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1、Total DNA extraction from eukaryotic tissue,动物组织DNA的提取,讲解人：蔡婷芳,实验目的,了解动物DNA的成分 掌握DNA提取的原理和操作过程,DNA提取原则,保证DNA结构的完整性 纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质 排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染,实验试剂和仪器,0.14 mol/L NaCl 1mol/L NaCl溶液 0.015 mol/L柠檬酸钠溶液 氯仿-异戊醇 95%乙醇 仪器：电子天平 玻璃棒 离心管 离心机 吸量管 试管 研钵,实验原理 动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与
2、脱氧核糖核酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。RNA核蛋白和DNA核蛋白在不同浓度氯化钠溶液中的溶解度有显著区别。DNA核蛋白在0.14 mol/L 氯化钠中溶解度低，但在 1 2 mol/L氯化钠中溶解度高；RNA核蛋白在0.14 mol/L氯化钠中仍有相当大的溶解度。所以调节氯化钠浓度，可使RNA核蛋白和DNA核蛋白分步提取。,氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀，将核酸物质萃取出来；再向萃取液中加入适量乙醇，可使DNA析出。 氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化研究中非常常用，氯仿-异戊醇抽提的原理是，氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层；异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气
3、泡。而DNA不溶于乙醇等有机溶剂，因此可以通过乙醇沉淀来纯化和浓缩DNA。,所以动物细胞中DNA提取一般有以下几步: 首先是机械法破细胞抽提； 然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染； 最后纯化出。,实验步骤,取新鲜兔子肝组织3 g，加入0.14 mol/L NaCl，0.015 mol/L柠檬酸钠溶液6 mL，在研钵中加入少量石英砂仔细研磨成匀浆； 将匀浆倒入离心管，4000 rpm，15 min，弃上清； 沉淀中加入15 mL 1mol/L NaCl，混匀，搅拌数分钟， 4000 rpm，15 min，弃沉淀； 上清转移至另一离心管，加入等体积的氯仿-异戊醇，剧烈振摇10 min，再 4000 rpm，10 min； 取上层，转移至另一离心管，加入等体积95%乙醇，可见白色丝状沉淀，可用玻棒慢慢缠绕取出沉淀，即为DNA。,结果分析与讨论 记录DNA提取过程中的现象，结合原理进行分析,谢谢观看！ 2020,
