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1、临床免疫学检查操作规程传染病免疫学检查乙型肝炎血清标志物（HBV一M）检测 【 方 法 】 ELISA法。 【 试 剂 】 国内有商品化试剂盒供应。但必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“中国药品生物制品检定所检定合格”字样的防伪标签的试剂。 【 操 作 】 按试剂盒内说明书书进行。 【 附 注 】 1试剂盒应置冰箱中保存，取出后平衡至室温方可使用，未用完的微孔条须密封保存； 2每次应设空白1孔（不加标本及标酶试剂，其余各步相同），阴性对照3孔，阳性对照2孔； 3洗涤液须用蒸镏水或去离子水配制，洗涤时各孔均应加满洗液，以防孔口内边缘有游离酶残存不能洗净； 4用洗板机洗板，每次洗板反
2、复5遍，最后一次要求微孔内不残留洗涤液，如达不到要求，需扣干； 5洗板机洗板时应设定3060秒的浸泡时间； 6滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体均匀并弃去一滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量 准确，注意勿将试剂滴在孔壁上； 737温育须采用水浴箱，不可使用37干式恒温箱，且微孔条必须接触37水浴水面，不可悬空； 8不同批号试剂不可混合使用。 【 结果判断 】 酶标仪双波长450/630nm比色测定； 1HBSAg、抗HBS、HBeAg； 临界值（C.O）=阴性对照孔A值的均值N2.1（阴性对照A值0.05时按0.05计）； 标本A值S/C.O1为HBsAg，抗HBs、HBeAg阳性（S/N2.
3、1）； 标本A值S/C.O1为HBsAg、抗HBs、HBeAg阴性（S/N2.1）。 2抗HBe、抗一HBC； 临界值（C.O）=阴性对照孔A值的均值N0.5； 标本A值S/C.O1者为抗HBe、抗一HBC阳性（S/N0.50）； 标本A值S/C.O1者为抗HBe、抗一HBC阴性（S/N0.50）。抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白M（Anti-HAV-IgM）测定 【 方 法 】 ELISA法。 【 试 剂 】 市售合格试剂、要求同HBV两对半； 【 操 作 】 按试剂说明书要求进行，要求可参考HBV两对半； 【 结果判断 】 要求同HBV两对半中HBsAg。抗丙型肝炎病毒免疫球蛋白G（Anti-HC
4、V-IgG）测定 【 方 法 】 ELISA法。 【 试 剂 】 市售合格试剂、要求同HBV两对半。 【 操 作 】 按试剂盒说明书进行、要求可参考HBV两对半。 【 结果判断 】 1阴性对照：正常情况下，A值0.08； 2阳性对照：正常情况下，A值0.50； 3临界值（C.O）=阴性对照均值2.8。 阴性对照孔A值0.08应舍弃、如所有阴性对照孔A值均0.08，试验应重做。阴性对照孔A值0.05时以0.05计算。 标本A值S/C.O1者为阳性。 标本A值S/C.O1为阴性。抗HIV（1+2）测定 在选用测定方法时、需根据自身条件和需要加以综合考虑、尽管所述方法灵敏度特异性都很高、但在实际工作
5、中，假阳性仍然可见，为达到最佳的检测目的，一般需采用下列程序。 ELISA、金标等过筛试验阴性排除后；阳性者应以同类另一方法或另类某种方法重新过筛试验，以排除假阳性，若仍为阳性，可用免疫印迹法证实，再次排除假阳性，经重复检测均为阳性者，方可慎重发出阳性结果报告。 【 方 法 】 1筛选：ELISA法、金标法、明胶凝集试验、免疫荧光法和乳胶凝集试验等。 试剂：必须使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“中国药品生物制品检定所检定合格”防伪标签的商品试剂盒。 2确认：免疫印迹法和放射免疫沉淀试验。 试剂：使用经国家卫生部正式批准的快速免疫转印试剂盒和相应的放射免疫沉淀试剂盒。 【 操 作 】 按试
6、剂说明书要求进行。 【 结果判断 】 按试剂说明书要求判定。 【 附 注 】 1判断是否感染HIV应十分慎重，对可能是阳性的样品还应结合其它测定项目的结果和临床情况作出判断。 2金标法必须使用当天新鲜血清才能保证最佳结果，否则易产生非特异性显色反应。血浆必须去掉纤维蛋白，否则易造成膜过滤阻塞。肥达氏反应 【 方 法 】 大孔反应凝集试验。 【 试 剂 】 试剂市售。 【 操 作 】 按试剂盒内使用说明书执行，在大孔反应板内进行试验，较传统的肥达氏反应结果更清晰，每次试验均须做阴、阳性对照管（孔）。 【 结果判断 】 为便于观察，每10ml稀释菌液中（70亿菌/m1），加入20.0g/L美兰溶液
7、5u1(微升)，结果更清晰。 凝集价O1：80、H1：160才有诊断价值。但近斯接种过伤寒，付伤寒菌苗者其凝集价亦可升高。 抗“O”抗体属IgM，出现早、维持时间仅数日，抗H抗体属IgG，出现较晚、但维持时间可达数年。抗链球菌溶血素O（ASO）检查 【 方 法 】 胶乳凝集法。 【 试 剂 】 市售成套商品试剂。 【 操 作 】 按试剂说明书进行。 1A、S、O胶乳加入后，轻轻摇动到指定的时间应立刻纪录结果。再放置一段时间后出现的清晰凝集不列为阳性。室温降低10，在胶乳试剂加入后应延长反应时间2min，室温升高10应缩短反应时间2min。阳性质控血清应在本说明书指定的时间内出现清晰凝集，但不能
8、将阳性质控血清出现凝集的时间视为判断结果的时间界限。 2溶血、脂血、高胆红素血症、高胆固醇血症、类风湿因子阳性以及标本被细菌污染都不会影响本试验。 3胶乳试剂不可冰冻，放置在4冰箱保存，有效期可达1年，但用前必须摇匀。 4本试验用的滴管口径以及装胶乳试剂的塑料瓶的口径应同样大小，保证液滴大小一致。梅毒血清学检查 快速血浆反应素环状卡片法（RPR） 【 试 剂 】 本试验有商品试剂盒。RPR抗原悬液呈均匀，灰黑色无杂质。610暗处可保存1年。 【 操 作 】 按试剂盒说明书进行。 【 结果判断 】 阴性标本不凝集，阳性标本反应液中可见明显黑色凝集颗粒，根据颗粒大小报告+。如有需要，阳性标本也可在
9、RPR卡片上将血清用生理盐水作1:21:32稀释后，按定性试验方法做半定量试验。 【 附 注 】 1此试验的最佳温度为2329，温度过高，反应性可能增强。温度过低，灵敏度可能下降； 2观察结果要及时； 3被检血清中若反应素过多，有可能抑制“反应性”，而出现前带现象。半定量试验有助于澄清此问题。因此呈粗糙非反应性结果的血清宜再做半定量试验。 甲苯胺红不加热血清法（TRUST） 【 试 剂 】 本试验有商品试剂盒。 【 操 作 】 按说明书进行。 【 结果判断 】 按说明书进行，根据粉红色凝块有无及大小报告、+。 【 附 注 】 1待测血清及TRUST抗原于测定前放室温平衡（23 29）； 2阳性
10、反应需做半定量试验，操作方法同RPR半定量试验。 螺旋体血球凝集法（TPHA） 【 试 剂 】 市售成套试剂。 【 操 作 】 按试剂说明书进行。 【 结果判断 】 定性试验：将标本最终稀释成1:40与未致敏的红细胞反应，作为阴性对照；同样将该标本最终稀释成1:80与致敏的红细胞反应，如出现明显之凝集现象为阳性。对出现阳性的标本，可进一步作1:5、1:10的倍比系列稀释进行半定量试验，以呈现明显凝集反应的最高稀释倍数作为该血清样本的凝集效价。 【 附 注 】 1以致病的梅毒螺旋体致敏明胶粒子代替红细胞的TPPA试验与TPHA试验一样，在试验的原理，操作及结果的判断方面基本一致。TPPA已有商品化试剂盒供应； 2梅毒血清学检查，传统的康一华氏反应已被陶汰，目前常用的方法除上述不加热血清反应素试验（USR）、RPR、TRUST、TPHA、TPPA外，还有性病研究试验VDRL及荧光螺旋体抗体吸收试验FTA-ABS等；其中的FTA-ABS、TPHA、TPPA，属特异性的密螺旋体抗原试验，而VDRL、USR、RPR、TRUST则属非特异性的脂类抗原试验，实际应用时常以其一种作为筛选检查，而用FTA-ABS或TPHA或TPPA作证实试验。
