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1、天然药物化学实验须知 （一）实验要求 （二）实验室规则 （三）实验室安全注意事项 （四）实验报告格式,实验一 药用植物化学成分的提取 一 实验目的 1 了解天然药物成分的分析方法 2 掌握预实验的实验技术 二 实验原理： 1 单项预试法：寻找特定成分。 2 系统预试法：在未知情况下对可能含有的各类成分进行全面检查。,三 实验步骤： 1 制备样品试液 （1）石油醚提取液 挥发油、油脂、甾醇三萜 （2）乙醇提取液 黄酮内酯、生物碱、酚类香 醇、萜类内酯、强心苷、鞣质、有机酸 （3）水提取液 氨基酸、多肽、蛋白质、糖类、皂苷有机酸 2 选择合适的展开系统 3 薄层层析 取长春花粉末20g,加70%乙
2、醇150ml加热回流0.5h,抽滤，滤液减压浓缩至浸膏。 展开系统： 氯仿：甲醇=10：1,实验 二 薄层层析及中药成分预实验 一 实验目的： 1 了解薄层层析的原理及应用。 2 掌握薄层层析的实验技术。 二 实验原理 薄层色谱即TLC，属固液吸附色谱，利用吸附剂（硅胶）对不同组分吸附能力的差异，从而达到分离目的的方法。 三 TLC的应用 1 可用于判断两个化合物是否相同。 2 可用于确定混合物中含有的组分数。 3 可用于为柱色谱选择合适的展开剂。 4 可跟踪有机反应。,实验三 硅胶柱层析 一 实验目的 1、 了解硅胶柱层析的原理。 2 、掌握硅胶柱层析的技术。 二 实验原理 硅胶柱层析属吸附
3、色谱，是利用吸附剂硅胶对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂洗脱，以使组分分离。,三 实验步骤 1 装柱 湿法：量取一定量体积的洗脱剂（V0），倒入色谱柱中，然后，将硅胶放置于烧杯中，加入一定量的洗脱剂搅拌至无气泡，加入柱内，并将活塞打开，一边沉降一边加，直到加完硅胶，仍使洗脱剂流滴一段时间，使色谱柱中高于硅胶的溶剂几乎全部留入接收瓶中，正确计量接收器中的溶剂量（V1），计算色谱柱的保留体积（V0-V1） 2 上样 干法： 称取一定量硅胶（色谱柱中硅胶量的10%），置于蒸发皿中，用滴管慢慢加入样品溶液，用滴管慢慢加入样品溶液，边加边搅拌，待硅胶已完全被样品溶液湿润时，在水浴锅上蒸除溶剂，蒸除溶剂后
4、的吸附有样品的硅胶在1000C加热除去水分，,3 洗脱 样品加完后打开活塞放出液体至柱面相同时，加入洗脱剂至液面高出柱面约10cm,在柱面上加入一个小滤纸片，再加2cm厚的硅胶，再加一团脱脂棉。 洗脱剂：石油醚：乙酸乙脂：=3：1 洗脱收集：每份洗脱液按30ml收集 显色合并：,槐花米中芦丁的提取分离,实验目的,通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理与操作。 了解苷类结构研究的一般程序和方法 了解UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用,实验原理,芦丁溶于热水，难溶于冷水，且分子具较多酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶，在酸中易析出沉淀，故可采用碱提酸沉法提取芦丁。,实验方法,1、芦
5、丁的提取、精制,槐米粗粉（40g）,置1000ml烧杯中，加水600ml，搅拌下加入石灰乳，调pH89，加热至微沸，保持30分钟，趁热抽滤。,残渣,滤液,在6070下用浓盐酸调 pH45，静置1小时，抽滤,沉淀（粗品芦丁）,滤液,粗品芦丁,将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15min，趁热 抽滤,残渣,滤液,在6070下用浓盐酸调 pH45，静置1小时，抽滤,芦丁精品,注： 加石灰乳时pH不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出； 加热过程中须不断补充蒸发掉的水分，以保持pH89； pH过低会使芦丁形成盐而降低产率； 可利用芦丁在冷热水中溶解度差别来达到结晶目的。得到的沉淀要粗称一下，
6、按芦丁在热水中1：200溶解度加蒸馏水进行重结晶。,2、芦丁的鉴定,（1）芦丁的定性反应： 取芦丁34mg，加乙醇56ml使溶解，分成三份做下述试验。 取上述溶液12ml，加2滴浓盐酸，再酌加少许镁粉注意观察 颜色变化情况。 取上述溶液12ml，然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录 颜色变化情况。 取上述溶液12ml， 加等体积的10%萘酚乙醇溶液，摇匀， 沿着管壁滴加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色变化,思考题,苷类结构的鉴定大体程序如何？ 怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O-上？ 怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖？,大黄中蒽醌类成分的提取分离,实验目的,1掌握
7、PH梯度萃取的原理及操作技术； 2掌握蒽醌类化合物鉴定方法； 3.了解液液萃取法分离混合物的实验方法；,实验原理,利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质互异的蒽醌类成分提取出来； 总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得总提取物可用乙醚提取总苷元； 根据蒽醌衍生物的酸性强弱，用不同的碱液进行萃取，最后得到不同的蒽醌苷元。,实验方法,1、大黄中总蒽醌成分的提取分离,大黄粗粉100g,置1000ml 圆底烧瓶中，加入95%乙醇250ml，回流提取2hr，趁热抽滤,醇液,药渣,加入95%乙醇200ml，回流提取1.5hr，趁热抽滤,醇液,药渣,乙醇提取液,静置冷却，抽滤,滤液,减压回收乙醇至糖
8、浆状，将浓缩物转移至250ml三角瓶中,乙醇总提物,放冷，加入乙醚60ml冷浸，振摇20将乙醚液倾入500ml三角瓶中,乙醚层,浸膏,40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15）,乙醚层,浸膏,乙醚总提液,2、游离蒽醌的分离,乙醚总提液,5%NaHCO3水溶液萃取3次，每次40、30、30ml，至水层颜色变浅,乙醚层,碱水层,5%Na2CO3水溶液萃取3次，每次40、35、35ml,碱水层,乙醚层,2%NaOH水溶液萃取3次，每次30ml，,乙醚层,碱水层,滴加HCl酸化，静置沉淀，抽滤，水洗至中性，干燥,沉淀I，大黄酸,酸化，抽滤水洗，干燥,沉淀 大黄素,酸化，抽滤水洗，干燥,沉淀 大黄素甲醚、大黄酚,3、蒽醌类化合物的检识,（1）薄层鉴别 吸附剂：硅胶 展开剂：石油醚-正己烷-苯-甲酸乙酯-甲醇-水 （25：75：5：35：6：25） 显 色：紫外灯下观察，斑点为黄色,（2）呈色反应 滴加2%NaOH水溶液，观察颜色变化 滴加0.5%醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化 滴加浓硫酸数滴，观察颜色变化,思考题,PH梯度萃取的原理是什么？ 大黄中各蒽醌化合物的酸性及极性强弱顺序如何？ 根据大黄中所含五种羟基蒽醌的结构，说明为什么它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？,
