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1、 吉 林 工 商 学 院毕 业 论 文 题目名称： 绿豆皮中类黄酮提取工艺参数的研究 院 系： 食品工程分院 专 业： 食品科学与工程 学生姓名： 学 号： 指导教师： 2011年5月10日毕业论文原创性声明本人郑重声明：所呈交毕也论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名： 年 月 日绿豆皮中类黄酮提取工艺参数的研究摘 要：本文研究了绿豆皮中类黄酮的提取工艺参数。通过对固液
2、比、乙醇体积分数、提取温度与提取时间的单因素试验确定水平点，设计4因素3水平正交试验，选用L9(34)正交表，优选绿豆皮类黄酮的最佳提取工艺为固液比140，乙醇体积分数为40%，提取温度75，提取时间90min。在此基础上得到绿豆皮中类黄酮的提取量为19.83mg/g，且5次平行试验的相对标准偏差为0.78%，总类黄酮的平均回收率达97.67%。关键词：工艺参数；类黄酮；绿豆皮A method of extracting flavonoids from the mung bean hullAbstract: The optimum method of extracting flavonoids
3、 from mung bean hull was investigated by using factorial and orthogonal experimental designs. An L9(34) experiment involved material-liquid ratio，ethanal concentration，extracting temperature，and extracting time was carried out. The results showed that at conditions at material-liquid ratio of 140，et
4、hanol concentration of 40%，extracting temperature of 75，and extracting time 90min，the optimal extraction quantity of 26.23mg/g was obtained.Key words: technology； flavonoids； mung bean hull目 录前 言(1)1 试验材料(2)1.1试验原料(2)1.2试验试剂(2)1.3试验仪器(2)2 试验方法(2)2.1材料的处理(2)2.1绿豆皮类黄酮提取液的制备(2)2.3绿豆皮中类黄酮定性试验(2)2.4提取液中类
5、黄酮含量的测定方法(2)2.4.1芦丁标准液的配制(2)2.4.2测定方法(2)3 结果与分析(3)3.1绿豆皮提取液定性分析试验结果(3)3.2总类黄酮含量的测定(3)3.2.1芦丁标准曲线的绘制(3)3.2.2测定方法回收率试验(3)3.3单因素试验(3)3.3.1提取溶剂的选择(3)3.3.2提取溶剂的浓度(3)3.3.3提取温度的影响(5)3.3.4固液比的影响(5)3.3.5提取时间的影响(5)3.4正交试验(6)3.5提取方法的精密度试验(7)3.6提取方法的回收率试验(7)4 结论(7)参考文献(8) 吉林工商学院本科毕业论文前 言类黄酮是广泛存在于自然界的一大类化合物，多数为结
6、晶性固体，少数(如黄酮苷类)为无定形粉末。其数量之多列天然酚性化合物之首，大多具有颜色，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚、乙酸乙酯等有机溶剂及稀碱液。类黄酮在植物体内大部分与糖成苷，一部分以苷元形式存在。类黄酮多存在于高等植物与羊齿类植物中。苔类中含自的类黄酮为数不多，而藻类、微生物、细菌中没有发现类黄酮。类黄酮广泛存在于植物的所有部分，包括根、茎、心材、树皮、叶、花、果实中，在植物叶中大部分类黄酮一般是以苷的形式存在，而在很多个种的叶子角质中明显存在有微量的配基。类黄酮大多存在于一些有色植物中，如在松树皮提取物、绿茶提取物、银杏叶提取物、红花提取物中都发现类黄酮的存在。研究表明，类黄酮具有抗溃疡
7、、解毒、利尿和预防冠心病及降血脂等调节血管渗透性的维生素P的功能，如芸香甙、检皮甙等和抗菌、消炎、清热、泻火功效，如黄岑甙及镇痛和雌性激素特点，还有抑制肿瘤作用，如牡荆素。同时各种研究结果表明类黄酮是一种高效的天然抗氧化剂，能够有效的防止油脂及其制品氧化和酸败，保证含油食品的感官品质和营养价值，延长保存期。绿豆又名植豆、青小豆、文豆。绿豆为豆科一年生草本植物，原产于我国、印度、缅甸，有2000多年的栽培史。绿豆是我国人民的传统豆类食物，在全国各地广泛种植，产量颇高。绿豆蛋白质的含量几乎是粳米的3倍，多种维生素、钙、磷、铁等无机盐都比粳米多。绿豆不仅可以做粮食，还可以制作成各种可口的食品，更是防
8、病、治病的良药。我国中医认为，绿豆能补益元气。调和五脏，清热解毒，清暑利水，安精神，去浮气，止消渴，利肿胀，行十二经脉，解一切毒。常用于治疗暑热烦渴、水肿、泻痢、小便不利、烦躁闷乱、痈肿、烫伤、解药物中毒。本草用法研究指出：“毒邪内积，凡脏腑经络皮肤脾胃无一不受毒扰，凡一切痈肿等症，无不用此奏效。”绿豆的外皮称为绿豆衣，其清热解毒之力，尤胜于豆，特别用于眼病，有明目退翳的作用(赵守训，1997)。绿豆皮里面含有大量的抗氧化成分，如类黄酮、单宁、皂甙等。里面还有生物碱、豆固醇、香豆素、强心甙，以及大量的膳食纤维等。但是在绿豆的加工过程中，绿豆皮经常只是充当饲料或者作为垃圾丢弃，这造成了营养物质的
9、浪费。随着现代物质文明的提高与社会经济的发展，人们的饮食意识不断发生变化，饮食健康的消费意识在不断加强。含有天然活性成分的保健食品成为人追逐的目标，其中类黄酮以纯天然、高活性、见效快、作用广泛等特点日益受到人们的关注。而绿豆皮富含丰富的类黄酮且资源丰富，正适合提取类黄酮之用。本论文通过分析提取溶剂、料液比、温度、时间等因素，采用正交试验优化了绿豆皮类黄酮的提取工艺及参数，为绿豆皮资源的高值化利用与开发提供基础数据。1 试验材料1.1试验原料绿豆皮(产地黑龙江)。1.2试验试剂芦丁：长春生物制品所，分析纯；硝酸铝：上海振兴试剂厂，分析纯；亚硝酸钠：上海新宝精细化工厂，分析纯；氢氧化钠：北京化学试
10、剂有限公司，分析纯；无水乙醇：南京化学试剂有限公司，分析纯；石油醚：沈阳精细化学品有限公司，分析纯；镁粉：国药集团化学试剂有限公司，分析纯；盐酸：沈阳化学试剂厂，分析纯。1.3试验仪器HH-S恒温水浴锅(江苏金坛市环宇科学仪器)；SHB-循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；DU-650紫外可见光分光光度计(美国Beckman公司)；电热干燥箱(天津实验仪器厂)；JYL型九阳食品粉碎机(山东九阳小家电有限公司)；FA2004N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)。2 试验方法2.1材料的处理将从绿豆上剥离下的种皮，放入50的烘箱中恒温干燥至种皮变脆，取出后用粉碎机粉碎，过80目筛，放入
11、干燥器中备用。2.1绿豆皮类黄酮提取液的制备用电子天平准确称取1g绿豆皮粉末，置于250mL圆底烧瓶中，用一定体积和浓度的乙醇为溶剂，在一定温度与时间下，加热提取。收集提取液，真空抽滤，向滤液中加入适量硅藻土，于常温下搅拌23min，静置5min，将蛋白多糖等大分子物质吸附，而后进行真空抽滤，滤液倒入分液漏斗中，用石油醚分3次萃取，将色素、油脂等脂溶性物质萃取出去，取下层清液收集合并，待测。2.3绿豆皮中类黄酮定性试验使用盐酸-镁粉还原反应进行定性分析，它是检查是否有类黄酮的最常用方法之一。在样品的乙醇溶液中加入少许镁粉振摇，再滴加几滴浓盐酸12min(必要时水浴上加热)即显出颜色。多数类黄酮
12、、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红至紫红色，少数显紫至蓝色，当B环上有-OH或-OCH3取代时，呈现的颜色随之加深，其他黄酮类物质，除少数异黄酮外，都不显色。2.4提取液中类黄酮含量的测定方法类黄酮测定用硝酸铝显色法。2.4.1芦丁标准液的配制精密称取干燥至恒重的芦丁标准样品0.0416g，加适量的乙醇(体积分数为30%)，稍加热溶解，冷却后定容100mL，摇匀，配成质量浓度为0.416mg/mL的芦丁标准液，备用。2.4.2测定方法精密量取芦丁标准液适量，以蒸馏水为对照，加体积分数为30%乙醇至5mL。先加0.3mL亚硝酸钠溶液(50mg/mL)，摇匀，放置6min；再加0.3mL
13、硝酸铝溶液(100mg/mL)，摇匀，再放置6min；最后加4mLNaOH(40mg/mL)，用30%乙醇定容，放置1520min，在波长510nm处测定吸光度。2.4.3绿豆皮提取液中类黄酮含量的测定准确吸取样品溶液1mL，置于10mL容量瓶中，蒸馏水为空白，按(2.4.2)测定方法操作，根据标准曲线计算相应的类黄酮浓度，最终得出提取液中类黄酮含量。3 结果与分析3.1绿豆皮提取液定性分析试验结果提取液经盐酸-镁粉还原反应，其颜色反应为浅橙红色。结果表明绿豆皮提取液的活性成分初步认定为类黄酮物质，并且其基本结构是2-苯基色原酮，母核含有碱性氧原子，又带有酚性羟基，因此能与某些还原试剂发生颜色
14、反应。3.2总类黄酮含量的测定3.2.1芦丁标准曲线的绘制精密移取芦丁标准液0.2，0.5，0.8，1.1，1.4，1.7，2.0，2.3，2.6mL，分别置于10mL容量瓶中，按(2.4.2)测定方法操作，得如图1标准曲线：Y=9.6645X+O.0092，R2=O.9997。以此方程计算提取液中类黄酮的含量。图1 芦丁标准曲线3.2.2测定方法回收率试验精密量取已知含量的绿豆皮类黄酮提取液1.0mL，分别加入质量浓度为0.416mg/mL的芦丁标准液0.2，0.6，1.0mL，作回收率试验(见表1)，其平均回收率为97.67%。表1 回收率试验提取液中类黄酮质量/mg芦丁加入量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%0.49660.08320.574099.097.670.49660.24960.719396.40.49660.41600.890797.63.3单因素试验选择对提取有影响的因素:乙醇体积分数、提取温度、提取时间、固液比，进行单因素试验，再在单因素试验结果的基础上，以测得的绿豆皮类黄酮提取量为分析指标，选择合适的正交表，确定绿豆类黄酮的最佳提取工艺参数。3.3.1提取溶剂的选择工业上常用的提取溶剂为甲醇、乙醇、丙酮等，但甲醇、丙酮对人
