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1、皖南医学院研究生课程进修班临床科研方法学考试卷 请各位学员按要求认真填写此标书，将纸质版签字后，统一寄到皖南医学院研究生部，刘晓平， 241001。 科 研 基 金 申 请 书课题名称：肝内胆管结石患者胆管上皮及胆汁内粘蛋白与PH的检测及意义负 责 人：刘刚部门名称：池州市人民医院联系电话：15339668883起止年限：2011-4-1至2012-4-1申请日期：2011-3-10简表项目名称肝内胆管结石患者胆管上皮及胆汁内粘蛋白的检测及其意义研究类型BA、基础研究 B、应用基础研究C、应用研究 D、开发研究负责人姓名刘刚性别男民族汉出生日期 1980-6-1 行政职务专业职称医师学 科普通
2、外科学最后学历本科最后学位学士研究专长肝胆外科研究起止年月 2011-4至2012-4 部门名称池州市人民医院普外科联系电话2816188主要参加者姓 名性别年龄专业职称研究专长学历学位工作部门刘刚男31医师肝胆外科本科学士池州市人民医院陈云男47主任医师胃肠外科本科学士池州市人民医院花庶庆男29医师肝胆外科本科学士池州市人民医院杨国平男30医师胃肠外科本科学士池州市人民医院陈德忠男39主治医师微创外科本科学士池州市人民医院詹志林男29医师肝胆外科研究生硕士池州市人民医院汪开贵男41主任医师肝胆外科研究生硕士池州市人民医院预期成果胆管上皮细胞表达和分泌粘蛋白及胆汁中胆管上皮细胞内PH值变化和肝
3、内胆管结石形成有直接关系，肝内胆管结石的发病有免疫学等多方面因素参与。它将强烈提出如何有效控制粘蛋白的高表达，改变胆汁的酸碱环境将是改善胆石病的治疗效果下一个值得研究的课题申请经费(单位：元)50000一、 国内外研究概况和发展趋势，研究目的与意义肝内胆管结石是我国常见且难治的疾病。目前各种手术和非手术治疗总体效果不满意，结石残留率复发率手术并发症发生率和再手术率均高，而且常出现胆道梗阻出血感染和胆源性胰腺炎等并发症给患者带来巨大心理和身体痛苦，它的诊疗成为家庭和社会的重大负担。有签于此肝内胆管结石（hepatolithiasis）的病因学研究对于其诊断和治疗具有重大意义。目前认为其病因复杂，
4、肝内感染，胆汁淤积，胆管解剖异常等病因已获共识，但其病因学的研究方向在分子生物学的影响下正逐步向胆管局部免疫病理变化转变。20世纪80年代以来人民普遍注意到粘蛋白在胆石病成因中有重要作用，但关于粘蛋白与肝内胆管结石的关系研究较少，胆汁及胆管上皮的酸碱环境与肝内胆管结石的关系鲜有报道。我们课题旨在免疫组化等技术的辅助下，对肝内胆管结石与胆管上皮细胞胆汁内粘蛋白及PH值的内在关系进行统计学的研究，为肝内胆管结石病因的流行病学研究做出贡献。冀希望我们的发现对于肝内胆管结石的防治犹如幽门螺杆菌的发现对于消化性溃疡的防治，即肝内胆管结石的治疗发生根本原则的变化，而不是胆管切开取石及病变肝叶切除等手术的对
5、症处理，真正做到审因论治。二、研究内容、拟解决的关键问题、技术路线及可行性分析1.研究内容该项课题研究试图从免疫学的角度探讨肝内胆管结石的病因。通过免疫组化技术检测肝内胆管结石患者胆管上皮粘蛋白表达分布,免疫比浊法测定胆汁中粘蛋白含量,PH试纸法同步测定胆管上皮及胆汁PH值，以明确胆管上皮细胞表达和分泌粘蛋白及胆汁中胆管上皮细胞内PH值与肝内胆管结石形成的内在联系，进而为肝内胆管结石的诊断和治疗提供新的病因学依据。2技术路线及可行性分析1实验对象分组 l 对照组：选择2011 年 月-2012 年4 月间，池州市人民医院收治的因肝囊肿或肝血管瘤而行肝叶切除的病例15例，在手术切除的标本中远离病
6、灶取含肉眼可见的肝内胆管的小块肝组织。抽取胆管内胆汁l 肝内胆管结石组：选择2011 年 4月-2012 年 4月，池州市人民医院收治的原发性肝内胆管结石而行肝叶切除的病例30例，在手术切除的标本中，经肝断面切除含结石之肝内胆管，包括其周围少许肝组织。抽取胆管内胆汁。2肝内胆管组织常规病理检查采用常规石腊包埋标本，切片，HE染色，显微镜观察3免疫组织化学检测 利用粘蛋白单克隆抗体与粘蛋白核心多肽抗原的特异性结合反应来检测和定位肝内胆管组织中粘蛋白的表达和分布情况，判定阳性结果的强度登等级。4胆管内胆汁中粘蛋白定量测定 采用免疫比浊法测定肝内粘蛋白含量。5肝内胆管上皮细胞及胆汁中PH值测定 采用
7、PH试纸法测定肝内胆管上皮细胞及胆汁中PH值6统计学分析 所得数据均用EXCEL录入计算机，运用SOSS15.0统计软件中MONTE CARLO确切概率法进行分析，P值0.05为有显著性差异的标准。三、研究进度和预期成果准备阶段 2011年 4月 复习文献，课题组人员培训，制定实验设计方案，购买实验试剂和药品。实施阶段 2011年 6月-2012 年 3月前期 2011年6月2011年8月，完成病例数 6人次中期 2011年7月2011 年11 月，完成病例数10人次后期 2011年12月2011 年3 月，完成病例数 14人次 结题阶段 20 11年 4月整理分析资料资数据，撰写科研论文，迎
8、接验收四、目前已具备的条件（技术水平和物质基础）1. 工作基础和优势（主要技术优势、专业特色及本学科发展方向）我院所在的池州市农村患者多，是流行病学上的肝内胆管结石高发区，胆道外科是我院优势特色学科，故病历资料丰富。病理科免疫组化技术成熟，和我科有良好的合作传统，将为课题研究提供至关重要的技术支持。作为院重点学科，我科对肝内胆管结石诊断治疗包括开腹手术，腹腔镜手术，十二指肠手术，对肝内胆管结石的胆管感染，胆管畸形等病因有深刻认识，在研究中将科学地剔除这些影响因素。多科参加人员技术力量雄厚，本课题有副主任医师 位，研究生 位。2. 预试情况（近3年开展的与本课题研究相关研究工作及其取得的进展和成
9、果，已经发表的具有代表性的论文、著作）汪开贵副主任医师硕士学位论文粘蛋白MUC1和MUC2在含结石之肝内胆管上皮组织中的表达及意义获全国优秀博士硕士论文。3. 科研设备和实验条件自动组织脱水机组织切片机组织漂烘仪隔水电热恒温箱显微镜五、经费预算支 出 科 目金额（元）计 算 根 据 及 理 由科研业务费10000仪器设备费15000协作费5000实验材料费20000合 计50000六、既往获得本基金资助情况（资助年度、金额及结题情况）无七、科室意见不填负责人签字： （加盖公章）： 年 月 日八、院部意见不填负责人签字： （加盖公章）： 年 月 日九、专家委员会评审意见不填 主任委员签字： 年 月 日十、科研管理部门审查意见不填 负责人签字： 公 章 年 月 日7
