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1、微生物检验标本的采集,青岛兰信医学检验所刘奉亭,1. 为感染的诊断提供依据 2. 为抗感染治疗提供参考 3. 临床流行病学调查 微生物检验的一个重要功能就是进行细菌耐药监测，以指导临床合理使用抗生素，并制定合理的用药方案。,临床微生物检验的主要功能,微生物检验的作用,标本采集的重要性,正确采取、处理与运送细菌培养标本是细菌检验成功的关键，是微生物检验分析前质量控制的重要内容。 若标本采取或处理不当，造成污染，导致错误的检验结果，给临床造成误导，会延误对患者的正确治疗，造成严重后果。,发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查。 尽量在抗菌药物使用前采集标本。 标本采集时应严格执行无菌操作，避免污
2、染。 标本采集后应尽快送至实验室以提高检出率。 盛标本容器须经灭菌处理。 送检标本应注明来源和检验目的，以便选用相应的培养基和适宜的培养环境，必要时应注明选用何种抗菌药物。,标本采集和运送的基本原则,一、血培养送检指征,1发热（38）或低温（36） 2怀疑有菌血症或脓毒症如休克、寒颤 3白细胞10 109/L 4血小板减少 5皮肤粘膜出血 6昏迷 7多器官衰竭 8严重的局部感染 9呼吸频率加快等,血培养采集的时机,尽可能在用抗菌药物前； 尽可能在寒战时或发热高峰前1小时采集血液，这个时候是菌血症细菌入血的高峰期。,血液标本采集 多次采集：成人一套血培养应包括一个需氧瓶和一个厌氧瓶，儿童厌氧菌感
3、染比较少见，只用一个需氧瓶。菌血症患者病原菌周期性出现于血液中，病原菌浓度处于相当低的水平，因此一次血培养应在30-60分钟内于不同部位采集23 套血培养（每一套标明采血位点），以提高检出率。如果培养48h以后为阴性，若临床怀疑为菌血症的应在24h内再连续采集三次血培养标本。 血量：成人每瓶量8-10ml；儿童3-5ml；婴儿1-2ml。,： 采集方法 选择静脉和穿刺点，75%酒精从中心点向外旋转消毒皮肤，再用碘酊按同样方法消毒，待干后用用酒精棉球擦去碘迹； 去除培养瓶封帽，用75%酒精棉球消毒橡皮塞 (不可用碘酒消毒) ，放置60秒待干； 用无菌棉棒清除橡皮塞子表面剩余的酒精，用采血针采集需
4、要血量注入瓶中，轻轻颠倒混匀； 采集后立即送检，不能立即送检的于室温保存，不可冷藏。,血液注入顺序,1.如果用无菌针管抽 采血量够20毫升：先打入厌氧瓶再打入需氧瓶（因为有的厌氧菌在有空气的情况下很容易死亡） 采血量不够20毫升：先打入需氧瓶，满足需氧瓶10毫升的血量，剩下的打入厌氧瓶。 2.如果用真菌采血的软管，应先采集需氧瓶。,血培养阳性的临床意义,1.培养出革兰阴性菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌等时，多数可以确认为病原菌； 2.培养出凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、芽胞杆菌等时，感染？污染？,二、脑脊液培养标本的采集,采集对象及时间：疑为细菌性或真菌性骨髓炎的患者；疑为伤寒感染的患者；最好
5、是在应用抗生素之前采集脑脊液。 采集方法：无菌腰穿采集脑脊液3-5ml，分装到3个无菌小瓶中（各1-2ml）。用于细菌和病毒检测时脑脊液量不少于1ml；用于真菌和抗酸杆菌检测脑脊液量不少于2ml。 注意事项：如不能及时送检不可冷藏，天气寒冷应注意保温送检，以免病原菌死亡影响检出率。,13,三、其他无菌体液的采集,临床常用于培养的无菌体液包括胸腔积液、腹水、胆汁、心包积液、关节液、鞘膜液等。无菌体液细菌培养的价值远高于有菌部位标本。 采集时间： 抗生素使用前 停止用药1-2天后 下次用药前 血药浓度较低时抽取,无菌体液的采集方法 2%碘酊充分消毒皮肤，用注射器以无菌操作方法抽取或引流体内可疑感染
6、部位的体液； 标本采集量应1ml。胸腔积液、腹水可抽取10 ml, 心包液、关节液等可抽取25 ml 。 标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检，也可将抽取液直接注入血培养瓶送检。 注意事项：不能立即送检时于室温放置，不得冷藏，勿以拭子送检。,14,四、尿标本的采集采集指征,(1)有典型的尿路感染症状； (2)肉眼脓尿或血尿； (3)尿常规检查白细胞或亚硝酸盐阳性； (4)不明原因的发热，无其他局部症状； (5)留置导尿管的患者出现发热； (6)膀胱排空功能受损； (7)泌尿系统疾病手术前。,尿标本的采集（1）,（1）清洁中段尿：嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗阴部，再用清水冲洗尿道
7、口周围；开始排尿，将前段尿排去，中段尿约10-20ml直接排入专用的无菌容器中，及时送检和接种。 （2）耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法，但有一定的痛苦患者难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难婴儿的尿标本采集。,尿标本的采集（2）,(3)直接导尿：按常规方法对会阴局部进行消毒，用导尿管直接经尿道插人膀胱，获取膀胱尿液，可减少尿液标本的污染。但有可能将下尿道细菌引入膀胱，导致继发感染。 (4)留置导尿管收集尿液：利用留置导尿管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操作时应防止混入消
8、毒剂，注意不能从尿液收集袋中采集尿液。 长期留置导尿管的患者应在更换新管后留取尿标本。 注意事项：如不能及时送检不可冷藏。,五、痰及下呼吸道标本采集(1),1 自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或用牙刷（不用牙膏）清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒中，标本量应1ml。咳痰困难者可用雾化吸入加温至45C的10% NaCl水溶液，使痰液易于排出。对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。,痰及下呼吸道标本采集(2),2 支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法，均由临床医生按
9、相应操作规程采集，采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。其中气管穿刺法仅用于昏迷患者。 3 小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。,痰及下呼吸道标本检查注意事项,对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2 3天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变； 如不能及时送检，应将标本暂存于4，但放置时间不可超过24h。运输时勿置于冰块中。,六、分泌物、脓汁的采集,开放性脓肿：以无菌生理盐水或75%酒精拭去溃疡表面渗出物，抽取脓液至于无菌杯中送检；或用无菌棉签擦取溃疡基底分泌物后
10、放入无菌试管送检； 封闭性脓肿：碘酒消毒皮肤黏膜表面，穿刺中心部位抽取3-10ml注入无菌容器或血培养瓶送检。深部脓肿在送需氧培养的同时应考虑送厌氧培养，厌氧培养标本应隔绝空气送检； 脓疱或水疱：以75%乙醇消毒、干燥，用针头挑破，拭子采集疱液和基地层细胞标本送检； 瘘管内脓液：先用灭菌棉拭子挤压瘘管弃去前端脓液，再收集脓汁。,注意事项,烧伤创面、脓肿标本不应采集表面或表皮组织； 不提倡采集烧伤或动物咬伤12小时内的伤口，除非存在感染指征； 当创伤出血时，敷用药物2h以内不应采集标本，此时获得阳性结果的机会很少。,七、粪便标本采集的时间,腹泻病人在急性期用药前采集；沙门菌感染、肠热症应在2周内
11、采； 胃肠炎在急性期6h内采集新鲜脓血便。 有腹泻的病人，在送培养标本的同时可以送细菌涂片检查。抗生素相关性腹泻，培养是阴性，但涂片检查却可以看到细菌比例失调，涂片临床意义大于培养。,粪便标本的采集方法,自然排便法：挑取脓血、粘液便2-3g，液体便采集絮状物2-3ml，置于无菌杯中送检； 直肠拭子法：将无菌拭子用生理盐水湿润后插入直肠4-5cm处（幼儿2-3cm）在肛门括约肌处柔和旋转，见到拭子上明显带有粪便插入无菌试管送检。 注意事项： 除排便困难外，不推荐使用拭子； 标本不能混入尿液，消毒剂或者化学药物； 腹泻患者建议多次送检以确定致病菌。,八、咽拭子标本的采集,目的：培养和鉴定引起咽炎的
12、病原菌，不能反映下呼吸道感染的情况。 方法：标本采集应在用药前，最好在清晨，嘱患者用清水漱口，由检查者将舌向外拉，使悬雍垂向外牵引，将咽拭子超过舌根到达咽后壁或悬雍垂的后侧，在咽部肉眼见明显发红或有假膜处、两侧腭弓、咽后壁或两侧扁桃体反复涂抹，应避免接触舌部和口腔粘膜，消毒试管口，将拭子插入试管，塞紧送检。,九、生殖道标本采集方法(1),宫颈分泌物：无菌拭子插入宫颈口1-2cm并旋转一周，停留大约10s取出，放回无菌试管送检； 阴道分泌物：拭去过多分泌物，以无菌拭子采集，放入无菌试管送检； 女性尿道分泌物：先拭去尿道口渗出物，以无菌拭子插入尿道在耻骨联合处按摩尿道，放入无菌试管送检； 男性尿道
13、分泌物：清洗尿道口，以无菌拭子插入尿道2-4cm旋转后停留20s，取出拭子放入无菌试管送检；也可用挤压方法从尿道口挤出渗出物，以拭子送检；,前列腺分泌物：以肥皂水和清水清洗尿道口及附近皮肤，直肠按压按列腺获取分泌物以无菌杯采集或用无菌拭子送检； 盆腔感染标本：在后穹窿通过穿刺采集标本。 注意事项：恶露标本不作为培养标本。,生殖道标本采集方法(2),十、组织标本的采集,采集时间： 浅表皮肤黏膜：使用抗生素前采集 深部组织：手术室后内窥镜检查时采集 采集方法： 无菌操作留取标本于无菌杯中送检 注意事项： 严格无菌操作，少量标本应滴加无菌生理盐水保持湿润。,小 结,微生物标本在标本采集前、中、后必须保证无菌，否则无法真实客观地反应病人情况。 只有保证标本采集的质量，才能为提高微生物及其药敏检测的准确性，为及时、有效地治疗提供实验室依据。 标本采集后的保存和运输同样重要，保存不当或运输过程中造成污染，都会导致错误的检验结果。,微生物培养还应注意的问题,1.培养阳性的分离菌不一定是真的病原菌，特别从有菌部位来的，如痰标本； 2.无菌部位培养出来的病原菌应当连续监测，若病原菌发生改变或治疗效果不佳时应考虑更换抗生素； 3.细菌的耐药性在治疗过程中可能会发生改变，要注意观察是否有耐药性的变迁。,THE END,THANK YOU,
