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DNA连接酶,1974年Lehman报道了DNA连接酶的作用机制即催化DNA链的相邻3羟基和5磷酸基团发生缩合反应,形成磷酸二酯键。 DNA连接酶分为ATP依赖型和NAD+依赖型。 常用的DNA连接酶: T4 DNA 连接酶 E.coli DNA 连接酶 Tsc DNA 连接酶,E.coli 、T4和Tsc DNA连接酶,二、DNA片段的连接方法,由于待连接的DNA片段具不同形式的末端,因此须采用不同的连接方法。 (一)具互补黏性末端片段之间的连接 (二)具平末端DNA片段之间的连接 (三)DNA片段末端修饰后进行连接,(一)具互补黏性末端片段之间的连接,(二)具平末端DNA片段之间的连接,(三)DNA片段末端修饰后进行连接,1、DNA片段末端同聚物加尾后进行连接 2、黏性末端修饰成平末端后进行连接 3、DNA片段5端脱磷酸化作用后连接 4、DNA片段加连杆或衔接头后连接,DNA片段末端同聚物加尾后进行连接特点:给平末端DNA片段3-OH加上同聚物。,黏性末端修饰成平末端后进行连接特点:先修饰成平末端,后连接。,DNA片段5端脱磷酸化作用后连接特点:先使一种DNA片段的5端由磷酸基(-P)转变为(-OH),DNA片段加连杆或衔接头后连接,