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1、柴 胡,由NordriDesign提供 ,柴胡简述,药品简述 化学成分 药理作用 临床应用 性状鉴别 指纹图谱鉴别,柴胡概述：,柴胡鉴别：,Page 2,药名：柴胡 英文名： RADIX BUPLEURI 别名：茈胡、地薰神农本草经、山菜、 茹草吴普本草，柴草品汇精要。 性味：苦，微寒， 归经：肝经、胆经 功效：解表和里、疏肝解郁 主治：感冒发热、寒热往来、疟疾，肝郁气滞， 胸肋胀痛，脱肛，子宫脱落，月经不调等病,Page 3,用法用量：煎服，39g 生态环境：生于沙质草原、沙丘、草甸及阳坡林下。 资源分布：原产中国东北、华北、西北、华东各地 朝鲜、日本、苏联也有分布。 药材基源：本品为伞形科
2、多年生植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根，按 性状不同，分别习称“北柴胡”及“南柴胡”。 采收储藏：春、秋二季采挖，除去茎叶及泥沙，干燥 炮制品：醋制、酒制、蜜制、憋血制等,Page 4,化学成分,成分主要含柴胡皂苷（saikosapoins a、 b、 c、 d 四种），甾醇，挥发油（柴胡醇、丁香酚等），脂肪油（油酸、亚麻油酸、棕榈酸、硬脂酸等）和多糖等。 柴胡还含黄酮、多元醇、植物甾醇、香豆素、脂肪酸、多糖、微量元素等成份。 大叶柴胡的根和茎中含柴胡毒素和乙酰柴胡毒素有剧毒,Page 5,药理作用,1、解热 有效成份：柴胡皂苷、柴胡挥发油、皂苷元A，有良好的解热降温效果。柴胡皂苷有溶血作用，现在多
3、用挥发油来解热。挥发油中的解热成分为丁香酚、对-甲氧基苯二酮、-十一酸内酯。 2、抗炎 有效成份：柴胡皂苷。 机 理：（1）抑制组胺释放。（2）抑制白细胞游走。（3）抑制渗出、降低毛细血管通透性、减少炎症介质的释放、抑制结缔组织增生（4)促进肾上腺皮质功能，柴胡皂苷a和b可兴奋脑垂体前叶分泌促肾上腺皮质激素(ACTH)，刺激肾上腺引起皮质激素的合成和分泌,Page 6,3、促进免疫功能 有效成份：柴胡多糖。 机 理：明显增加巨噬细胞、自然杀伤细胞的功能。对特异性和非特异性免疫均促进作用。可使细胞免疫和体液免疫增强。 4、保肝利胆 有效成份：柴胡皂苷 机 理：（1）稳定肝细胞膜，抑制干细胞内脂肪
4、的产生，防止肝纤维化及肝硬化的发生。（2）使总胆管舒张，胆管收缩,Page 7,5、抗菌、抗病毒 有效成份：柴胡皂苷 机 理：抑制溶血性链球菌、金葡菌、结核杆菌、流感病毒。,Page 8,1、柴胡注射液治疗发热 2、柴胡注射液滴鼻，也有明显的退热作用。 3、治疗病毒性肝炎： 4、治疗高脂血症、 5、治疗流行性腮腺炎： 6、治疗单疱病毒角膜炎： 7、治疗多形红斑： 8、治扁平疣 9、治链霉素中毒所致眩晕耳鸣,临床应用,Page 9,柴胡种类的多样性,据文献报道，中国已报道的柴胡有42种、17个变种及7变型。具不完全统计，除海南省、香港澳门特别行政区外，其余地区均有柴胡属植物分布。根据对全国27个
5、省、市、自治区的用药情况调查发现,柴胡属25种、6变种、1变型在我国不同地区均作为中药柴胡入药。而作为药用的柴胡当中包括具有毒性的大叶柴胡和主要有效成分含量很低的小柴胡,有的地区甚至把当地所产5、6种柴胡混在一起使用,造成市场上品种混乱。而且,药材的主要来源为野生资源。 商品主流为北柴胡，南柴胡较少.柴胡鉴定对柴胡市场有重要意义,Page 10,北柴胡 呈圆柱形或长圆锥形，长615cm 。根头膨大，顶端残留315 个茎基或短纤维状叶基，下部分枝。表面黑褐色或浅棕色，具纵皱纹、支根痕及皮孔。质硬而韧，不易折断，断面显纤维性，皮部浅棕色，木部黄白色。气微香，味微苦。 本种分布较为广泛，东北、华北、
6、西北、华东、华中、海南、江西、浙江各地均有分布,中药材上称为北柴胡的除本种外,还有银州柴胡、小叶黑柴胡、长白柴胡、兴安柴胡。,性状鉴别,Page 11,南柴胡 根较细，圆锥形，顶端有多数细毛状枯叶纤维，下部多不分枝或稍分枝。表面红棕色或黑棕色，靠近根头处多具细密环纹。质稍软，易折断，断面略平坦，不显纤维性。具败油气。 分布较为广泛，东北、华北、山东、陕西、江苏、安徽、广西、湖北、四川、内蒙古、甘肃等省,蒙古、朝鲜、日本也有分布。 大叶柴胡：根茎圆柱形，根坚硬表面棕黄色，具密集的节和节间，顶端残留茎基，下部多支根，主根不明显，表面棕褐色，具纵细纹，断面中空，具特殊香气 根及根茎含柴胡毒素,不宜入
7、药。柴胡毒素在高温下易破坏。 分布于辽宁、吉林、黑龙江、内蒙古等地,Page 12,指纹图谱在评价中药质量中的作用,指纹图谱在评价中药质量中的作用主要可以概括为 1.观察指纹图谱的整体特征，以鉴别生产前药材的真伪; 2.区分植物药材的不同部位; 3.考察商品药材及成药的质量; 4.从标准指纹图谱可追踪制剂中某些化学成分的变化; 5.检测原料与成品之间,成品的批之间质量的稳定性。,Page 13,中药指纹图谱的建立,Page 14,指纹图谱鉴别方法,薄层色谱(TLC)鉴别 高效液相色谱(HPLC) 气相色谱(GC) 紫外光谱(UV) 红外光谱(IR）,核磁共振(NMR) 质谱(MS) 连用技术G
8、C-MS指纹图谱、 LC-MS指纹图谱、 HPLC-DAD指纹图谱DNA指纹图谱,Page 15,薄层色谱(TLC)指纹图谱,薄层色谱(TLC)指纹图谱操作简单、适用范围广、重现性好等优点,用固定波长对薄层展开的各斑点做薄层扫描图谱，比目测的层析图谱更为客观准确,因而具有更好的指纹鉴别意义,Page 16,中国药典（2005版）,取供试品粉末0.5g，加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取柴胡皂苷、柴胡皂苷d对照品，加甲醇制成每1ml 各含0.5mg 的混合溶液，作为对照品溶液。 照薄层色谱法（附录 B）试
9、验,吸取上述三种溶液各5l，分别点于同一硅胶薄层板上，以醋酸乙酯乙醇水(8:2:1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2 对二甲氨基苯甲醛的40硫酸溶液，60加热至斑点显色清晰。 分别置日光及紫外光灯(365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或黄色荧光斑点,Page 17,Page 18,高效液相色谱（HPLC）,HPLC指纹图谱由于具有分离效能高、分析速度快等优点,近期已广泛应用于中药定量分析。 用此法进行中药鉴别时，为不使层析柱被中药粗提液中大量的杂质成分污染而损坏，必须在进样前对提取液进行除杂、保留待测的一类成分的预处理，这一操作必须花费较
10、多的分析时间，这一缺点导致此法较少用于定性分析。,Page 19,HPLC测定柴胡的部分化合物色谱图，摸索测定该化合物精密度高、稳定性好、重复性好的HPLC条件。HPLC法对不同种类的柴胡、不同产地同种柴胡或同种柴胡的不同部位进行特征色谱研究，将测定所得图谱经过“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件生成共有模式的柴胡对照品特征图谱。采用对照品对部分特征峰进行定性，可用于对药材的鉴别和评价。例如：狭叶柴胡地上部位HPLC特征色谱研究,Page 20,Page 21,Page 22,Page 23,紫外光谱(UV),UV指纹图谱利用不同中药所含成分的不饱和程度的差异,而导致其紫外吸收曲线的形态、峰
11、位、峰强度也有差异以此达到鉴别的目的。但UV光谱仅反映了部分具有紫外吸收化学成分的行为,全面评价还需结合IR、色谱、MS等各种技术。 例：取柴胡对照药材、柴胡样品、伪品1、2、3粗粉各0.5g，分别加乙醇20ml，超声处理20min，滤过，取续滤液2ml，置25ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度。在200一400nm波长范围内测定,Page 24,Page 25,气相色谱(GC),气相色谱(GC)指纹图谱具有高效、高选择性、高灵敏度、用量少和分析速度快等优点，对于一些具有挥发性成分的中药的鉴别，GC能发挥独特的优点,Page 26,红外光谱(IR ),IR 指纹图谱是对整个化合物分子的鉴别,比单纯的
12、官能团的化学定性鉴别专一性更强。中药材的红外光谱是混合物中各组分红外光谱的叠加。在IR指纹图谱中,不用将混合物的红外光谱各主要吸收峰归属,只要在4 000400 nm范围内比较光谱的差异即可。这种差异可以表现在:一是在某一波长内,鉴别双方的光谱中,吸收峰的形状与强度都有明显的差异;二是“指纹区”面貌不同。,Page 27,核磁共振(NMR),HNMR指纹图谱鉴定植物类中药是根据对鉴定方法的要求及HNMR图谱的特点建立起来的。以一定的程序可获取植物类中药的特征化学成分(或化学成分组),同时这些特征化学成分的含量是相对固定的。因此,在规范的提取分离程序下,植物类中药的HNMR图与植物品种间存在严格
13、的对应关系,没有混淆的余地。,Page 28,质谱（MS）,(MS)质谱指纹图谱将中药提取液置质谱仪中进行电子轰击电离,可获得提取液中化学成分的EI-MS图,不同中药提取液所含成分不同,所得质谱显示的分子离子峰及进一步的裂解碎片也不一致,可用来鉴别。,Page 29,连用技术,GC-MS指纹图谱、LC-MS指纹图谱及HPLC-DAD指纹图谱。无论选择何种色谱或光谱,建立指纹图谱的基本要求是专属性(排他性)、重要性和实用性。由于植物药中含各种不同类的成分,一个色谱有时是不够的,特别是复方制剂,需要根据实际情况建立数个图谱,共同的特征组成一组指纹图谱。作为质量标准的一个项目,指纹图谱的目的很明确,
14、就是鉴别供试品的真伪性和成品质量的一致性,不是研究全成分,因此找出构成指纹的特征即可,不用把各个峰都归属清楚。,Page 30,DNA指纹图谱,现代分子生物学研究发现,中药材(不含矿物药)的生物资源“物种”的多样性是由于其基因多态性的结果。而基因多态性可在分子水平上检测,它比形态、组织和化学水平上检测更能代表其变异类的遗传标志。利用聚合酶反应(PCR)从不同生物样品中人工合成DNA片段,而这种DNA片段的大小、数目可因不同的生物而异,故称之为“DNA指纹图谱”。由于DNA分子标记直接分析的是生物基因型而非表现型,所以鉴别结果不受环境因素、样品形态(原品、粉状或片状)和材料来源的影响,因此可为中药品种鉴别提供更加准确可靠的手段。,Page 31,例如：核糖体ITS序列在9种柴胡属植物的药材鉴定中的应用， 研究9种柴胡属药用植物rDNA ITS序列的差异和规律,寻找可准确鉴定柴胡类药材的分子性状。 采用PCR扩增ITS序列,测定序列，DNAssist version 2.2软件进行序列比对,并计算同源性。结果柴胡属植物ITS序列与外类群ITS序列比对同源性均小于75%,属内序列间两两比对同源性均大于88%,同种植物则大于99%。 结论ITS序列作为柴胡类药材鉴定依据具有一定实用性和可靠性。,Page 32,谢谢 ！,
