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1、动物细胞培养常用试剂介绍 Hank s液D Hank s液PBSEDTA胰蛋白酶青霉素 链霉素 Hank s液与D Hank s液 Hank s液是常见的平衡盐溶液 BSS 之一 D Hank s液则是无钙镁离子的Hank s液 也有资料认为除了不含钙镁离子之外也不含葡萄糖 BSS与细胞生长状态下的pH值 渗透压及无菌状态一致 且配方简单 是组织培养基本用液 常用于配制培养基及其他用液 或洗细胞等 细胞在这种BSS中可生存几个小时 Hank s液配方 Hank s液 原液 原液甲 NaCl160gKCl8gMgSO4 7H2O2gMgCl2 6H2O2g上述试剂加入800ml双蒸水 溶解 Ca
2、Cl22 8g溶于100ml双蒸水上述二液混合 加双蒸水至1000ml 再加2ml氯仿防腐 4 保存 原液乙 Na2HPO4 12H2O3 04gKH2PO41 2g葡萄糖20g加入800ml双蒸水 溶解 0 4 酚红溶液100ml上述二液混合 加双蒸水至1000ml 再加2ml氯仿防腐 4 保存 使用时甲 乙原液按下列比例配成Hanks液使用液 原液甲1份 原液乙1份 双蒸水18份滤过 20min灭菌 放4 冰箱保存 使用前用NaHCO3调整pH值 D Hank s液配方 D Hanks液NaCl4 5gKCl0 2gNaHCO30 175gNa2HPO4 12H2O0 076gKH2PO4
3、0 03g葡萄糖0 5g0 4 酚红2 5ml将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中 最后加双蒸水定容至500ml 以5 6 NaHCO3调整pH值至7 4 4 冰箱保存备用 酚红在低pH值时呈现黄色 在pH6 6至8 0间会呈现橙色 在高pH值时呈现红色 酚红只是起指示酸碱度的作用 有酚红较方便但没有也无妨 有人主张最好不用酚红 可能对细胞生长不利 有时也会影响一些检测结果 此外酚红有雌激素样作用 所以如果做相关的实验最好不加 对于Hank s与D hank s液的配制 不同的文献有不同的配方我们可以看到 两者最主要的区别就是D hank s液中没有钙镁离子 Hank s液与D Hank s液用
4、途上的比较 Hank s液是组织培养基本用液 常用于配制培养基及其他用液 或洗涤组织 细胞等 细胞在Hank s液中可以在一段时间内维持一定的活力 另外Hank s液还可以用于终止EDTA的作用 配制胰酶液或者是胰酶 EDTA的基础液都是D hanks液 而不能使用Hank s液 这是由于钙离子和镁离子会影响胰蛋白酶的活性 也会阻碍EDTA的作用 PBS 磷酸盐缓冲液磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂 由於它们是二级解离 有二个pKa值 所以用它们配制的缓冲液 pH范围最宽 NaH2PO4 pKa1 2 12 pKa2 7 21Na2HPO4 pKa1 7 21 pKa2 12 32
5、配酸性缓冲液 用NaH2PO4 pH 1 4 配中性缓冲液 用混合的两种磷酸盐 pH 6 8 配碱性缓冲液 用Na2HPO4 pH 10 12 因为低温时钠盐难溶 钾盐易溶 一般情况下用钾盐比钠盐好 使用SDS PAGE时除外 PBS与Hank s液的用途区别 PBS 磷酸缓冲盐溶液 具有pH缓冲作用的等渗盐溶液 多用于非活体 Hank s 平衡盐溶液 无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动物 植物 细胞的水平 可作为动 植 物细胞短期培养 保存 多用于活体 Hank s液中盐成分较PBS复杂 且有葡萄糖 可为细胞提供简单的营养 而PSB中只有磷酸根 钠 钾 氯离子 只是最简单的盐平衡缓冲液 不能为细
6、胞提供暂时的营养 其他缓冲系统 碳酸盐缓冲系统一般细胞培养液的pH在7 0 7 4之间 由于碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统 大多数培养液用它来保持稳定的pH 为了维持稳定的pH 培养箱中的二氧化碳需要维持在2 10 之间 以保持培养液中溶解的二氧化碳的浓度 HEPES缓冲系统HEPES 即4 羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES在pH7 2 7 4之间有很强的缓冲能力 当透气的培养器皿被拿到二氧化碳培养箱外面的时候 由于空气中二氧化碳浓度很低 培养液中碳酸盐缓冲系统就会失去效果 这时候HEPES缓冲系统就能继续保持pH的稳定 EDTA与胰蛋白酶 EDTA 常用的阳离子螯合剂 组织细胞间存在钙黏蛋白 一类Ca2 依赖的细胞黏着糖蛋白 而EDTA可以通过螯合金属离子 破坏Ca2 或Mg2 依赖性的细胞黏着 胰蛋白酶水解细胞间的蛋白质 方便形成细胞悬液 消化细胞时可以只使用胰蛋白酶 也可以胰蛋白酶与EDTA同时使用 胰蛋白酶的消化作用可以通过加入血清终止 EDTA的作用可以通过加入Hank s液终止 青霉素与链霉素 一般合称双抗 青霉素主要对革兰氏阳性菌有效 链霉素对许多革兰阴性杆菌作用良好
