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1、小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良 08-10-30 13:48:00 作者：吴建芳编辑：studa20【摘要】 目的 建立一种简单方便但高效的血管平滑肌细胞原代培养方法。方法 改良酶消化法。结果 用该法培养细胞传代生长快，细胞纯度达98%以上，足以满足各种细胞试验需求。结论 与传统方法相比该法简单经济，试验成功率高，节省材料和时间，而且可获得更多纯度较高的细胞 。 吴建芳（1972），女，汉族，青海籍，副教授，硕士 【关键词】 小鼠 动脉血管平滑肌细胞 原代培养 Abstract Objective To create a simple and effective primary cult
2、ure methods for mouse vascular smooth muscle cells (VSMC). Methods Reformed enzymatic digestion. Results VSMC was grown well and fast, the purity is more than 98% which can meet various cell tests. Conclusion Comparing with traditional methods , this approaches can save much time and more materials,
3、 also have better cell quantities and purity. Key words Mouse Aorta VSMC Primary cult 在心血管疾病的基础研究中，对血管平滑肌细胞生物特性的研究是极其重要的一部分，其对揭示血管病变机理至为关键。体外培养平滑肌细胞是常用试验模型，近年来随着细胞培养技术的发展，原代培养的成功率有所提高，但仍然存在许多问题，经验不足者往往要花费大量时间、精力去摸索，不但影响试验进程而且浪费材料，而有些组织材料是极为昂贵且很难获得的，所以为了提高平滑肌细胞原代培养的成功率，并在有限的材料下获得好的结果，我们大胆采用了酶消化法（常规采用
4、组织块培养法），从取材方法及消化步骤等方面进行了改良，试验结果证实该法简单经济，成功率高，细胞生长快，纯度高，现介绍如下。 1 材料与试剂 11 组织来源：C57BL/6J小鼠(鼠龄8周以后)主动脉。 12 试剂： 鼠抗SMC- -actin ,Cy2 conjugated affinity purified anti-mouse IgGH/L，戊巴比妥钠注射液。 13 培养基：在DMEM 培养基中添加 胎牛血清、青霉素、 链霉素、谷氨酰胺，过滤除菌备用（不要超过四4周）。 14 酶消化液：Collagenase Type 7 mg 溶于5 ml DMEM 培养基中(无血清)， 过滤除菌即用。
5、 15 乙醇：用无菌蒸馏水配制。 16 器械、仪器：齿、平镊，组织、眼科剪，无菌注射器，培养皿，解剖显微镜（Paxcam,Vistavision），荧光显微镜(LEICA DMI6000B）。 2 方法 21 常规麻醉小鼠，70乙醇冲洗颈部和腹部, 打开胸、腹腔 , 暴露心脏。 22 mL 注射器穿刺左心室， PBS 缓冲液冲洗主动脉。 23 完整分离主动脉，放入100 mm无菌平皿，滴12滴PBS 缓冲液。 24 解剖显微镜下撕去血管外膜至血管光滑透明（如粗糙不平说明外膜去除不干净）。 25 取出血管，放入另一有 PBS 缓冲液的平皿里，转到超净工作台操作。 26 眼科剪将血管快速剪成 mm2 大小后用胶原酶消化 h（组织块变成细胞团即可）。 27 加入 DMEM培养基终止消化并离心倾去上清液，离心管中加入1 ml 新鲜培养基重悬细胞，接种于孔培养板中的一孔，常规静置培养。 28 第2天观察是否有细菌污染，如有要更换新鲜培养液，静置培养。于第、天细胞生长达培养皿面积的左右时可传代，常规方法即可。
