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1、,血细胞分析仪原理及散点图临床应用,一、血细胞各通道分析原理及散点图分析 二、散点图案例分析,一、血细胞各通道分析原理及散点图分析,血细胞分析仪提供了大量的警示信息和可供参考的研究 参数，如直方图，DIFF散点图， NRBC散点图等。实验人员可根据这些信息从大量的标本中挑出需要重点关注的,进行涂片复检确认，提高工作效率，减少漏诊率。,DIFF WBC/BASO NRBC,半导体激光 荧光染色（聚次甲基+噁嗪 ）,主要原理,FSC前向散射光：细胞大小 SSC侧向散射光：复杂程度（细胞的颗粒 和细胞核等内含物的信息） SFL侧向荧光：核酸含量（DNA 、RNA),DIFF通道分析原理,4DL(阴离
2、子表面活性剂）, ,完全溶解RBCPLT 在WBC膜上打孔,溶血素中加入有机酸，与嗜酸粒细胞内的碱 性蛋白粘附，使Eo颗粒的复杂程度增加，在 SSC显示复杂程度是最大的。,4DS 对核酸染色 纵坐标：侧向荧光（SFL） 反映核酸含量 横坐标：侧向散射光（SSC） 反映细胞内部复杂程度 化学粘附,大分子有机酸与嗜酸 粒细胞中的碱性颗粒 发生化学粘附,嗜酸粒细胞,大分子有机酸,RNA/DNA荧光染色原理,成熟白细胞：高荧光特性 网织红细胞：弱荧光特性,血小板： 成熟RBC： 原始细胞： 幼稚细胞：,微弱荧光特性 无荧光特性 极高荧光特性 极高荧光特性,荧光染色WBC分类的优势,检测异常细胞 提供幼
3、稚粒细胞信息（IG） 提供原始细胞信息（Other）,10,SFB溶血剂 （酸性，低渗） 溶解RBCPLT 除嗜碱性粒细胞以外的白细胞处理成 裸核形态 Baso保持原状,纵坐标：前向散射光（FSC） 反映细胞大小 横坐标：侧向散射光（SSC） 反映细胞内部复杂程度,嗜碱,其它有 核细胞,嗜碱粒细胞溶血素为酸性低渗溶液， Baso内的蛋白为酸性蛋白，因此在该 溶液中受到保护，而其他有核细胞则被 溶解成裸核,WBC/BASO 通道分析原理,NRBC通道分析原理,NR溶血剂 完全溶解RBC，PLT WBC保持原状 NRBC溶解为裸核 NR染液对核酸染色 纵坐标：前向散射光（FSC）,反映细胞大小,横
4、坐标：侧向荧光（SFL）,反映核酸含量,NRBC% = NRBC# / NRBC_WBC#,出现有核红时,WBC的修正,红系增生活跃时，外周血易见较多的NRBC，在WBC 计数时不被溶解，常被计入淋巴细胞中。,WBC增多对RBC计数的干扰,RBC：阻抗法RBC值含WBC WBC100*109/L时，需校正红系统参数 贫血越严重，对RBC影响越大,血红蛋白通道,光电比色法 SLS（十二烷基磺酸钠）：无氰无毒,二、散点图案例分析,嗜碱性粒细胞增多症,在BASO散点图上，嗜碱区 域出现大量散点，另外 DIFF散点图上，中性区域 的左下方也为嗜碱区域， 也出现了大量的散点。 BASO%：仪器13.4%
5、,镜检13.5%,AML-M1(例1),不可信 DIFF散点图显示淋巴与单核之 间融合，有分类结果，但不可 信。 IMI散点图也提示大量原始细 胞。 镜检发现有77.5%的原始细胞。 细胞表面标志CD13和CD33阳 性，CD36阴性；为急性髓细 胞性白血病。,AML-M2,DIFF散点图显示白细胞完全融合 且不分类。 IMI散点图显示大量原始细胞和幼 稚粒细胞。 NRBC散点图：红色散点 镜检发现有90%的原始细胞、3% 的早幼粒细胞哦、1%中幼粒细胞。 流式细胞仪检测结果显示细胞表 面标志CD13和CD33阳性，为髓 细胞性白血病。,AML-M3,DIFF散点图显示白细胞完全融合且不分 类
6、。 IMI散点图也显示大量原始细胞和幼稚粒 细胞。 NRBC散点图：红色散点 镜检发现3%的原始细胞，91%的早幼粒 细胞、3.5%的中幼粒细胞，0.5%晚幼 粒细胞。,AML-M4,DIFF散点图，白细胞区域出现大量 灰白色散点，完全融合，不分类。 大致分成两群，一群为原始细胞， 一群为幼稚粒细胞。 IMI散点图也显示大量原始细胞和幼 稚粒细胞。,AML-M5b,DIFF散点图淋巴与单核 融为一体，不分类，IMI 散点图显示大量原始细胞 和幼稚粒细胞。 镜检发现59%的原始细胞， 0.5%的早幼粒细胞，单 核细胞24.5%。,慢粒危象,DIFF散点图OTHER区域出现大 量散点，中性粒细胞上
7、方也有少 量散点，IMI散点图也出现大量 红色散点，仪器报警提示有大量 原始细胞和幼稚粒细胞。 NRBC散点图：红色散点 镜检发现38.5%的原始细胞，幼 稚粒细胞和幼稚的单核细胞。酯 酶染色阴性或弱阳性，可被氟化 钠抑制。这是一例慢粒急单变。,MDS,DIFF：淋巴细胞和单核细胞 之间界限不清，提示出现原 始细胞。中性粒细胞散点向 左下方延伸到嗜碱区域。 IMI：少量红点 NRBC：幼红 镜检：原始：1%，BASO： 5%，NRBC：2.5/100WBC,范*，女，67y。2016.11，诊 断为MDS伴原始细胞增多（10% ） DIFF散点图淋巴与单核区域融 合，提示出现原始细胞 报警提示
8、异常淋巴细胞/原始细 胞，异淋？ 镜检：47%原始淋巴细胞，未见 异淋。血片POX（-）。 2018.4.MDS急淋变,MDS急淋变,急性T淋巴细胞白血病,DIFF散点图淋巴与单核完 全融合，IMI散点图几乎没 有红色散点，仪器提示异 常淋巴/原始淋巴细胞。 镜检发现有59.5%的异常淋 巴细胞。 本例被诊为ATL。,CLL,淋巴与单核区域分界不 清，仪器提示淋巴细胞 增多/原始淋巴。,镜检：L：86.5%，幼淋 2.0%,异型淋巴细胞,异型淋巴细胞增高与 多种病毒感染及变态 反应有关。 常见有：传染性单核 细胞增多症、病毒性 肺炎、病毒性肝炎、 肾综合征出血热等病 毒性感染。 特点：胞体增大
9、，胞 质增多、嗜碱性增强 ，细胞核母细胞化， 荧光强度最强。,散点图特点：嗜酸性粒细胞群向中性粒细胞靠拢，间距小。 原因：疟原虫裂殖体破裂，疟色素从感染的血细胞中释放出来，继而被白细胞吞噬，吞噬 了疟色素的白细胞侧向散射光强度改变，显示在散点图靠近中性粒细胞一侧，但也被仪器 以Eo特有的红色标示出来。 张时民等.血细胞分析仪测定疟原虫感染患者特征二例.中华临床医师杂志，2011,5（2）:633-635,疟原虫感染的散点图（一）,从仪器报警EO增高或无EO分类结果的1 501份标本中发现有9份疟 原虫标本，6份散点图表现为EO与NEG之间间距缩小(图1) ，3份报警白细胞散 点图异常,且散点图显示EO与NEG之间无间距(图2)。 其他1 492份散点图基本正常。因为是真性EO增多，表现在散点图上是EO 数量增加，为正常分类散点图(图3)。,戴燕，万海英等. XE-2100血细胞分析仪嗜酸粒细胞异常散点图报警筛选疟原虫感染的研究.中华检验医学杂志，2008,31 （7）:763-766,疟原虫感染的散点图（二）,谢谢,
