《Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序终稿》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序终稿（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、标题Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序起 草 日 期颁发部门：研发事业部页数审 核 日 期分发部门：QA审核日 期批 准 日 期生效日期变更记载：原文件号 批准日期 生效日期变更原因及目的： 文件系统修订。1 目的：Waters e2695型高效液相色谱仪的一般标准操作程序。2 范围：Waters e2695型高效液相色谱仪。3 责任人：相关实验人员4 设备部件及名称4.1 Waters e2695分离单元4.2 2998型二极管阵列检测器4.3 Empower色谱工作站各部件可独立操作或通过色谱工作站控制，色谱数据处理由色谱工作站完成，其操作系统为Windows XP Pr
2、ofesional SP3，工作站软件为色谱管理软件。5 标准操作程序5.1开机前准备5.1.1 检查桌面是否清洁、整齐。5.1.2 检查设备是否清洁，连接管线是否正常，色谱柱是否需要更换。5.1.3 检查电源线有无破损。5.1.4 接通电源，检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。5.1.5 准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。流动相和纯水应用微孔滤膜过滤（纯有机相或含一定比便例有机相的用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的用水系滤膜）。一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。如需使用，应重新过滤。流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。
3、该泵带有真空脱气机，可不超声，但要在泵电源开启后，等脱气机停止工作后（约需5分钟）再进行泵的其它操作。5.1.6 准备样品。为延长层析柱使用寿命，建议使用流动相溶解样品，如果不是，一定要做预试验，确保样品在流动相溶液中不出现沉淀。如果样品中成份复杂，特别含有强保留成分，建议过C18 小柱预处理。样品在进样前必须经0.45m的微孔滤膜滤过，根据溶剂性质选择合适的滤膜。过滤完毕后，置于样品盘上，记录样品所放的位置号。5.2 开机 接通稳压电源，待电压稳定在220V时，依次打开下列仪器的电源：高压泵、柱箱、系统控制仪、色谱工作站。接通 2695 分离单元后，约 20s 仪器开始自检，约 1min 后
4、，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“ Idle ”时，仪器进入待命状态。5.3 溶剂管理系统的准备5.3.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【 Menu/Status 】，进入“ Status （ 1 ）”屏幕。5.3.1.1 湿启动 在“ Status （ 1 ）”屏幕下，光标选“ Compomtion ”中欲使用的流动相，输入流动相组成及比例，按【 Enter 】再用光标选“ Degasser ”中的“ Normal ”，按【 Enter 】。按【 Direct Function 】，光标选“ Wet Prime ”，输入流速及时间 ，按【 OK 】。5
5、.3.1.2当溶剂的管路是干的或存在较多气泡不易排出时，进行干启动。在“ Status （ 1 ）”屏幕下，按【 Direct Function 】，光标选“ Dry Prime ”，按【 Enter 】，显示“ Dry Prime ”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如【 OpenA 】，光标选“ Duration ”，按数字键输入 5min ，按【 Continue 】，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。5.4 样品管理系统的准备 5.4.1 冲洗自动进样器在“ Status （ 1 ）”屏幕下，光标选“ Composition ”，输入流动相的组
6、成。按【 Direct Function 】，光标选“ PurgeInjector ”，按【 Enter 】，显示“ Purge Injector ”屏幕，输入“ Sample Loop Volumes 6.0 ” ，光标下移“ Compression Check ”，按任意数字键，按【 OK 】。5.4.2 冲洗进样针在主屏幕下，按【 Diag 】，显示“ Diagnositcs ”屏幕，按【 Prime Ndl Wash 】，显示“ Prime Needle Wash ”屏幕，按【 Start 】， 30s 内应见溶剂从废液排放口流出。按【 Close】、【 Exit 】。 5.4.3 冲
7、洗柱塞杆密封垫在主屏幕下，按【 Diag 】，显示“ Diagnosities ”屏幕，按 Prime Seal Wash ，显示“ Prime Seal Wash ”屏幕，按【 Start 】，待排放口有水流出，按【 Halt 】、【 Close】、【 Exit 】。 5.4.4 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“ Door is Open ”屏幕，装入样品盘，按【 Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。 5.5Empower色谱工作站操作5.5.1 登录 点击桌面上Empower图标，出现Empower登录窗口，输入用户名和密码，然后单击“确定”，进入Em
8、power。每次登录前必须输入用户名和密码。注：出厂设置的用户名为 system，密码为 manager。5.5.2 项目管理 5.5.2.1 新建项目 ：双击“配置系统”进入，按“新建项目向导”提示建立新项目。注：项目名中不能出现空格。可使用下划线(_ ) 分隔词。另外，名称不能以数字开头。项目是方法、结果、自定义字段、视图筛选器和原始数据的集合，由用户定义。该集合驻留在Empower 数据库中并在“ 浏览项目” 中显示。项目是为了方便用户归类、管理和检索相应的数据，应根据实际情况来决定是否建立，并不是每次开机都要创建。5.5.3 数据采集5.5.3.1 双击“运行样品”进入，在出现的页面的
9、左框中选择欲存储采集数据的“项目”，在右框中选择所需的色谱系统，然后单击“确定”。5.5.3.2 出现“运行样品”窗口后，选择 “单一”或“样品”表单画面中的“创建方法组”快捷键 ，出现新方法组选择仪器方法窗口。可以在现有的仪器方法中选择一个或者单击“新建”来创建新的仪器方法。如果单击了 “新建”，会出现仪器方法编辑器。 窗口会为所选色谱系统中的每个仪器显示一个图标。选中不同的图标，即可编辑相应的仪器参数。请根据您的实验方法设置相应的每个仪器具体参数。编辑仪器参数完成后单击“文件” “另存为”，出现 “保存仪器方法”对话框。输入仪器方法名，单击“保存”，保存该仪器方法。 关闭“仪器方法编辑器”
10、窗口。 新建的仪器方法出现在仪器方法列表中。选中所要的仪器方法， 单击“下一步”。 出现“选择缺省方法”页。 选择“处理方法”与“报告方法”（如尚未建立合适的方法，则接受默认设置），单击“下一步”， 出现“命名方法组” 页。输入方法组名（缺省设置成与刚建立的仪器方法名 相同），必要时输入注释后，单击“完成”。 回到运行样品窗口。5.5.3.3 在“方法组”下拉菜单中选择欲使用的方法组，同时在下方的 “仪器方法”下拉菜单中，选择欲使用的仪器方法。“监视器”键 单击 中“监视器”键，观察基线。5.5.3.4 待系统平衡后，即可单击 “停止”键，终止观察基线。随后等到系统空闲后，设定采集的参数样品名
11、、功能、样品瓶以及样品体积与运行时间，最后单击 “进样”或 “运行”，开始采集数据。进样时状态条会做出指示。色谱数据被采集并显示在“实时”图中 。注：如果不知道运行时间，第一次进样应设长一些，如填60min ，进样确认后，进第二针时再改回适合的时间。 注：“ 方法组” 栏中，默认会出现刚刚建立好的方法组的名称，如果需要选择其它已经建立过的适用的采集方法组，则可从此栏的下拉菜单中选中即可。 5.5.4 数据处理5.5.4.1 单击鼠标左键进入 “浏览项目”，选择欲浏览数据所在的项目，然后单击“确定”，进入该项目。 5.5.4.2 在“通道”选项卡中，选中欲修改的标准品和样品信息 。注：在Empo
12、wer 进行处理时，只有标样能够生成校正曲线，然后才能对未知样进行定量计算。如果在进样时没有正确设置样品类型，可在此窗口直接进行修改。也可针对具体情况， 修改样品名称、样品重量以及稀释倍数。 5.5.4.3 在“通道”选项卡中选择欲处理的数据，单击（查看）打开。 出现“查看主窗口” 。单击（处理方法向导），出现“处理方法向导”对话框，选择“新建处理方法”，然后单击“确定”。按向导提示完成处理方法的建立并保存。积分并保存全部结果。5.5.5数据的打印5.5.5.1 单击鼠标左键进入“浏览项目”。选择欲打印数据所在的项目，然后单击确定，进入该项目。在“结果”选项卡中选择欲打印的结果，单击（预览出版
13、）。注：如果在非“ 结果” 选项卡（例如通道）中单击预览出版，则无法查看到积分结果。5.5.5.2 出现“打开报告方法”对话框，选择“使用对选中的数据适用的报告方法”，或者在“使用以下的报告方法”下拉菜单中选择适当的报告方法，然后单击“确定” 。此时若选择“峰综合报告”格式，可计算峰面积/保留时间的重现性等统计信息。如果只需要峰面积等信息，则可选择“缺省单个报告”。5.5.5.3 在屏幕上即出现报告预览窗口，如预览后无误，单击（打印），打印报告。 如果想批处理打印，可以在“项目”窗口中，点击“结果”标签，用“键盘Ctrl 鼠标左键”选黑要出报告的样品，单击（打印）在随后出现的“后台处理及生成报
14、告”页面中（见下图），确认“打印”方框中打勾，“处理”和“导出”方框中为空。选中使用指定的报告方法，在其下拉菜单中选择所需的报告方法，点击确定即可。5.6 关机 5.6.1 数据采集完毕后，关闭检测器电源开关。5.6.2 使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和柱塞杆密封垫，确保 2695 分离单元已彻底冲洗干净后，关闭电源开关。5.6.3 处理数据并打印报告后，关闭计算机和打印机电源开关，并做使用登记。6 注意事项6.1 更换溶剂时，若液体流路中有气泡，可用注射器抽吸，彻底排除气泡6.2 流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯
15、化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。6.3 柱温箱一旦发生报警，一定要及时找到原因。若实验室湿度太高，则需采取相应的除湿措实。若柱温箱中发生漏液现象，则需及时拧紧色谱柱并擦干漏液，长时间的漏液极易损坏柱温箱中的传感器。6.4 紫外检测器要“晚开、早关”，在流通池有溶液连续流动几分钟后方可开启。若不需要做样，可设置一个较低的流速（如0.05ml/min）。如果流动池中有气泡，则会提示漂移过大无法通过自检和校正。7 维护保养规程7.1检查HPLC的日常操作条件：7.1.1 检查温度：1030；7.1.2 检查相对湿度：80%7.1.3检查稳压电源是否正常工作；7.1.4 检查线路连接是否正常；7.2 泵的保养：7.2.1 泵的排气:先拧松排气阀，用注射器将气泡抽出，反复进行直到气泡完全排出。7.2.2 应尽量避免泵在很高的压力下长时间操作。7.2.2.1当泵出现压力明显高于正常值的情况，应先拆卸掉在线过滤器再连接好流路，观察泵压读数，若泵压读数依然很高，则在线过滤器没有堵塞。预柱、分析柱同样处理。发现哪个部件有堵塞则拆卸掉超声清洗20min，再连接好流路。7.2.2.2当泵压力不稳定时，需要将单向阀拆卸掉用异丙醇超声清洗20min。7.2.3 溶剂过滤头要经常超声、清洗；每星期一次。7
