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1、（三）资金预算说明购置单项经费5万元以上固定资产及设备等，须逐项说明与项目研究的直接相关性及必要性。1、设备费由于本单位已经具备良好的科研条件，本课题预算内无价值5万元以上的大型设备费用，也无需购置价值5万元以下小型仪器设备，仅需要升级现有的显微镜，增加显微成像系统：2.5万元。厂家：Olympus, 型号：U-TOV.5XC。2、材料费主要用于购买：各类试剂盒；各种抗体；细胞培养耗材，常规生物化学及分子生物学试剂及耗材。共计39万元（详见下表）。动物肿瘤模型的构建与饲养共计8万元。总计47万元。（1） 各类试剂盒，如对细胞迁移侵袭能力检测的试剂盒，检测细胞活力的试剂盒，以及进行DNA, RN
2、A提取和下游靶基因检测的各种试剂盒。具体明细如下，合计约6.67万元。序号材料名称计量单位单价（元）购置数量金额(万元)1反转录试剂盒(Toyobo)盒150050.752荧光定量PCR试剂盒(Toyobo)盒120050.63细胞转染试剂盒（Fermentas）支140050.74RNA干扰试剂盒(Fermentas)盒260020.525质粒小提试剂盒（Omega）盒60080.48质粒中量提取试剂盒（GE）盒350020.756质粒大量提取试剂盒（10次GE）盒300010.37报告基因检测试剂盒（Promega）盒650010.658DNA纯化试剂盒（Promega）盒100050.5
3、9免疫荧光试剂盒（Invitrogen）盒250010.2510免疫组化试剂盒（Milipore）盒200020.411MTT活力检测试剂盒（Sangon）盒100010.112trans-well试剂盒（Milipore）盒320010.3213EMSA试剂盒（Milipore）盒350010.35合计6.67（2） 各种抗体，应用于免疫印迹分析，免疫组织/细胞化学染色、免疫共沉淀等，主要为检测蛋白表达、蛋白在组织或细胞内的定位，及研究蛋白间相互作用。具体明细如下，合计约9.54万元。序号材料名称计量单位单价（元）购置数量金额(万元)1OVOL2抗体(Sigma)支300041.22Smad
4、4抗体(Abcam)支300041.23Smad7抗体(Up-state)支280010.284Smad2抗体(Up-state)支280010.285Smad3抗体(Up-state)支280010.286E-cadherin抗体(Abcam)支280010.287Vimentin抗体(R&D)支280010.288N-cadherin抗体（Milipore）支280010.289Fibronectin抗体（Milipore）支280010.2810HA抗体(Sigma)支350020.711Flag抗体(Sigma)支350020.712Myc抗体(Sigma)支350020.713ZEB
5、1抗体（Santa Cruz）支200010.214ZEB2抗体（Santa Cruz）支200010.215Twist1抗体（Santa Cruz）支200010.216Twist2抗体（Santa Cruz）支200010.217Snail抗体（Santa Cruz）支200010.2Slug抗体（Santa Cruz）支200010.2P300抗体（Santa Cruz）支200010.2TRI抗体（Milipore）支280010.28磷酸化TRI抗体（Milipore）支320010.32Smurf1 抗体（Milipore）支280010.28- actin抗体（Santa Cru
6、z）支200020.4 酶标二抗 （Santa Cruz）支200010.2 荧光二抗 （Santa Cruz）支200010.2合计9.54（3） 细胞培养耗材，如各种细胞培养基、胎牛血清、特殊细胞培养用细胞因子及细胞培养皿、细胞培养板、细胞冻存管等。具体明细如下，合计约11.35万元。序号材料名称计量单位单价（元）购置数量金额(万元)RPMI1640（Gibco）盒200200.43DMEM（Gibco）盒200300.64F12K培养基（Gibco）瓶250100.255 新生牛血清（国产-四季青）瓶150200.36胎牛血清（Gibco）瓶20001027谷氨酰胺Glutamax（Gi
7、bco）瓶300100.38青链霉素（Gibco）瓶200100.29非必需氨基酸（Gibco）瓶200100.210丙酮酸钠（Gibco）瓶200100.212TGF1蛋白（Gibco）支300041.21335mm细胞培养皿（Corning）箱100050.51560mm细胞培养皿（Corning）箱800100.816100mm细胞培养皿（Corning）箱1000151.51796孔细胞培养板(Corning)箱120050.61824孔细胞培养板(Corning)箱1000101196孔细胞培养板(Corning)箱800151.2202ml冻存管(Corning)箱100010.1
8、合计11.35（4） 常规生物化学及分子生物学试剂及耗材，包括各类低值生化试剂、化学药品和实验室常用耗材等。 具体明细如下，合计11.44万元。序号材料名称计量单位单价（元）购置数量金额(万元)胰蛋白胨（OXOID）瓶28040.112酵母粉（OXOID）15020.031GST凝胶4B（GE）瓶240020.482Protein A/G Agarose（GE）瓶350041.43DNA Ladder（Fermentas）支180100.184蛋白Marker（Fermentas）支450100.455DNA限制性内切酶（Fermentas）支120100.126高保真DNA聚合酶（Prome
9、ga）支150081.27Taq DNA聚合酶（Takara）支500160.88蛋白酶抑制剂混合物（Roche）盒300041.29胰蛋白酶（Gibco）瓶350100.35Puromycine（Sigma）支120010.12G418（Milipore）支120010.1211SB431542（sigma）支100020.2Trizol-RNA提取试剂（200ml）瓶180020.36胶片(8x10,100张)盒30020.06ECL化学发光试剂（50ml,GE）盒60040.24一次性滤器（50个）盒30040.12PCR用薄壁管(Axygen)盒230081.8412WB用PVDF膜(
10、Milipore)卷200040.81315ml离心管(500个，Corning)箱60020.121450ml离心管(500个Corning)箱80020.16151ml移液枪头（500个）包16200.03216200ul移液枪头（1000个）包15500.0751710ul移液枪头（1000个）包14500.07181.5ml EP管（500个）包18500.09190.5ml EP管（1000个）包25500.125201ml Rnase free 移液枪头（96个，Axygen）盒30500.15200ul Rnase free 移液枪头（96个，Axygen）盒27500.135R
11、nase free 1.5ml EP管（500个，Axygen）包60100.06Rnase free 0.2ml PCR管（1000个，Axygen）包240100.24合计11.44（5）常位移植瘤裸鼠模型、转基因小鼠肿瘤模型的构建与饲养：本课题研究的一个技术手段就是在动物水平研究乳腺癌侵袭转移表型。课题研究任务中应用了常位小鼠模型、MMTV-PyVT小鼠模型、OVOL2转基因小鼠模型以及MMTV-PyVT/OVOL2双转基因小鼠模型等4个品系小鼠。按照经验，这些小鼠的饲养、维持，每月的平均费用约2000元，保守按照40个月的周期计算，共需要2000x40=8万元， 这只是保守预算，因为这
12、还没包括转基因小鼠制作费用，原因是小鼠模型为课题组原先拥有。3、测试化验加工费 大量转基因与基因敲除小鼠标本和大量临床肿瘤标本的石蜡切片与冰冻切片的制作、染色费用, 委托厦大医学院病理科完成。 厦大生命科学院分析仪器中心独立核算,拥有大量大型仪器,如激光共聚焦扫描显微镜、超速离心机，并有专人操作,这些都是本实验所需要。 实验中大量引物合成以及基因序列测定等。以上各项合计4万元，详见下表序号材料名称计量单位单价（元）购置数量金额(万元)1激光共聚焦扫描显微镜小时2504012超速离心机管252000.53组织切片制作与染色片204000.84siRNA oligo合成对5002015DNA序列测定次401000.46DNA引物合成100bp150200.3合计44、燃料动力费本课题专用的
