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1、一、组织学实习方法(一)如何正确使用显微镜观察组织标本1.对照图片，结合实物，熟悉显微镜的构件，掌握显微镜光学部分和机械部分的正确使用方法。2.将显微镜轻轻地移至观察者的前方，使镜座的前缘距实验台边缘大约510公分。3.旋开显微镜电源开关(显微镜座左后侧转轮)，光线亮度适当。4.旋转物镜转换器，将10倍物镜旋至镜筒下方，对准载物台中央的孔。5.打开聚光镜孔径光栏，可见光线经集光镜聚光镜孔径光栏聚光镜载物台中央的孔10倍物镜目镜。6.注意身体坐姿，睁开双眼，把观察注意力集中于显微镜的视场内，可见两个不完全重合的视场光斑，双手推移两目镜，使两光斑合二为一。7.按照实习指导和切片标本目录，从标本盒内
2、取出要观察的标本，进行肉眼观察，初步了解该标本的大小、形状和染色等。8.将载玻片放在载物台上，盖玻片朝上，标签位右侧，用弹夹夹好。旋转弹夹移动旋钮，将载玻片上的组织标本移至物镜下方。调节镜座左侧的转轮(即电源开关)，将视野亮度调至适中。在右手旋转弹夹移动旋钮，移动切片的同时，左手慢慢地旋转镜臂下部的大、小手轮聚焦(先旋大手轮后旋小手轮)。做到左、右手配合，双目观察标本。9.显微观察标本常规是从低倍放大开始，这样视场大，有利于对标本进行全面观察。使用低倍物镜(X10)时，观察者左手转动大手轮，使载物台缓慢上升或下降，同时，观察者用双眼从目镜中观察视场，当见到组织标本像轮廓时，转动小手轮直至组织标
3、本像清晰。10.当要进一步放大观察时，则直接旋转物镜转换器，将40倍物镜旋至镜筒下方。此时，只需转动小手轮调焦(必要时升降聚光器或调节聚光镜光栏的孔径)，便可获得更清晰的进一步放大的标本像。在不同切片和不同放大倍数下观察时，应注意随时调节亮度，使之最适宜。11.移动切片观察时，要注意片中组织标本与镜像方位完全相反。二维标本像与其多维的关系，详见切片物像的理解及图示。12.观察完一张切片后，应回忆总结一下在该片中辨认了几种细胞、组织、结构或该器官的特征性结构，每片如此积累，可以大大提高阅片能力和学习效率。(二)组织切片制作的一般过程目的要求 了解石蜡切片HE染色法的基本过程。 通过了解切片制作，
4、加深对局部与整体，平面与立体关系的理解。常用的教学标本是石蜡切片，苏木精(hematoxylin，以H代表)和伊红(eosin，以E代表)染色，即HE染色。现将其制作方法简述于下：1.取材与固定取材愈新鲜愈好，材料大小以0.5cm3为宜，放入固定剂内，固定624小时。固定的目的是使细胞内的蛋白质凝固，以便保持组织原来的结构和成分。但是，经固定后组织的结构与生活状态下的结构仍有很大差异，可能造成“人工假象”。常用的固定剂有多种，兹例举两种如下。(1)10%福尔马林(formalin) 取3740%甲醛水溶液10毫升，加入水90毫升，即配成10%福尔马林。多用于大块组织的固定，如外科手术取的材料。
5、组织块大小与固定剂体积之比，一般为120。(2)Bouin液是一种混合固定剂，取饱和苦味酸水溶液75毫升、3740%甲醛水溶液25毫升和冰乙酸5毫升，三者混合均匀并过滤。临用前配成。 以含苦味酸的固定剂固定的组织标本，需经70%酒精充分洗涤，尽量除去苦味酸对组织的黄染。2.脱水组织标本需包埋在硬的石蜡内才能切成薄片，但是，经固定后的组织内含有水，石蜡不能透入，故需脱水。常用的脱水剂是酒精。为避免组织突然进入无水酒精内产生强烈收缩，需采用升梯度酒精(70%80%90%95%100%100%)，在不同浓度酒精内的时间长短，则视组织块大小而定。3.透明组织标本经酒精脱水后，其内含有酒精，酒精与石蜡仍
6、互不相溶，故组织标本还需进行透明处理。透明是用既能与酒精又能与石蜡溶合的透明剂(常用二甲苯)渗入组织内，完全渗透后，组织呈透明状，即可将组织浸泡在预温、溶化的石蜡内，即浸蜡。4.包埋组织标本依次在(60的温箱内)软蜡和硬蜡中各浸泡12小时。待石蜡充分渗入组织后，将浸有组织的蜡碟从温箱中拿出，等蜡冷却凝固后，即可修块，准备切片。5.切片用切片机将包埋有组织的蜡块切成薄片，一般切片厚度为47m。6.贴片用适当温度的温水，先将组织片展平，再将它捞在预先涂有粘片剂的载玻片上，放在烤箱内(3745)烤干(24h)。7.染色在进入染色液之前，组织切片需先用二甲苯脱蜡两次，然后，用纯酒精清除去二甲苯。由于染
7、色液是水溶液，需经下降梯度酒精(100%95%85%80%70%)，再进入蒸馏水中稍洗 方可入染色液中染色。苏木精碱性染料将细胞核内的染色质和胞质内的核蛋白体等物质染成紫兰色，这种染色特性，称嗜碱性(basophil)。入苏木精液染数分钟后，用自来水流洗；0.51%盐酸酒精分色数秒至几十秒钟，经自来水洗后入伊红染液中染色。伊红是酸性染料，能将细胞内的普通蛋白质和细胞外的一些结构染成红色，这种染色特性，称嗜酸性(acidophil)。8.脱水、透明和封片用升梯度酒精(70%80%90%95%100%100%)脱水；二甲苯透明；中性树脂封片，晾干保存。(三)如何观察和理解切片物像观察切片的步骤应养
8、成由肉眼到低倍，再到高倍，系统观察标本的习惯。先要了解标本的取材部位、制片方法、切片方位和染色方法，再从宏观到微观，由浅入深逐步观察组织、细胞的微细结构。在掌握组织、细胞光镜结构的基础上，可结合观察某些细胞或结构的电镜照片，并联系机能融会贯通深入理解。正确理解切片的立体形象 人体结构极为复杂，就同一个器官或细胞来说，所切的部位不同或者所切的方向不同，则切片所显示的物像就不相同。我们将一个煮熟的鸡蛋示意为一个细胞，通过不同方向和部位所作的各种切面，则可得到不同的物像，如图1所示。若对呈辐射状排列的细胞群体作各种切面，其各种物像如图2所示。若对呈管状的器官作各种切面，其形状如图3、4所示；若对呈束
9、状的器官作各种切面，其形状如图5所示。切片中的人为现象 在切片中出现的一些人为假象，并非组织结构，应予鉴别。刀痕 因切片刀锋有缺口造成组织标本纵行刀痕。裂纹 组织透明、浸蜡的时间过长，组织脆硬，切片时可引起组织裂开，呈不规则裂纹。在制片过程中，由于组织或细胞各部分结构的收缩不一致，或贴片时水温过高，也可导致某些人为裂隙。皱褶 贴片时组织未充分展平。气泡 封片时将少许空气封入切片树胶中。异留物 如染色时残留的染料沉渣等。(刘德明)图1 鸡蛋的各种断面图2 辐射状排列的细胞群的各种断面图3 弓形管状结构的各种断面图4 管状器官的各种断面图5 束形器官的各种断面上皮组织 (Epithelial Ti
10、ssue)目的要求：1.掌握上皮组织的一般特点和分类。2.掌握各种被覆上皮的结构特点。3.了解腺的分类，两种外分泌腺细胞的结构特点。4.熟悉微绒毛和纤毛的超微结构特点和功能。5.掌握各种细胞连接的超微结构特点和功能。6.熟悉基膜的位置、光镜结构、超微结构和功能。单层扁平上皮(simple squamous epithelium) 6号 大网膜(铺片) 镀银法组织学彩色图谱图01-01取动物大网膜经硝酸银溶液浸染，剪成小块平铺于载玻片上而制成。用其观察单层扁平上皮(simple squamous epithelium)的表面形态结构。4倍物镜选择大网膜铺成单层而背景较清楚的部分观察。10倍物镜上
11、皮细胞呈不规则形或多边形，相邻细胞之间有棕黑色的硝酸银颗粒沉积，并绘出细胞的轮廓。细胞核被苏木素染液染成蓝色。40倍物镜细胞之间的硝酸银颗粒较大且多，故着色深；胞质内的硝酸银颗粒细小而分散。细胞核呈椭圆形，着蓝色。细胞内椭圆形空白区，是该细胞核已脱落所遗留的间隙。单层扁平上皮(simple squamous epithelium) 46号 空肠 HE组织学彩色图谱图01-024倍物镜这是空肠的纵切面组织标本，平坦的一边是空肠的外表面，被覆单层扁平上皮。有大小突起的一边是空肠的腔面，小突起表面被覆单层柱状上皮。择标本平坦的一侧，换成10倍物镜观察单层扁平上皮。10倍物镜在标本平坦边上，有一些虚线
12、样的紫蓝色的点状结构，此即单层扁平上皮细胞核。有的部位细胞核排列成曲线，有的部位细胞核排列成直线，换40倍物镜进一步观察。 40倍物镜单层扁平上皮细胞核的侧面观，呈扁椭圆形或卵圆形，胞核的长轴与上皮的表面平行。上皮细胞呈薄片状，可见胞核周围少量的嗜酸性胞质。单层柱状上皮(simple columnar epithelium) 46号 空肠 HE组织学彩色图谱图01-034倍物镜找到空肠有大小突起的一边，小突起表面被覆单层柱状上皮。10倍物镜指状突起表面所被覆的组织是单层柱状上皮(simple columnar epithelium)，细胞核呈长椭圆形或杆状，众多的细胞核紧密排列成一层。有些部位
13、的上皮细胞核聚集成堆或排成多层，因该处众多的上皮细胞被斜切所致。少数细胞核上部的胞质呈圆形空泡状，该细胞是杯状细胞(goblet cell)。选择细胞核排列成单层的部位，换40倍物镜观察。40倍物镜小肠单层柱状上皮的游离面有条红色的带状结构，称纹状缘(striated border)(它与微绒毛有何关系?)。柱状的上皮细胞紧密排列成一层，细胞间的界限不清楚。但是，可根据细胞核呈长椭圆形或长杆状，并排列为一排，即可推断该上皮是由单层的柱状细胞组成(一般而论，细胞核的形态是与该细胞的形状相适应的)。细胞核的长轴与细胞的长轴一致，偏居细胞的基底部。在柱状的上皮细胞间可见杯状细胞，其外形似高脚酒杯，细
14、胞核上部的胞质内有个圆形或椭圆形的空泡区(此处胞质内的粘原颗粒在制片过程中不易保存，致使分泌颗粒所在区着色很浅)；细胞游离面的纹状缘中断；细胞核常呈三角形或杆状，着色深蓝色，位于细胞基底部。假复层纤毛柱状上皮(pseudostratified ciliated columnar epithelium) 54号 气管 HE组织学彩色图谱图01-044倍物镜气管横切面的组织标本，呈环形，凹面(即气管腔面)被覆假复层纤毛柱状上皮。标本中间着蓝色的宽环带为透明软骨(以后实习观察之)。10倍物镜观察气管腔面被覆的假复层纤毛柱状上皮(pseudostratified ciliated columnar epithelium)，细胞核紧密排列成数层，染成蓝色。选择层次结构较清晰的部位，换成40倍物镜观察。40倍物镜上皮游离面有呈簇状或成排的红色细丝，即纤毛(cilia)。纤毛所在的细胞，是纤毛细胞(ciliated cell)。细胞上半部呈柱状，下半部纤细。纤毛细胞核呈椭圆形，位于多层上皮细胞核的浅层。柱状的纤毛细胞间夹有杯状细胞。深层的细胞核多呈圆形
