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1、生药学实验目录前言实验一 生药的显微鉴定技术实验二 生药的水分、灰分和浸出物测定实验三 色谱法在生药鉴定中的应用实验四 气相色谱法的应用及挥发油含量测定实验五 液相色谱法的应用及蒽醌类成分的含量测定实验六 光谱法在生药鉴定中的应用实验七 滴定法测定生药中生物碱的含量实验八 根类生药鉴定实验九 根茎类生药鉴定实验十 茎木类、皮类、叶类生药鉴定实验十一 花、果实、种子类生药鉴定实验十二 全草类生药的鉴定实验十三 动物类生药的鉴定实验十四 矿物类生药的鉴定实验十五 中成药的显微鉴定实验十六 未知生药粉末鉴定实验十七 设计性实验 药材质量标准的制定附 生药学实验中常用试剂的制备及使用前言一、生药学实验
2、的目的与要求 生药学是药学专业教学计划中的一门专业必修课程。本实验指导是根据生药学教学大纲要求编写的，实验内容大致包括下面几方面：1、各类生药性状鉴别及其原植物的外形特征观察；2、生药的显微特征与显微化学反应；3、生药化学成分的定性与定量分析。生药学是一门综合性的应用学科，实验工作在本门课程中占有主要地位。不通过认真的、全面系统地实验及技术操作训练，就不可能学好本门课程。通过生药学实验，使学生达到以下要求：1、掌握生药鉴定的各种方法和操作技术；2、熟悉各种生药的形成特征及原植物的特征，能正确地进行鉴定；3、了解生药鉴定用的各种仪器的构造，并学会其使用方法；4、进一步理解和巩固生药学理论知识；5
3、、培养正确的科学态度和工作作风二、实验前的准备工作实验内容的安排是与课堂讲授密切配合的，因此，要求同学在实验前作好准备工作：1、根据实验进度表，复习与本次实验有关的课堂讲授内容或教材上有关章节内容。2、仔细阅读每次实验内容，要求弄清实验的原理与方法，并对每次实验的思考题试作解答；3、对每次实验的整个内容，做好顺序及时间上的安排，以使实验时不忙乱，不拖拉，按时完成实验；4、准备好铅笔HB橡皮、直尺、报告纸等自备实验用品。三、实验1、遵守实验室规则，保持实验室安排；2、实验开始前，教师进行讲解和提问时，应当注意听讲，并作必要的记录；3、实验时应根据具体内容有计划地安排时间，有条不紊地进行实验；4、
4、实验要认真，观察要仔细，观察与思考相结合，做到手、眼、脑并用；5、实验过程中，应当随时将观察到的现象，测量或称量数据，计算结果、推论及结论等写在报告纸上。应当养成能随时作出准确、清楚、整齐的记录而不需要重抄的良好习惯；6、实验台上应随时保持整洁，非实验必要的物品一律不许放在实验台上或试剂架上；7、酒精灯用后，应及时熄灭，应用水浴时，应注意保持其中有水，切勿使烧干，纸屑、废物应放入污物缸内。四、实验结束时的要求1、按时交实验报告2、把实验仪器试剂等放回指定位置。发给每人保管的器材可放在抽屉内，擦净台面。3、值日生负责最后扫实验室地面、台面，擦净黑板及其他指定工作。污物缸内废物垃圾应及时清除。4、
5、植日生最后应认真检查水笼头，电源是否关好。离开实验室应关好门窗。实验一 生药的显微鉴定技术一、目的要求1.掌握徒手制片、粉末制片、表面制片和解离制片方法。2.掌握生物显微镜使用及显微绘图技术。3.掌握显微测微尺的校正和使用方法。4.掌握描绘器的使用方法。二、仪器、试剂1仪器 生物显微镜、酒精灯、盖玻片、载玻片、镊子、解剖针、擦镜纸、吸水纸、火柴、绘图铅笔(HB、2H、4H)、直尺和擦皮，以上是每次实验必备品。另需单面刀片或剃刀、烧杯、试管、目镜测微尺、载台测微尺、显微描绘器、绘图板、恒温水浴锅、量筒、粉碎机。2试剂 稀甘油、水、水合氯醛试液、甘油醋酸试液、间苯三酚试液、浓盐酸、10铬酸、浓硝酸
6、、10硝酸、氯酸钾、515的氢氧化钾溶液。三、实验材料 制作徒手切片和表面制片，可选用新鲜药材；制作粉末片，选用干燥药材的粉末，如：甘草、虎杖、麦冬、当归等。 四)、实验内容 1生物显微镜的使用 生物显微镜由光学部分和机械部分组成。光学部分包括成像系统目镜和物镜，照明系统聚光器、可变光栏和反射镜。物镜将标本作第一次放大，目镜将第一次放大的像作第二次放大，两者相乘即是观察到的放大倍数。机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、粗细调节手轮及推动器或压夹。使用生物显微镜时，利用反射镜将外来光线导入聚光镜中，由聚光镜将光线会聚在标本上，用光栏调节光线强度。观察时视野范围内应均匀明亮，先用低倍镜观察，如需
7、要放大，可将目的物调至视野中央，然后转换成高倍镜，仔细观察。 (1)低倍镜的操作法：1）将显微镜放置离桌缘约10cm处，镜臂应靠近胸前。2）对光。上升聚光镜到载物台水平，打开光栏至最大限度，再将低倍镜转至镜筒的正下方，使对准载物台上的透光孔(转动时，听到“得”一声，即已对正)然后用二手转动反光镜，同时从接目镜向下看，直至镜中出现一明亮而均匀的视野为止。3）装片。将欲观察的标本片从镜前方横置于载物台上，(注意盖玻片应向上)使标本对准透光孔的中央。4）调节焦距。从侧面注视接物镜与标本片之间的距离，向外旋转粗调节手轮，使镜筒慢慢下降，直至物镜几乎与标本片相接触，但切勿触及标本片，以免造成镜头与标本片
8、的损坏。自目镜向下观察，同时向内旋转粗调节手轮，使物镜慢慢上升，直至在视野中看到清楚的物象为止。 若标本不在视野中，则慢慢移动标本片，使之适中，看到物象后，用压片夹固定制片，再转动细调节手轮，并调节光线，直到看到最清楚的物象为止，注意在显微镜中看到的是实物倒象。如果观察过程中发现清晰的图像逐渐模糊，说明调节手轮失灵，应进行检修。 (2)高倍镜的操作法：应先在低倍镜下选择物像，移至视野中心，换转高倍镜，应能看到欲观察之物象，用细调节手轮使之图象清晰。更换高倍镜时如出现镜头触及载玻片现象，则要检查标本切片是否放反，或高低倍镜是否配套。高倍镜头观察物象时，只能用细调节手轮调节焦距。 (3)使用显微镜
9、注意点：1）取拿显微镜时，必须一手握住镜臂，一手托住镜座，轻取轻放，防止因撞击使镜头内各组透镜脱胶而影响观察的清晰度。2）每次观察标本片时，必须先用低倍镜观察，看清物象后，再换高倍镜。3）要注意保持显微镜的干燥和清洁，使用前后，均需将显微镜擦干净，注意镜头要用擦镜纸或绸巾单向擦拂，切勿用手、手帕或纸片等去擦，观察临时制片时，要防止水分或药液外溢以致沾污镜头及其他部分。2显微制片法（1）徒手制片法：系用刀片或徒手切片器将材料切成薄片，可在显微镜下观察组织构造、细胞特征的制片法，新鲜材料应除净泥砂，干燥材料需浸软后切片。本方法简便快速，能保持植物体原有结构的真像、色彩和内含物，适合于临时制片观察或
10、显微化学实验，其缺点是切片较厚且厚薄不均一，不适合长期保存。 1)取材、固定与切片：选择已软化的中药材适当部位，切割成长23cm的小段，用拇指及食指和中指夹住材料，下端用无名指托住，另手持刀片，自左向右移动手腕，牵曳切片，动作要轻而快，力求切片薄而完整，操作时材料的断面与刀口须经常用水湿润。对于叶片或柔软的材料，需用稍坚固而易切的胡萝卜、马铃薯或实心大通草等将材料夹住进行切片。徒手切片器切片：将适当长度的材料夹入切片器上口外，旋转螺丝将材料固定紧，材料略露出圆盘平面，然后将切片刀或剃刀平放在圆盘上，自左向右平拉切片，同时转动切片器下端的升降调节轮，使材料上升，以利切片。 2)装片：将切好的薄片
11、，用毛笔小心地移入盛有清水的培养皿中浸泡，取载玻片滴加甘油或试液，用镊子或毛笔将切片移于其上，再滴一滴甘油于片上，加上盖玻片，即可作临时制片观察；也可将薄片滴加水合氯醛液加热透化，再滴加稀甘油，加上盖玻片后进行观察。加盖玻片时，应尽量避免产生气泡。 （2）粉末制片法：将药材研粉，过筛(50-80目)后制片。此法是鉴定中药材最常用的方法之一，简便快速，主要鉴别细胞的形态特征。特别坚硬的药材可用锉刀将其锉成粉末。取粉末少许，置于洁净的载玻片上，滴加12滴蒸馏水或甘油醋酸试液，加上盖玻片，置显微镜下，可观察细胞中的不溶性物质如淀粉粒、脂肪油滴、色素颗粒等。如要观察细胞的形态特征，则应采用滴加水合氯醛
12、加热透化后装片，以除去细胞中的淀粉、油脂等，增加细胞壁的折光率，从而使细胞的形态更加清晰。为防止水合氯醛结晶析出，水合氯醛透化后应滴加甘油，盖上盖玻片，擦净溢出液即可观察。 （3）表面制片法：多用于对叶片、果实或草本植物茎表皮组织的观察，可观察到表皮细胞形态、气孔类型、毛茸特征和着生情况等。通常用眼科镊子夹住叶片或果实等的表面，轻轻撕取其表皮层置于载玻片上的水、甘油或水合氯醛试液内，注意其上表面朝上方，加盖盖玻片，置显微镜下进行观察。 （4）解离制片法：系利用化学试剂使植物体的细胞与细胞间的中层物质溶解，细胞相互分离的方法。适用于研究细胞的立体形态结构，尤其适宜观察导管、管胞、石细胞和纤维等增
13、厚壁的状况。欲解离的材料，需先切割成2mm的薄片。根据选用解离的试剂不同分： 1)氢氧化钾解离法：适用于柔软的植物材料。将切割好的材料置于坩埚中，加5氢氧化钾溶液适量，加热至用玻棒挤压能离散为止。如离析的材料稍硬，可用610氢氧化钾液加热使之离析，尚可更换一次试液。待材料能被轻压离散时，倾去碱液，用水洗至中性，即可取所需部位加稀甘油制片观察。用氢氧化钾溶液能逐渐除去细胞中的淀粉、蛋白质、油脂及色素，其作用较水合氯醛强，并能使细胞膨胀，若作用时间较长，能使纤维性组织解离，并可引起薄壁组织的破坏和变形。所以加热处理时间不宜太长。 2)硝酸-铬酸离析法：适用于木质化组织，如木材、根、茎、树皮等材料，
14、将材料放入坩埚或试管中，加10硝酸与10铬酸的等量混合液，其量为材料的20倍，放置浸渍的时间，视材料的性质而异，一般为12日或更长的时间。也可以采用加温的办法来缩短浸渍时间，以材料用玻棒轻压，可以离散为度，然后用水洗至中性，即可制片观察。 硝酸和铬酸均为强氧化剂，解离速度较快，如解离柔软较嫩的材料，应注意掌握时间，经硝酸、铬酸解离的材料，草酸钙、碳酸钙结晶及淀粉粒、脂肪油等均已消失。3)氯酸钾法：本法适用于坚硬的材料，如木类及某些果实、种子坚硬的果皮、种皮等，将材料置坩埚或小烧杯中，加50硝酸试液约5ml及氯酸钾粉少量，缓缓加热至沸，当气泡渐少时，再及时加入少量的氯酸钾，以维持气泡稳定产生(约
15、1520分钟)，至材料能分离开时，倾去试液，加水洗涤数次，即可制片观察。采用此解离法制片需在通风处进行，以防氯气中毒。 3显微测微尺的使用 显微测微尺是用来测量显微镜下所见物体长度、大小的标尺，包括镜台测微尺和目镜测微尺。镜台测微尺为一特制的载玻片，在载玻片的中央封有lmm长的小尺，精确分成10大格，每大格又分10小格，共100小格，每小格长度为00lmm，即10m(图1-2)。标尺的外围有一小黑环，便于在显微镜下寻找标尺。载台测微尺并不直接用来测量显微镜下物体的长度和大小，而是用以校正目镜测微尺的。经过校正之后的目镜测微尺，方可用来测量显微镜下物体的大小。目镜测微尺为一直径约20mm的圆形玻片，玻片的中央部分具有一小尺，精确的分成50小格或100小格(图1-1)。使用目镜测微尺时，将目镜自镜筒中抽出，旋开镜片，将目镜测微尺的标尺正面向上，按放在目镜中部的隔板上；旋上镜片，放回原镜筒内，进行测量。由于目镜测微尺每小格的长度随显微镜放大的倍数而改变，故在使用前必须将各物镜头逐一用载台测微尺加以校正，以便确定在使用此显微镜时各组镜头下目镜测微尺每小格所代表的实际长度。 (1)目镜测微尺
