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1、A b s t r a c t:T h e f e e d i n g e x p e r i m e n t a n dt h e d i g e s t i o nt r i a l w e r e c o n d u c t e dt o e v a l u a t et h en u t r i t i o nv a l u eo f p i g l e t d i e t f e r m e n t e d b yL a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u mN 3 F L Fo nw e a n i n gp i g l e t s . T
2、h ep r o d u c t i o np e r f o r m a n c e , s e r u mb i o c h e m i c a l p a r a m e t e r , h i s t o l o g i c a l p a - r a m e t e r a n da p p a r e n t d i g e s t i b i l i t y o f n u t r i t i o nc o m p o n e n t s w e r e d e t e r m i n e dt o d i s c u s s t h e a f f e c t i n g m
3、e c h a n i s m s o f L a c t o b a c i l l u s p l a n - t a r u mN 3 F L Fo nt h e p e r f o r m a n c e o f w e a n i n g p i g l e t s . K e yw o r d s:L a c t o b a c i l l u s p l a n t a r u mN 3 ; w e a n i n g p i g l e t s ;p r o d u c t i o np e r f o r m a n c e E f f e c t o f L a c t o
4、 b a c i l l u s P l a n t a r u mN 3 F L Fo nt h e P r o d u c t i o nP e r f o r ma n c e o f We a n i n gP i g l e t s L I U J i n p i n g 1 , WA N G S h i c h a n g 2 ( 1 . V e t e r i n a r y R e s e a r c hI n s t i t u t e , G u a n g d o n g A c a d e m y o f A g r i c u l t u r a l S c i e
5、n c e s , G u a n g z h o u5 1 0 6 4 0 , P R C ; 2 .C o l l e g e o f A n i m a l S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y , G u a n g x i U n i v e r s i t y , N a n n i n g 5 3 0 0 0 5 , P R C) 溶菌酶 (L y s o z y m e) 是一种能够水解细胞壁成分 中N -乙酰胞壁酸与N -乙酰葡萄糖胺之间的 - 1,4糖苷键的酶,在作用时可观察到溶菌现象,因 此而得名。溶菌酶化学性质非常稳定,当p H值
6、在 1 . 2 1 1 . 3的范围剧烈变化时,结构几乎不变。在酸 性环境下溶菌酶对热的稳定性很强,p H值在4 7,1 0 0处理1m i n仍能保持原有活性。溶菌酶广 泛存在于卵清、唾液、生物液体中,动物组织、植 物组织、微生物中也有溶菌酶的存在。溶菌酶本身 是一种无毒、无害、无残留,安全性很高的天然蛋 白质。近几年随着研究的不断深入,发现来源不同 的溶菌酶,其作用机制也有所不同。本试验采用不 同来源的溶菌酶进行体外抑菌试验,通过对金黄色 葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌观察及与常用抗生素的 初步比较,可为溶菌酶在畜禽疾病治疗、促进生长 等方面的应用提供参考。为了加强其溶菌作用,将 溶菌酶与中草药
7、提取液制成复合制剂,检测复合制 剂中溶菌酶的活力,为进一步开发应用提供依据。 1 !#$% 1 . 1材料 1 . 1 . 1溶菌酶 溶菌酶1:根据张文全 1 的方法提取鸡蛋清溶 ?,BCD1 5 0 0 3 0 ;2 . 456789 :;F9G,BCD1 5 0 0 3 0 ; 3 . IJKLM6N89 OP9G,IJK 8Q1 6 3 3 1 9 ) ST:将溶菌酶与中草药提取液配制成复合制剂,测定复合制剂中溶菌酶的活力。结果与单一溶菌酶活力 比较差异不显著 (P 0 . 0 5) 。用不同来源的溶菌酶对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行体外抑菌试验,并与常用抗生 素进行比较。结果溶菌酶对金
8、黄色葡萄球菌抑菌效果明显,与青霉素钠及硫酸丁胺卡那霉素比较无明显差异。溶 菌酶对大肠杆菌的抑菌效果因来源不同而有所差异。 UVW:溶菌酶;活力测定;抑菌试验 XYZ:Q 5 5 ;Q 8 1 4 _a:A bc:1 0 0 1 - 0 0 8 4(2 0 0 6 ) 1 0 - 0 0 0 5 - 0 3 ! fg? -5-饲料博览2 0 0 6年第1 0期 菌酶,自市场购买新鲜鸡蛋。 溶菌酶2:购于杭州康源技术开发有限公司。 1 . 1 . 2中草药提取液 取自制的中草药1 0 0g加水1 2L,浸泡3 0 m i n煎煮,煮沸后文火继续煎3 0m i n,滤出煎液, 共煎2次,合并滤液,最
9、后将药液用文火浓缩至 1 0 0m L(药液中生药含量为1gm L - 1 ) ,装瓶,高压 灭菌备用。 1 . 1 . 3溶菌酶复合制剂 将溶菌酶1和溶菌酶2与中草药提取液配制成 复合溶菌酶制剂1和复合溶菌酶制剂2。 1 . 1 . 4金黄色葡萄球菌及大肠杆菌 金黄色葡萄球菌3株、大肠杆菌2株由东北农 业大学微生物实验室提供。 1 . 1 . 5牛肉膏琼脂培养基 蛋白胨1 0g、牛肉膏3g、琼脂粉1 7 . 5g、氯 化钠5 g、蒸馏水10 0 0m L。将除琼脂以外的各成 分溶于蒸馏水内,加热煮沸,过滤。加入1 5 %氢 氧化钠溶液约2m L,校正p H值7 . 4 7 . 6。加入琼 脂
10、粉,使琼脂溶化。烧瓶中分装,1 2 1高压灭菌 1 5m i n后备用。 1 . 1 . 6试剂 D 1 5 2弱酸性阳离子交换树脂 (南开化工厂) ,青 霉素钠 (哈药集团制药总厂,8 0万I U 支- 1) ,硫酸丁 胺卡那霉素 (齐鲁制药有限公司,2 0万I U 支- 1) ,蛋 白胨、牛肉膏、琼脂粉 (上海化学试剂公司) ,溶菌酶 标准品 (哈尔滨奕博尔科技有限公司,2万I Um g - 1 ) , 溶 壁 微 球 菌(M i c r o c o c c u sL y s o d e i k t i c u s菌 种 编 号 1 . 0 6 3 4) 购于中国科学院微生物研究所菌种中心
11、, 化学试剂皆为国产分析纯。 1 . 1 . 7仪器 高效液相色谱仪,7 5 2分光光度计,超净工作 台,真空冻干机,电热恒温培养箱,电热鼓风干燥 箱,压力蒸气锅,摇床,电子天平,电子显微镜等。 1 . 2方法 1 . 2 . 1溶菌酶的活力测定 采用文献 2 的方法。将溶菌酶及其复合制剂 用0 . 1m o lL - 1磷酸钾缓冲液 (p H = 6 . 2 ) 稀释至适当 浓度,以一定浓度的溶壁微球菌悬浮液为底物,加 入待测酶液0 . 5m L,于4 5 0n m的波长下测吸光度 的变化。以每毫克溶菌酶每分钟使吸光度降低 0 . 0 0 1个单位为一个酶活力单位U。 1 . 2 . 2试验
12、用菌液的制备 分别取大肠杆菌标准株、金黄色葡萄球菌标准 株接种于牛肉膏斜面培养基上,3 7培养,2 4h 后进行涂片,革兰氏染色,镜检,确定菌株。将斜 面上的菌接种到营养肉汤中,3 7培养2 4h,比 浊管比浊,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌含量分别为 4 8亿个 m L - 1 ,3 0亿个 m L - 1 ,4 冰箱保存备用 3 。 1 . 3抑菌试验 采用平板打孔法检测药物对试验用菌的作用效 果。在直径9c m的无菌平皿中加入1m L菌液, 倒入冷却到5 0溶化的牛肉膏琼脂培养基1 5m L, 充分混匀。待琼脂凝固后,用外径6m m的无菌金 属管在琼脂上等距离打孔3个,并挖出孔内琼脂培 养基,
13、然后于每孔中滴加少量0 . 5 %琼脂封底。于 每孔中各自加入不同种及不同浓度的药物0 . 0 5 m L。将平皿置于3 7温箱内培养2 4h后取出。 用游标卡尺测量抑菌圈的大小。抑菌试验的分组方 法见表1。 1 . 4试验数据的处理 显著性检验采用t检验。 2 ! 2 . 1溶菌酶活力测定结果 2 . 1 . 1溶菌酶的定性检测 分析高效液相色谱仪的检测图,溶菌酶标准品 出现吸收峰值的时间为4 . 7 5m i n,自制鸡蛋清溶菌 酶出现吸收峰值的时间为4 . 2 0m i n,溶菌酶标准品 与自制鸡蛋清溶菌酶出现最高峰的时间极为接近, 证明为同一种物质。自制的鸡蛋清溶菌酶与所购买 的溶菌酶
14、标准品比较,出现峰值的区间是一样的, 但是自制的鸡蛋清溶菌酶的基线却始终在零线的上 方,说明提取的溶菌酶中还存在一些杂蛋白。 2 . 1 . 2溶菌酶活力测定 溶菌酶活力测定结果见表2。复合溶菌酶制剂 的酶活力与单一溶菌酶酶活力比较差异不显著 (P 组别抑菌剂 1青霉素钠 2硫酸丁胺卡钠霉素 3中草药提取液 4溶菌酶1 5溶菌酶2 # 1 $% a c t i v i t y d e t e r m i n a t i o n ; a n t i b a c t e r i a l t e s t 组 别 抑菌剂 抑菌圈直径 金黄色葡萄球菌大肠杆菌 1青霉素钠 (10 0 0I Um L - 1 )2 7 . 6- 2硫酸丁胺卡钠霉素 (4 0 0I Um L - 1 )2 6 . 32 3 . 6 3中草药提取液1 8 . 51 7 . 1 4溶菌酶1(50 0 0Um L - 1 )1 9 . 31 0 . 1 5溶菌酶2(50 0 0Um L - 1 )2 1 . 21 5 . 5 4 3 56789 (;?A -7-饲料博览2 0 0 6年第1 0期
