Trizol法提取总RNA(细胞和组织)

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Trizol法提取总RNA1、 提取组织RNA时,研钵高温高压灭菌,每50-100mg组织液氮研磨后,将粉末用液氮预冷的药匙转移至预先装有1ml Trizol的EP管中,充分混匀(粉末总体积不能超过Trizol体积的10%)用1ml Trizol试剂裂解; 提取细胞RNA时,每5-10106个细胞用1ml Trizol裂解,反复吹打或剧烈振荡;2、 将上述裂解液,室温15-30静置5min;3、 每1ml Trizol加入0.2ml氯仿,在手中用力振荡15s,室温放置2-3min后,12000r离心15min(2-8);4、 取上层水相置于新EP管中,按照每1ml Trizol加入0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,室温放置10min,12000r离心10min(2-8),弃上清;5、 向沉淀中按每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇(4),涡旋混合,进行洗涤,7500r离心5min(2-8),弃上清;6、 将RNA沉淀在室温下自然干燥(5-10min);7、 用30l RNase-free water溶解RNA沉淀;8、 取出1l,稀释10倍,测定RNA浓度并记录;9、 进行反转录或分装保存于-80

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