《造血干细胞捐献者的HLA基因分型ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《造血干细胞捐献者的HLA基因分型ppt课件（33页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、造血干细胞捐献者血样的 HLA基因定型及资料录入 邓志辉 深圳市输血医学研究所 2005年5月16日,主要工作流程,一、各“工作站”将审核、遴选合格的造血干细胞捐献者血样（贴有骨髓条码），以及捐献者样本清单（捐献者姓名及骨髓编号），一并送达我研究所免疫遗传实验室； 二、免疫遗传实验室对捐献者血样进行HLA-A、B和DRB1基因定型，对送检血样的HLA基因定型结果负责； 三、出具“捐献者HLA基因分型检测结果”报告。,主要内容,（1）捐献者HLA基因定型血样的运输 （2）HLA相关基本概念 （3）HLA分型（定型）技术 HLA血清学分型技术 HLA基因分型技术,捐献者HLA基因定型血样的运输,注
2、意事项： 1、因“登记表”中填写的内容审核不合格血样、以及经HBV等化验检查健康不合格的血样，予以剔除； 2、检查血样管有无破管； 3、路途远、条件许可，可放置适量干冰； 4、由专人运送，防震、防颠覆； 5、合格的HLA基因定型血样与捐献者样本清单一并送往组织配型实验室。,人类白细胞抗原(Human Leucocyte Antigen, HLA),1958年，Dausset采用白细胞凝集实验，检测出第一个人类白细胞 抗原Mac（A2）。 为高度复杂的遗传多态性系统，每个人的HLA千差万别，即人体生物学的“身份证” ， 不同的民族、同一民族不同的地域，HLA基因及单倍型分布有其特点， HLA为人
3、类主要组织相容性系统（MHC），与移植排斥反应密切相关，又称移植抗原。 是机体“识别自身”、“排除异已”的主要遗传标记，参与免疫应答反应。 HLA基因家族位于人类第6号染色体短臂，全长3.6 Mb，HLA基因家族是迄今为止最复杂、多态性最丰富、免疫功能相关基因最集中、与疾病关联最密切的一个区域。,HLA抗原的分类,HLA-I类：由一条具有多态性的多肽链和一条没有多态性的2微球蛋白通过非共价键组成异二聚体。 经典HLA-I类抗原：包括HLA-A、B、C位点抗原，分布于几乎所有有核细胞表面上。如T淋巴细胞、B淋巴细胞等，血小板上吸附HLA-A、B抗原。 非经典HLA-I类抗原：包括HLA-E、G
4、、F位点抗原，抗原在特定时间选择性分布。 HLA-II类：由34KD的 链和29KD的链以非共价键连接而成，包括HLA-DR、DP、DQ抗原； 仅分布于B淋巴细胞、巨噬细胞、树突细胞等少数细胞表面。 HLA-类：主要包括补体分子C2、C4及Bf等。,HLA抗原结构,HLA的免疫原性及骨髓库建库工作中 常规检测的HLA位点,HLA是一个高度复杂的遗传多态性系统，如： 经典HLA-I类抗原：HLA-A、B、C位点抗原； 非经典HLA-I类抗原：HLA-E、G 、F位点抗原 HLA-II类：HLA-DR、DP、DQ位点抗原 HLA的免疫原性，主要以HLA-A、B和DRB1的免疫原性较强，因此，骨髓库
5、建库工作中，通常仅对HLA-A、B和DRB1位点进行定型。 无关供者骨髓移植中，NMDP、JMDP有研究资料表明，供/受者对HLA-CW基因的匹配程度，与GVHD、移植成活率相关。,HLA基因,定位于人类第6号染色体短臂（6p21.31），全长3.6 Mb，占人类基因组碱基数的0.1%。 HLA-I类基因：有10个遗传座位，靠近染色体顶端，HLA-A、B、C、E、G、 F为表达基因，H、J、K、L为假基因，无基因产物。 HLA-类基因：靠近染色体着丝粒端，主要包括HLA-DR、DP、DQ基因座。,HLA基因结构,体细胞为二倍体，同源染色体之间相互配对， 每一HLA位点有2个等位基因，一个来自于
6、母亲，另一个来自于父亲。 检测HLA-A、B和DRB1三个位点，有6个等位基因，即6个HLA分型数据。,检出的HLA抗原及等位基因,2003年世界卫生组织（WHO）HLA因子命名委员会命名的HLA等位基因： HLA座位 等位基因 特异性 HLA-A 250 24 HLA-B 490 49 HLA-Cw 119 13 HLA-DRB1 315 17 HLA-DPB1 99 6 HLA-DQB1 53 7 HLA 系统等位基因丰富，每个人的等位基因型千差万别，可以说在随机人群中，难以有完全相同的。,HLA的命名,1、血清学命名：遗传位点后用数字表示，如A1、A2、A3、B5等。 以大写字母A、B、
7、C表示HLA的遗传座位；HLA特异性以数字表示；除HLA-A、B位点抗原的特异性的命名数字不重复外，其它位点抗原连续独立命名；C位点抗原以Cw为字首命名，以和补体系统区别。 2、HLA等位基因命名原则：位点后加“*”，再加数字表示。如DRB4*01 03 1 02 N 第1、2位数表示HLA抗原的特异性，第3、4位数表示等位基因（亚型），结尾加N表示无效等位基因或不表达基因。 HLA等位基因所对应的血清学特异性，可查阅过WHO公布的HLA字典。 HLA低分辨水平基因定型：确定HLA基因前2位数。 HLA高分辨水平基因定型：确定HLA基因第4位以后的数字。,HLA的生物学功能,HLA参与免疫应答
8、反应，与抗原肽结合形成HLA-抗原肽复合物，抗原提呈细胞将此复合物交由T淋巴细胞处理，T细胞上的T细胞受体（TCR）能够对抗原提呈细胞上的HLA-抗原肽复合物产生双识别，从而介导免疫反应。,T细胞受体对HLA-抗原肽复合物的 双识别作用,人类白细胞抗原（HLA）的应用,HLA分型在骨髓和器官移植组织型 法医学亲子鉴定和个体识别 人类种群学 安全输血 疾病相关联的研究等领域（如HLA-B27）,HLA分型技术,1、传统的血清学和细胞学分型方法 因需要有活性的细胞、定型血清或分型细胞来源困难、分型准确性较差等原因，已逐步被淘汰。 2、PCR为基础的HLA基因分型技术 分型所需要的血样量少，不需要有
9、活性的细胞，实验重复性好、结果的准确性高，易于质控和准标化。HLA基因分型技术取代了血清学方法。 当前的“中国造血干细胞捐献者资料库”的建库技术，不同于以往的“中华骨髓库”。前者采用基因定型技术检测HLA-A、B、DRB1基因，后者采用血清学方法检测HLA-A、B抗原。,“中国造血干细胞捐献者资料库”对捐献者血样HLA基因分型技术的要求,对HLA-A、B和DRB1进行基因分型，分辨率达低分辨水平。 结果既报告每一样本的基因型，同时报告对应的特异性。 通过各省级组织配型实验室室内质控，以及国家“HLA质控实验室”组织的室间质控对HLA基因分型的准确性进行质量监控。,HLA基因分型技术,PCR-序
10、列特异性引物（PCR-SSP） PCR-SSO流式磁珠分析 HLA测序分型（SBT） PCR-序列特异性寡核苷酸探针（PCR-SSOP） 基因芯片技术 参比链介导的构象分析(RSCA) HLA单倍体基因测序,HLA基因分型的步骤,1、DNA提取 2、PCR扩增 3、PCR扩增产物的检测 4、结果分析（判别受检者HLA基因型） 5、HLA基因定型报告,PCR-序列特异性引物（PCR-SSP）分型技术,基本原理： 使用序列特异性引物（SSP） 特异性扩增HLA等位基因，电泳 分离PCR扩增产物，根据是否存 在PCR产物以及片段大小，确定 相应基因。 主要步骤： 1、DNA提取 2、PCR扩增 3、
11、琼脂糖凝胶电泳检测 4、结果分析,PCR-序列特异性引物（PCR-SSP）分型技术,PCR-序列特异性引物 （PCR-SSP）分型技术,特点：简便、快速、直观等，特别适合于尸肾移植的组织配型；所需设备简单，易于开展；为常规采用的经典HLA基因分型技术。 应用：适合于经典HLA-、类分子的基因分型 分辨率：低分辩、高分辩基因分型水平。,PCR-SSO流式磁珠分析技术,基本原理：以反向核酸杂交为基础，杂交产物采用流式磁珠仪进行自动检测，为高通量HLA基因定型技术。,PCR-SSO流式磁珠分析技术的特点（一）,实验原理、引物设计、扩增产物的检测等，与SSP分型技术不同。 PCR扩增反应结束后，将标记
12、探针的磁珠直接加入PCR产物中，微量离心管（反应板）置于PCR扩增仪上进行分子杂交； 杂交产物用流式磁珠仪进行自动进样检测，用HLA分析软件确定HLA基因型。,流式磁珠分析技术的特点（二）,配合DNA全自动DNA提取仪及多个PCR基因扩增仪，具有高通量、操作简便、快速特点。适合骨髓库、脐血库大批量样本的HLA基因分型工作。 基于流式磁珠分析技术，已有多家商品化、低分辩水平的HLA基因分型试剂盒。 可用于HLA-A、B、C、DRB1和DQB1座位的基因分型。,HLA测序分型（SBT）技术,HLA测序分型（SBT）技术,国际公认的HLA基因分型方法，高分辨率、高精度； HLA测序分型技术较复杂，受
13、实验室设备条件、试剂价格的限制，以往能够开展HLA测序分型的实验室尚不多； 随着非血缘关系造血干细胞移植供/受者对HLA高分辩确认实验，以及人类学研究、HLA与疾病相关联等领域的需要，SBT技术的开展已日益增多。,HLA测序分型（SBT）技术,可在同一PCR反应条件 、同一测序反应的条件下， 对不同HLA座位进行同步 扩增，简化了实验操作； 随着毛细管电泳基因测 序仪及新的HLA分析软件 的应用，HLA测序分型处 理样本的能力逐步高通量 化。,HLA基因分型技术的展望,HLA基因分型技术呈现多元化趋势，HLA基因分型涵盖面不断扩大； 低分辩、中分辩向高分辩水平发展； 分型结果的准确性和精确度不
14、断提高； 实验操作更为简便快速； 不同的HLA分型技术，其实验原理、优缺点不同，因而各实验室可根据自身的目的、需要并结合自身的技术工作平台，加以选择应用。,谢谢！,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析,主要经营：课件设计，文档制作，网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or computer, or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field,
