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1、第十四章 维生素类药物的分析 Analysis of Vitamines,维生素A 维生素B1 维生素C 维生素E,一、结构与性质 1.结构 环己烯 多烯醇（共轭双键系统） R=H VA醇(维生素A1)：性质活泼 R=CH3CO- VA醋酸酯：性质稳定,第一节 维生素A的分析,2.物理性质 淡黄色或红色油状或固定物，几乎无气味，不溶于水，易溶于氯仿，乙醚，环己烷和油中 VA醇：max(异丙醇)325nm VA酯：max(环己烷)328nm,第一节 维生素A的分析,（二） 鉴别 1. Carr-price反应（三氯化锑） 三氯化锑的氯仿液与VA作用产生蓝色 渐变成紫红色 无水：三氯化锑水解、VA
2、不溶 无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用,第一节 维生素A的分析,2.紫外法 本品加无水乙醇盐酸溶解，立即紫外扫描 326nm单一吸收峰(VA) 水浴加热30s，迅速冷却，再扫描 348、367和389nm三个尖锐吸收峰(去水VA),第一节 维生素A的分析,三、含量测定 紫外法（三点校正法） HPLC,第一节 维生素A的分析,1.维生素A中存在的相关物质和不相关物质 1）衍生物 维生素A2（去氢维生素A） 维生素A3（去水维生素A）,(一)紫外法（三点校正法）,2）异构体 目前分离得到5个异构体 新维生素Aa(2-顺型) 新维生素Ab(4-顺型),(一)紫外法（三点校正法）,新维生素Ac(2.4
3、-顺型),异维生素Aa(6-顺型) 异维生素Ab(2.6-二顺型),(一)紫外法（三点校正法）,3）氧化产物：环氧化物，醛，酸 4）中间体、副产品： 5）裂解产物： 6）鲸醇（Kitol）:二聚体，非生物活性 7）不相关物质：抗氧剂，稀释用油 在325328nm处均有吸收 不相关吸收或背景吸收,(一)紫外法（三点校正法）,2 .原理 1）维生素A最大吸收波长附近（310340nm） 杂质吸收近似一条直线 2）物质吸收光谱的加和性 A总=AVA+A杂质,(一)紫外法（三点校正法）,3.三点选择,(一)紫外法（三点校正法）,维生素A醇 1) 三点：325、310、334nm 2) 等吸收点：A31
4、0=A334= 3）校子公式： A325（校正）=6.815A325-2.555A310-4.260A334,(一)紫外法（三点校正法）,维生素A酯 1）三点：328、316、340nm 2）波长等距：12nm 3）校正公式： A328（校正）=3.52(2A328-A316-A340),(一)紫外法（三点校正法）,4. 校正公式的应用及含量计算 第一法:样品915IU/ml环己烷溶液 max326329nm 300、316、328、340、360nm （A1、A2、A3、A4、A5) 计算吸收度比值 (A1/A3、A2/A3、A3/A3、A4/A3、A5/A3) 计算比值差,(一)紫外法（三
5、点校正法）,吸收度比值规定值,(一)紫外法（三点校正法）,第二法： a、max不在326329nm b、校正与未校正吸收度比较+3% 样品： 915IU/ml,(一)紫外法（三点校正法）,max323327nm之间 300、310、 325及334nm A300/A3250.73，计算A325（校正） a、校正在未校正吸收度土3% 以未校正吸收度计算 b、土3%，以校正吸收度计算,(一)紫外法（三点校正法）,max不在323327nm 或A300/A3250.73 需进一步纯化,(一)紫外法（三点校正法）,5. 生物效价和换算因子 （Biological potency and convers
6、ion factor,CF） 1IU=0.344g VA醋酸酯 1IU=0.300g VA醇 1g VA醋酸酯:2.907106IU/g 1g VA醇:3.33106IU/g,(一)紫外法（三点校正法）,(一)紫外法（三点校正法）,换算因子： 单位百分吸收系数所相当于的效价 VA酯百分吸收系数=1530 VA醇百分吸收系数1820 CF(酯)=2.907106/1530=1900 CF(醇)=3.33106/1820=1830,(一)紫外法（三点校正法）,6.注意问题 仪器波长校准 半暗室快速进行,(一)紫外法（三点校正法）,色谱柱：硅胶为填充剂 流动相： 正己烷-异丙醇（997：3） 检测波
7、长：325nm 系统适应性试验：维生素A醋酸酯主峰与 其顺式异构体峰的R应大于3.0。 进样5次RSD3.0%。,(二) HPLC,第二节 维生素B1( Vit B1),Vit B1,Thiamine Hydrochloride,H2O,结构特点与鉴别,噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH2缩合生成具有荧光的硫色素，后者易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光，该反应又称为硫色素荧光反应。为维生素B1所特有。,生成沉淀反应,分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂 (碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸，雷氏盐等作用形成组成恒定的沉淀 维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2
8、S,与Pb(Ac)2试液形成黑色PbS。,含量测定 Assay,硅钨酸重量法 Silicotungstic Acid Gravimetry,非水溶液滴定法 Non-aqueous Titrimetry,硫色素荧光法 Thiochrone Fluoremetry,第三节 维生素C( Vit C),L-抗坏血酸 L-去氢抗坏血酸 L-二酮古罗糖酸,有生物活性 有生物活性 无生物活性,鉴别 利用其还原性 硝酸银（银镜） 2.6-二氯靛酚(褪色） 高锰酸钾（褪色） 亚甲蓝（蓝色褪去） 磷钼酸（钼蓝） 斐林氏溶液（红色氧化亚铜）,（1）与硝酸银反应 本品加水溶解加硝酸银试液 银黑色沉淀（ChP、BP采用
9、）,（2）2，6二氯靛酚反应 本品加水溶解2,6二氯靛酚试液 颜色消失（ChP采用）,含量测定,碘量法,2,6-二氯靛酚法,第五节 维生素E( Vit E),Vit E (dl-Tocopheryl Acetate),鉴别 1.本品无水乙醇溶解硝酸，75加热 鲜红色，逐渐转为橙红色。,2. 本品醇制KOH，煮沸 游离生育酚 乙醚提取 联吡啶、三氯化铁乙醇液 深红色,ChP VE 中检查生育酚,取Vit E 0.1g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺T.S.1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得过1.0ml,固定液：5% SE30 柱 温：25510 检测器：FID 内 标：十六酸十六醇酯,
