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1、本 科 毕 业 论 文院 系 化学与生命科学学院 专 业 应用化学 题 目 液质联用分析多肽 实验条件的探索年 级 2013级专转本 学号2013070499030 学生姓名 彭秋晨 指导老师 陈守发 职称 工程师 论文提交日期 2015. 4. 24 南 京 大 学 金 陵 学 院本科生毕业论文（设计）指导情况记录开题简况论文题目：液质联用分析多肽实验条件的探索1、 选题质量论文选题有新意，有实际应用价值，论文有独到的观点，与专业知识息息相关，难度也较适中，总体来说符合规范要求。2、 开题意见论文符合本科生答辩要求，难度适中，资料填写充实，计划详尽、清晰，对液质联用的研究有一定意义，允许开题
2、。 指导教师签名： 年 月 日中期检查指导教师检查论文的进展情况：查阅了大量的相关资料，包括国内外相关文献，国内外众学者的相关论文、专著等，对所要着手研究的课题作全面地了解与认识。在对所搜集资料认真研究的基础上，拟定论文题目，设计研究方案。能够将所学知识运用到实验中，能够从反应现象中思考可能的原因并作出结论。指导教师签名： 年 月 日南 京 大 学 金 陵 学 院本科生毕业论文（设计）评阅意见指导教师评语： 彭秋晨同学在对文献调研的基础上，充分了解了液质联用的原理，通过对多肽序列的分析，运用LC-MS仪对多肽进行了产品性质认定和分析杂质性质，摸索出液质联用的最佳条件，建立一套完整的液质联用体系
3、。全文结构基本合理科学，逻辑思路清晰，观点表达准确，语言流畅，达到了本科生培养的目标。综合以上分析，该文达到了学士学位论文水平，同意答辩。 指导教师签名： 评阅时间： 年 月 日评阅教师评语：论文选题适当，有一定的独立见解，论证充分，占有资料广泛，语言表达基本顺畅，有足够理论和实例支撑，主要观点突出，逻辑关系清楚，论文格式符合规范要求。 评阅教师签名： 评阅时间： 年 月 日南 京 大 学 金 陵 学 院本科生毕业论文（设计）答辩记录、成绩评定答辩记录：答辩记录人签名：答辩小组评语：答辩小组成员：_成绩_ 组长签名： 答辩时间： 年 月 日南京大学金陵学院本科毕业论文中文摘要首页用纸论文题目：
4、 液质联用分析多肽实验条件的探索 系部： 化学与生命科学学院 专业： 应用化学 2013专转本 级 姓名： 彭秋晨 指导教师（姓名、职称）： 陈守发 工程师 摘要高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术是近几年来发展起来的一项新的分离分析技术。它将应用范围极广的分离方法液相色谱法与灵敏、专属、能提供结构信息的质谱法结合起来，成为一种重要的现代分离分析技术。液质联用为生产和科研提供了许多有价值的数据，解决了许多在此之前难以解决的分析问题。本文主要探索液质联用的条件，并运用LC-MS仪对多肽进行了产品性质认定和分析杂质性质，希望能建立一套完整的液质联用体系。关键词：高效液相色谱-质谱，联用的条
5、件，产品性质认定，杂质分析27AbstractHigh-performance liquid chromatography - mass spectrometry (HPLC-MS) in conjunction with technology in recent years developed a new separation analysis techniques. It a very wide range of applications of separation methods - liquid chromatography with sensitive, proprietary, c
6、an provide information on molecular weight and structure of the combination of mass spectrometry has become an important separation of modern analysis techniques.HPLC-MS provide lots of valuable data for production and scientific research,and solve many previouslydifficult problems.This papermainly
7、exploresthe LC-MSconditions,and the use of LC-ESI-MSinstrumentandanalysis of impuritieson theproperties of the productto determine the nature ofthe polypeptide,hope to establisha complete set ofliquid chromatography-mass spectrometrysystem.Key Words：HPLC-MS, in combination withthecondition,nature of
8、 the product identification, impurity analysis目录摘要IAbstractII第一章 前言III第二章 实验部分62.1实验目的62.2实验原理62.3实验仪器与试剂82.4 实验步骤82.4.1管道连接82.4.2流动性制备82.4.3 一般参数配置82.4.4 实验步骤9第三章 结果与讨论103.1第一个实验103.2第二个实验123.3第三个实验15第四章 结论与展望24参考文献26致谢27第一章 前言蛋白质是生物体中含量最高、功能最重要的一类生物大分子。它存在于所有生物细胞中，约占细胞干质量的50%以上，它在生命科学中所占重要位置可想而知。L
9、inus Pauling1于1937年阐述蛋白质的重要性时曾经说过：“生命的奥秘就在于揭示蛋白分子是如何从无序基质形成的，又如何依据其自身映像复制新的蛋白分子的。”用今天的标准来看，当时对蛋白质的功能和结构还知之甚少。当然，现在人们已经了解蛋白质在生物学中数不胜数的功能，而且还获得了一些重要蛋白质的高分辨结构，人们的知识范围正以更快的速度不断扩展着。质谱法在这方面愈来愈显出威力，也愈来愈引起人们的重视。质谱能够定性、定量分析有机小分子、肽、蛋白质以及核酸等各种分子，是一种强有力的分析技术。质谱技术的特点是快速、准确和灵敏度高。从J.J.Thomson制成第一台质谱仪到现在为止已有90年历史了，
10、早期的质谱仪主要是用来进行同位数测定和无机元素分析，在20世纪40年代之后就开始用于分析有机物，而60年代出现的气相色谱-质谱联用仪使得质谱仪的应用领域大大扩展起来。开始成为有机物分析的重要仪器。伴随着计算机的快速发展，这又使质谱分析法发生了飞跃的变化，使其技术更加成熟，应用更加方便。80年代以后又出现了一些新的质谱技术，如：1) 电喷雾电离质谱（electrospray ionization mass spectrometry，ESI-MS）2) 基质辅助激光解吸电离质谱（matrix assisted laser desorption ionization mass spectrometr
11、y，MALDI-MS）3) 快原子轰击质谱(fast atom bombardment mass spectrometry，FAB-MS)4) 离子喷雾电离质谱（ion spray ionization mass spectrometry，ISI-MS）5) 大气压电离质谱（atmospheric pressure ionization mass spectrometry，API-MS）以及随之而来的较成熟的液相色谱-质谱联用仪、感应耦合等离子体质谱仪、傅里叶变换质谱仪等。这些新产生的电离技术与新的质谱仪器使质谱分析又取得了较大的进展2。在以上的电离技术中，近年来研究的最多的是前面三种，他们在
12、蛋白质和多肽方面的应用上较为广泛。应用质谱研究肽和蛋白质刚有几十年的历史，研究范围从作为蛋白质最基本组成部分的氨基酸，到生物大分子的多肽和蛋白质，从分子质量范围的不断扩展可以衡量质谱的飞速发展。1981年，Barber3等首先提出用FAB质谱测定肽的分子量，他们采用双聚焦质谱仪，以甘油为基质，分析一个十一肽。但是FAB质谱分析只适用于分子量小于6000Da的肽或小蛋白质，如果分子量再大的肽用此技术分析就十分困难。所以FAB质谱只适用于分析化学降解或酶水解的蛋白质以及人工合成的寡肽。到了80年代左右，随着快原子轰击（FAB）、电喷雾（ESI）和基质辅助激光解析（MALDI）等新“软电离”技术的出
13、现，质谱已经能用于分析高极性、难挥发和热不稳定样品，这直接导致生物质谱飞速发展是之成为现代科学前沿的热点之一4。质谱由于具有迅速、灵敏、准确度高的优点，并能进行蛋白质序列分析和翻译后修饰分析，生物质谱已经无可争议地成为蛋白质组学中分析与鉴定肽和蛋白质的最重要的手段。质谱法在一次分析中可提供丰富的结构信息，将分离技术与质谱法相结合是分离科学方法中的一项突破性进展。如用质谱法作为气相色谱（GC）的检测器已成为一项标准化GC 技术被广泛使用。由于GC-MS 不能分离不稳定和不挥发性物质，所以发展了液相色谱（LC）与质谱法的联用技术。LC-MS可以同时检测糖肽的位置并且提供结构信息。在众多的分析测试方法中，质谱学方法被认为是一种同时具备高灵敏度和高特异性并且得到了广泛应用的普适性方法。质谱的发展对基础科学研究、国防、航天以及其他工业、民用等诸多领域均有重要意义5。有关LC-MS在蛋白质分析方面的应用的回顾文章已有很多，本文的目的在于探索液质联用的条件，并运用LC-MS仪对多肽进行了产品性质认定和分析杂质性质，希望能建立一套完整的液质联用体系，我将用实验室的一些数据来展示LC-MS对多肽的分析检测。第二章 实验部分 2.1实验目的1) 学习并掌握LCMS
