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1、.,2.2动物细胞工程,专题2 细胞工程,.,动物细胞培养,动物细胞融合,单克隆抗体技术,核移植,动物细胞工程常用技术,胚胎移植技术,.,（一）动物细胞培养,1.过程：,.,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,胰蛋白酶,单个细胞,加培养液,制成,细胞悬液,细胞株,细胞系,（一）动物细胞培养,细胞增值,无限传代,去掉组织间 蛋白,动物细胞培养不能 最终培养成生物体,细胞贴壁,原代培养,传代培养,胰蛋白酶,.,如何界定原代培养和传代培养？,（一）动物细胞培养,遗传物质改变,.,2、有关概念,原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养
2、：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。,.,2、有关概念,细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到4050代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。,.,3、动物细胞培养条件,1。无菌、无毒 2。营养：葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素和动物血清等。 3。温度：36.
3、5+0.5 4。PH=7.27.4 5。气体环境：O2和CO2（95%空气+5%CO2）,.,思考：,2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？,1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？,3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？,4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？,主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等,因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强,成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养,不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的
4、动物个体,.,获得细胞,细胞的全能性,细胞株、细胞系,植物体,培养结果,或细胞分泌蛋白,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清 促生长因子,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物细胞和动物细胞培养的比较,.,4. 动物细胞培养技术的应用,()大规模生产有重要价值的蛋白质生物制品。,()解决为大面积烧伤病人移植皮肤问题。 （利用贴壁生长和接触抑制原理）,()检测有关物质毒性。,()培养正常或病变细胞，用于科研。,如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体,.,（二）、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1.动
5、物核移植 (1)概念：将供体体细胞的_与受体去核卵细胞的细胞质进行_，借助于_的发育能力，经过培养发育成胚胎进而形成_的技术。 (2)关键技术：_技术。,细胞核,人工组合,卵细胞,个体,细胞核移植,.,动物体细胞核移植技术和克隆动物 （3）哺乳动物核移植可以分为_核移植（比较容易）和_核移植（比较难）。 （4）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较_，容易操作；卵(母)细胞细胞质_，营养丰富。,胚胎细胞,体细胞,大,多,.,.,多莉羊的培育过程,.,.,.,2、体细胞核移植技术的应用 加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； 保护濒危物种，增大存活数量； 生产珍贵的医用蛋白； 作为异种移植
6、的供体； 用于组织器官的移植等。 3、体细胞核移植技术存在的问题 克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。,.,动物细胞融合与单克隆抗体,.,（三）动物细胞融合,2、过程：,1、概念： “2个或多个动物细胞”“1”、“杂交单核细胞”,.,用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程,思考讨论： 为什么细胞融合过程 中使用的病毒需要 灭活？,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。,.,3、动物细胞融合的意义：克服了
7、_杂交的不亲合性，成为研究细胞_、_、肿瘤和生物_培育的重要手段。 4、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较,远缘,遗传,细胞免疫,新品种,.,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振荡、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,.,（四）单克隆抗体,1、什么是抗体？其本质是什么？,2、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？ 抗体是从何来的？,B淋巴细胞
8、产生抗体。,3、B淋巴细胞有什么特点？,抗体是机体受抗原刺激后产生的、 并能与该抗原发生特异性结合的 具有免疫功能的球蛋白。,.,B淋巴细胞与抗体,B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。,.,单克隆抗体,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点： 特异性强、灵敏度高,.,如何大量生产单克隆抗体？,利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获
9、得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,.,单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,.,思考：,1、本过程利用了哪些原理？,免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理,2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？,这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体,.,（1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?,（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，B淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。）
10、,（2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗?,（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。）,.,（3）整个制备过程为何要经过两次筛选?,（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。）,.,单克隆抗体的应用,与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性
11、强，灵敏度高，优越性十分明显。,应用主要有：,1、临床诊断,2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤,资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。,生物导弹：单克隆抗体作为载体分子，同抗癌药物相结合，将他们运载到肿瘤部位，杀死癌细胞，这种抗体药物结合物称之为生物导弹。它能定向杀灭癌细胞，避免或减少对正常细胞的伤害，大大减轻了抗癌药物的副作用。,.,小结,
12、一种诱导细胞融合的新方法-,灭活的病毒,一种新细胞-,杂交瘤细胞,一种优势-,单克隆抗体特异性强、灵敏度高,.,.,.,.,.,1.动物细胞工程技术的基础是：（ ） A动物细胞融合 B胚胎移植 C动物细胞培养 D核移植,教学目标巩固,.,在动物细胞融合和植物体细胞杂交的 比较中，正确的是 （ ） A结果是相同的 B杂种细胞的形成过程基本相同 C操作过程中酶的作用相同 D诱导融合的手段相同,教学目标巩固,.,. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A B C D,C,教学目标巩固,.,.,动物细胞工程,.,
