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1、1,第六章 黄酮类化合物,2,黄酮的含义：,经典含义: 以二苯基色原酮衍生的一类化合物的总称，由于该类化合物大多呈淡黄色或黄色，且分子中多具酮基，因此称为黄酮。,3,黄酮的含义：,现代含义: 泛指二个苯环（A环和B环）通过三个碳原子相互连接而成的一系列化合物的总称，即具有C6-C3-C6结构的一类化合物的总称。,4,第一节：结构和分类,C6-C3-C6结构（黄酮） 依：三碳链的氧化程度 三碳链是否构成环 3-位羟基取代与否 B-环连接位置(2、3-位),6,黄酮醇 二氢黄酮醇,二氢槲皮素（5，7，3，4-四OH二氢黄酮醇） 二氢桑色素（5，7，2，4-四OH二氢黄酮醇）,山柰酚（5，7，4-三
2、OH黄酮醇） 槲皮素（5，7，3，4-四OH黄酮醇） 杨梅素（5，7，3，4，5-五OH黄酮醇）,7,紫檀素 鱼藤酮,异黄酮 二氢异黄酮,大豆素（7，4-二OH异黄酮） 大豆苷（大豆素-7-O-glc苷） 葛根素（7，4-二OH，8- glc异黄酮苷）,8,查耳酮 二氢查耳酮（+）儿茶素,红花苷,梨根苷,9,黄烷-3-醇 黄烷-3，4-二醇,（+）儿茶素,无色飞燕草素,10,花色素 橙酮,硫磺菊素（6，3，4- 三OH橙酮）,飞燕草苷元,11,讪酮（双苯吡酮 ) 高异黄酮,异芒果素,12,木脂素黄酮（水飞蓟素）,13,第二节 黄酮类化合物的理化性质,一、性状 1：形态：多为结晶性固体，少数为无
3、定形粉（苷） 2：颜色： 多为黄色 交叉共轭体系（电子转移、重排，共轭增强，产生颜色的基础） 助色团（给系统提供电子，使颜色加深，尤其7，4-位，辅助作用）,14,有 交叉共轭体系 无 黄酮（灰黄黄色） 二氢黄酮 黄酮醇（灰黄黄色） 二氢黄酮醇 查耳酮（黄橙黄色） 二氢查耳酮 花色素类（颜色随pH而改变） 黄烷醇类 异黄酮（无或微黄色） 二氢异黄酮 红色（pH 8.5）,15,二、旋光性：,旋光性 取决于 不对称碳原子的有无 有 无,16,有 无 所有黄酮苷（糖） 游离黄酮 游离黄酮 黄酮 二氢黄酮 黄酮醇 二氢黄酮醇 异黄酮 二氢异黄酮 查耳酮（二氢） 黄烷醇 类橙酮 花色素类等,（2-位）
4、 （2，3-位） （无）,17,三、溶解性：符合苷的溶解性规律,水 甲醇 乙醇 乙酸乙酯 氯仿 乙醚 稀碱水 -+ + + + + + +（酚羟基),1.游离黄酮,游离黄酮 取决于 分子的立体结构 取代基团的性质、数目、连接 位置。引入羟基数目多， 7、 4-位，水溶度较大。羟基甲基 化（-OCH3）, 水溶度降低。,18,平面型分子 非平面型分子 黄酮 二氢类（C-环半椅式结构） 黄酮醇 异黄酮（羰基与B-环立体障碍） 查耳酮 分子间排列不紧密， 交叉共轭 水分子易于进入 水溶度小 水溶度大,R=OH 二氢黄酮醇 R=H 二氢黄酮,19,水 甲醇 乙醇 乙酸乙酯 氯仿 乙醚 稀碱水 + +
5、+ +- - - +,黄酮类化合物溶解性（极性）规律:,三糖苷 双糖苷 单糖苷 苷元 3-O-糖苷7-O-糖苷（平面性分子） 花色素(平面性分子,离子型)非平面性分子 平面性分子,2 .黄酮苷(亲水性),20,四、酸碱性,1酸性 酸性 来源 影响 酚羟基（数目、位置） 酸性规律： 7，4-OH酸性强于其他位置羟基的酸性（处于 羰基对位，羰基的共轭诱导）。 5-OH酸性最弱（处于羰基邻位，形成分子内氢键） 酚羟基数目越多，酸性越强。,21,7，4-OH 7或4-OH 其他位-OH 5-OH NaHCO3 + - - - Na2CO3 + + - - NaOH + + + +,应用,pH梯度法分离
6、（游离黄酮）,22,2.碱性：,-吡喃酮环1-氧原子,微弱碱性（孤对电子，接受质子）,仅溶于强的、浓酸+水 （浓硫酸）,烊 盐（呈色） 应用,23,初步鉴别黄酮母核类型： 黄酮、黄酮醇 黄-橙色，并有荧光 二氢黄酮 橙红（冷）、紫红（热） 查耳酮 橙红-洋红 异黄酮（二氢） 黄色 橙酮 红-洋红,应用,24,五、显色反应 1还原显色反应,反应类型 鉴别特征 鉴别意义 备注,盐酸-镁粉 黄酮、二氢黄酮 红-紫红 黄酮类特征性 假阳性 反应 黄酮醇、二氢黄酮醇 红-紫红 鉴别反应 （花色素） （最常用） 查耳酮、橙酮（-） 儿茶素类、异黄酮（-）,25,四氢硼钠 二氢黄酮（醇） 红-紫红 二氢黄酮
7、类特有 还原反应 其它黄酮类（-） 钠汞齐反应 黄酮、二氢黄酮 红 异黄酮、二氢异黄酮 红 黄酮醇类 黄-淡红色 二氢黄酮醇类 棕黄色,反应类型 鉴别特征 鉴别意义 备注,26,2.与金属盐类试剂络合反应,反应类型 鉴别特征及鉴别意义 备 注,三氯化铝 3-OH，4-C=O 黄色 PPCTLC （AlCl3） 5-OH，4-C=O 鲜黄色荧光 邻二酚羟（4或7，4黄酮醇，天蓝色荧光） 氨性氯化锶 邻二酚羟基 绿、棕乃至黑色 (SrCl2),27,锆盐 枸橼酸 锆盐-枸橼酸 3-OH或3，5-二OH 黄色 黄色不褪 PPC (ZrOCl2) 5-OH 黄色褪去,示,示,反应类型 鉴别特征及鉴别意
8、义 备 注,三氯化铁 酚羟基紫、蓝、绿(FeCl3),28,3.硼酸显色反应,5-羟基，4-羰基黄酮 黄色，绿色荧光 硼酸 （草酸液）（H3BO3） 6-羟基，4-羰基查耳酮 黄色，无荧光 （枸橼酸）,反应类型 鉴别特征及鉴别意义,29,4.碱性试剂反应,反应类型 鉴别特征及鉴别意义 备 注,氢氧化钠溶液 黄酮 黄 - 橙色 查耳酮、橙酮 红 - 紫红 二氢黄酮 黄 - 橙色（冷） 深红紫红（较长时间或加热） 黄酮醇 黄色 棕色,母核类型鉴别,O,30,稀氢氧化钠 邻三酚羟基黄酮类 邻三酚羟基鉴别 （暗绿蓝绿色纤维状） 氨蒸气或 颜色变化 TLC、PPC 碳酸钠溶液,反应类型 鉴别特征及鉴别意
9、义 备 注,31,五氯化锑 (SdCl5)： 查耳酮特征性显色反应 (红或紫红色沉淀) 黄酮、二氢黄酮、黄酮醇类呈橙色。,5与五氯化锑反应,32,6其他显色反应,Gibbs反应：酚羟基对位活泼质子的特征 （蓝或蓝绿色）,33,黄酮类成分的存在状态（游离 溶剂法 溶剂的选择 苷）及溶解性 溶剂的溶解性能 提取方法（煎煮法、渗漉法、回流法等）的选择,第三节 黄酮类化合物的提取、分离 一、提取方法 溶剂法,关键,选择依据,34,溶剂 提取原理 游离黄酮 黄酮苷 备注,乙醇 溶解范围广 + + （甲醇） 苷、苷元均可溶 （90-95%） (60%）甲醇毒性大 沸水 多糖苷易于水 + 成本低、安全, 水
10、溶性杂质多 碱性水或 稀氢氧化钠溶出能力强 碱性乙醇 酚羟基的酸性 + + 石灰水除杂质效果好,35,二、分离方法,（一）溶剂萃取法 分离依据： 黄酮与杂质 苷与苷元 之间的极性（分配系数K）差异 苷元与苷元,36,分离工艺： 原料的提取浓缩液（水溶液） 依次以石油醚、乙醚、 乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取 石油醚液 乙醚液 乙酸乙酯 水饱和正丁醇 母液 （脂溶性杂质） （水溶性杂质) 回收 回收 减压回收 苷元 单糖苷 多糖苷,37,（二）pH梯度萃取法 分离依据： 游离黄酮类化合物的酸性差异（见黄酮酸性规律） 分离工艺：,总游离黄酮的乙醚液 依次以5%NaHCO3 、5%Na2CO3、 0.2
11、%NaOH、4%NaOH萃取 5%NaHCO3液 5%Na2CO3液 0.2%NaOH液 4%NaOH液 母液 酸化 （脂溶性杂质）7，4-OH黄酮 7或4-OH黄酮 一般-OH黄酮 5-OH黄酮,38,（三）柱色谱法,吸附原理 异黄酮、二氢黄酮（醇）、 氯仿-甲醇不同比例 （105， 高度甲基化或乙酰化黄酮（醇） 混合溶剂洗脱 活化） （极性小）,分配原理 多羟基黄酮醇或黄酮苷类 氯仿-甲醇-水 （加水失活 或不活化） （极性大） （80 ：20 ：1）等比例,1硅胶柱色谱,39,2聚酰胺色谱,（1）原理： 氢键吸附 吸附规律：与黄酮类化合物酚羟基的数目、位 置及介质（溶剂）等有关。 酚羟基
12、数目越多，吸附能力越强。 酚羟基数目相同的情况下，酚羟基所处的位置有利于形成分子内氢键，吸附能力减弱。 3-OH或5-OH黄酮的吸附力小于其他位置-OH黄酮； 邻二酚羟基黄酮的吸附力弱于间位或对位酚羟基黄酮,40,分子内芳香化程度越高，吸附力越强。 查耳酮 二氢黄酮 黄酮醇 黄酮 二氢黄酮醇 异黄酮 与介质的关系：吸附力 水（中） 甲醇、 乙醇（浓度由低到高） 碱性溶剂,洗脱规律：与吸附规律正好相反，即吸附能 力越强，越难洗脱（薄层Rf越小）,41,（2） “双重色谱”原理,主要用于解释黄酮苷与苷元聚酰胺色谱现象 正相色谱 反相色谱 聚酰胺：极性固定相（极性酰胺基团） 非极性固定相（非极性脂肪
13、链） 洗脱剂：有机溶剂（氯仿-甲醇，极性小） 含水溶剂（甲醇-水，极性大） 先洗脱：游离黄酮（苷元，极性小） 苷（极性大）（柱色谱分离） Rf值： 苷元 苷 苷元 苷（TLC色谱鉴别） 上述规律也适用于黄酮类化合物在聚酰胺薄层上的行为,42,3氧化铝柱色谱 很少应用，具有3-OH或5-OH、4-羰基及邻二酚羟基黄酮类化合物与铝离子络和而被牢固吸附，难于洗脱 4 . 葡聚糖凝胶柱色谱 类型： Sephadex G型（亲水性凝胶） Sephadex LH-20型 (羟丙基葡聚糖凝胶，水 及极性有机溶剂均可),43,原理： “双重色谱”原理 分子筛作用 吸附原理 （按分子大小分离） （按极性大小分离
14、） 应用：黄酮苷及苷元的分离 苷元的分离 洗脱顺序：分子由大到小被洗脱 极性由小到大被洗脱 叁糖苷 双糖苷 单糖苷 苷元 1-OH 2-OH 3-OH 4-OH 5- OH黄酮,44,常用洗脱剂： 碱水（0.1mol/L NH3.H2O） 盐水（0.5mol/L NaCl） 醇或醇水不同比例。 6高效液相色谱法（HPLC） 适用于各种黄酮类化合物的分离 原理：反相柱色谱（黄酮类化合物极性大） 固定相：ODS 流动相：水-乙晴不同比例,45,第四节 黄酮类化合物的检识,一、理化检识 1.颜色：多呈黄色 2.母核检识：盐酸-镁粉反应-黄酮、黄酮醇、 二氢黄酮、二氢黄酮醇（+） 四氢硼钠反应-二氢黄
