铜反应 B.氧化反应 C. 还原反应 D.水解后重氮化-偶合反应 E. 重氮化-偶合反应 1. 盐酸利多卡因 2. 肾上腺素 3. 盐酸普鲁卡因 4对乙酰氨基酚,A,B,E,D,练习与思考,
