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1、实验一 生化实验基本操作,移液管、离心机，分光光度计的使用,实验室规则,穿实验服 仪器使用的安全 实验室卫生 自己的实验器材的保管与赔偿,实验要求,认真做实验 认真写实验报告 实验与考试,目的,熟悉并掌握移液管、离心机、 比色仪的使用,一、吸量管的使用,选用原则 ：应选用取液量最接近的刻度吸管 使用： 中指和拇指拿住吸管上端，食指置吸管上端旁；用橡皮球吸液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸管顶端；吸管保持垂直，尖端与试剂瓶接触，用食指控制液体下降至所需体积的刻度处，液体凹面、刻度和视线应在同一水平面上；吸管移入准备接受溶液的盛器中，放开食指，使液体自动流出,二、离心机的使用,装液
2、 将待离心的液体置于玻璃离心管（刻度离心管）或短试管中。 平衡 两只装有待离心液体的离心管分别放入两个完整的并且配备了橡皮软垫的离心套管之中，置天平两侧配平，用滴管在较轻一侧离心管和套管之间加水，直到平衡。 放置 检查离心机，机内应无异物和无用的套管，并且运转平稳。将已配平的两管对称地放入离心机的离心孔内，做好标记，盖好上盖，开启电源。 离心 顺时针慢慢旋动转速调节钮，增加离心机转速。当离心机转速达到要求时，记录离心时间。 停止 到达离心时间后，逐渐减速并切断电源。当离心机停止转动后，取出离心管和离心套管，倒去离心套管内的平衡用水，倒置于干燥处晾干。,操作练习 取 1滴 血浆放入小试管 ，加入
3、 10 滴 10% 三氯醋酸。观察现象。 离心3000r/min 5 minutes。 观察离心后的现象。,三、分光光度法,一切物质都会对某些波长的光进行选择性的吸收，有色溶液之所以呈现不同颜色，就是由于这种对光的选择性吸收所致。 物质的吸收光谱与它们本身的分子结构有关，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同。 每种物质都具有特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该物质浓度成正比，因此可以利用各种物质不同的吸收光谱及其强度，对不同物质进行定性和定量的分析。,Lambert 定律 lgI0/I=K1L,Beer 定律 lgI0/I=K2C,Lambert-Beer 定律
4、lgI0/I=KCL 令A= lgI0/I 则 A= -lgT= KCL T为透光度； A为吸光度； K为消光系数,Fingure 1. The main elements of spectrometer,分光光度计的使用,开机，预热20分钟。调波长。 调零：T=0，T=100，A=0。 测A。,1. 721 型分光光度计 2. 722 spectrometer ( digital spectrometer),练习操作 根据4个标准浓度的硫酸钴溶液，使用分光光度计（波长500nm）获得未知浓度硫酸钴溶液的浓度。 0.5%、 1.0%、 1.5%、 2.0% 直接计算法： C样=A样/A标*C标
5、 标准曲线法：浓度为X轴，吸光度为Y轴绘制标准曲线，在标准曲线上获得未知浓度CoSO4的浓度。,结果,0,722型分光光度计 =500nm 制作人： 日期：,CoSO4(%),A,CoSO4溶液标准曲线,？,结果,计算法结果 标准曲线法结果,判断题 1.离心不用平衡，感觉差不多就行了（） 2.用分光光度计测量时吸收值越大，该物质浓度越小（） 3.离心时速度为0时即可打开盖子（） 单选题 1. 每种物质都具有特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该物质浓度成 A 比 A .正 B .反 C .没关系 2. 吸量管选用原则 B ： A.选用最大刻度的吸管 B.应选用取液量最接近的刻度吸管 C.选用最小刻度的吸管 3.离心时平衡好放入离心机时 A ： A.对称放置 B.分开放置 C. 紧挨放置,
