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1、自身免疫性疾病相关检测 自体免疫性疾病 Autoimmunedisease 亦作自体免疫问题 是一种人体内自己的免疫系统攻击自己身体正常细胞 组织 器官的疾病 就是正常的免疫能力下降 而异常的免疫能力却突显的一种问题 自身免疫病的特点 多数病因不明 常呈自发性或特发性 多数病程较长 多呈反复发作和慢性迁延过程 某些具有遗传倾向 多数疾病女性多于男性 多数患者血清中可以检测到抗核抗体或其它自身抗体 自身免疫性疾病 分类 系统性 组织器官特异性 目前主要的疾病包括 主要疾病 涉及的科室 风湿免疫科 皮肤科 呼吸内科 血液科 肾内科 消化科 骨科 保健科 神经内科等 传统定义 针对细胞核成分的自身抗
2、体的总称 广义定义 针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称 对ANA的理解不再局限于核成分 而是指核酸和核蛋白抗体的总称ANA的靶抗原分布 细胞核整个细胞 包括细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞分裂周期蛋白等 ENA 抗可提取核抗原 包括RNP Sm Sm SSA SSB Scl 70和Jo 1等六种靶抗原 抗核抗体的定义 抗核抗体主要检测方法 间接免疫荧光法 最经典 金标准 酶联免疫吸附试验 ELISA 可定量免疫印迹法 WB 特异性非常好线性酶免 兼顾特异性 敏感度放射免疫法 灵敏度好 抗核抗体的主要检测方法 美国风湿学会 ACR 立场声明 HEp 2细胞包含大约100至150种自身抗原其它初
3、筛方法仅具有少量自身抗原 8 10 大约35 SLE患者和IFT ANA阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果 建议 IFT ANA仍然为ANA检测的金标准 ANA检测间接免疫荧光法 IFT 抗原谱完整 细胞核 细胞浆 检测ANA的金标准 具有很高的敏感性和特异性 基质组合 HEp 2细胞 灵长类肝 根据产生的荧光模型 靶抗原的分布分类如下 ANA 核均质型 DNA 组蛋白和核小体等 核膜型 板层素 gp210等 核颗粒型 核仁型 Scl 70 RNA多聚酶 PM Scl和原纤维蛋白等 核浆点型 着丝点 核点等 胞浆颗粒型 线粒体 Jo 1 核糖体等 胞浆纤维型 波形蛋白 原肌球蛋白和肌动蛋白等
4、分裂期细胞阳性 纺垂体 中间体 中心粒等 核糖核蛋白 Sm nRNP SS A SS B 细胞核 细胞浆 Ku 细胞周期蛋白 I型 PCNA 和II型 抗核抗体荧光结果 荧光结果滴度的解读 SLE诊断标准 ACR2009年修订 ANA检测的临床意义 系统性红斑狼疮活动期非活动期药物诱导的红斑狼疮混合性结缔组织病 MCTD Sharp综合征 类风湿性关节炎进行性系统性硬化症多发性肌炎及皮肌炎干燥综合征慢性活动性肝炎溃疡性结肠炎其它风湿病正常人 95 10080 10010010020 4020 5085 9530 5070 8030 40265 10 抗核抗体谱项目介绍 欧蒙印迹法 实验原理 实
5、验原理将抗原包被在固相膜片上 然后将膜片固定在合成膜条上 若样本阳性 血清 浆中的特异性抗体与固相上的抗原结合 结合的抗体与碱性磷酸酶标记的抗人抗体结果 加入色原 底物液产生颜色反应 依据所包被的抗原 可在相同条件下同时检测多种抗体 ANA 3G检测项目 ANA 3G各项自身抗体的临床意义 SLE SjS Scl MCTD PBC PM DM 话题 ANA全抗原检测与特异性检测 全抗原检测与特异性检测 HEp 2cells primateliver ANAprofile3G 协和医院的临床研究 协和医院的临床研究 SSAand orRo52 n 11 Histone n 1 Scl 70 n
6、1 Jo 1 n 1 M2 n 1 协和医院的临床研究 最新研究 IFT为阴性时 LIA的符合率为74 8 LIA为阳性时 IFT的符合率为81 1 最新研究 IFT为阴性 而LIA为阳性的206例患者中 最新研究 原文中的讨论 最新研究 最终的结论 ACR的申明 荧光阳性而靶抗原阴性 如果所有的已知靶抗原都是阴性 那做荧光检测的意义是什么 案例分析 47岁的中年妇女 临床症状提示可能SLE 但ANA靶抗原检测全部阴性 由于受到血清学检测结果的干扰 最终得出的诊断为皮肤结节性多动脉炎专家提出质疑 要求用IFT方法重新检测ANA 发现为强阳性 根据ANA IFT的阳性结果 最终修正结果为SLE
7、由于正确的诊断 患者得到了良好的治疗结论 不明靶抗原的ANA荧光阳性 是具有诊断意义的 案例分析 SLE诊断标准 ACR2009年修订 慢性炎症性结缔组织病 CICTD 慢性炎症性结缔组织病 CICTD SystemischerLupusErythematodes SLE 干燥综合征 SS 系统性硬化症 SSc RheumatoideArthritis RA 多肌炎 皮肌炎 PM DM 类风湿性关节炎 RA 系统性红斑狼疮 SLE ANCA相关性血管炎 MPOandPR3 慢性炎症性结缔组织病 CICTD 慢性炎症性结缔组织病 CICTD SystemischerLupusErythemato
8、des SLE 干燥综合征 SS 系统性硬化症 SSc RheumatoideArthritis RA 多肌炎 皮肌炎 PM DM 类风湿性关节炎 RA 系统性红斑狼疮 SLE ANCA相关性血管炎 MPOandPR3 侵犯皮肤和多脏器的一种全身性自身免疫病 某些不明病因诱导机体产生多种自身抗体 如抗核抗体等 导致 自身抗体与相应自身抗原结合为循环免疫复合物 通过III型超敏反应而损伤自身组织和器官 抗血细胞自身抗体与血细胞表面抗原结合 通过II型超敏反应而损伤血细胞 系统性红斑狼疮 SLE 临床发病特点发病率 40 100 000 北欧 200 100 000 非洲 250 000 美国 患
9、者寿命 4年 50 1950 15 80 当前 20岁诊断 35岁死亡几率1 6 SLE 各器官的表现 关于SLE的诊断经历了很长时间 其标准也不断修正和完善 基本上存在4个标准 SLE标准 颊部红斑 固定红斑 扁平或高起 在两颧突出部位 不累及鼻唇沟 盘状红斑 片状高起的红斑 粘附有角质脱屑和毛囊栓 老的病变可发生萎缩性瘢痕 光过敏 对日光有不寻常的反应引起皮疹 从病史得知或医生观察到 口腔溃疡 经医生观察到的口腔或鼻咽部溃疡 一般无痛性 关节炎 非糜烂性关节炎 累及2个或更多的外周关节 特征为压痛 肿胀 积液 浆膜炎 a 胸膜炎 明确的胸膜炎性疼痛史 经医生听到摩擦音或有胸腔积液 b 心包
10、炎 心电图 ECG 记录 或心包摩擦音 或心包积液的证据 1982年标准 肾脏病变 a 持续性蛋白尿 尿蛋白的定量每日超过0 5g或定性实验 b 细胞管型 可为红细胞 血红蛋白 颗粒管型等或混合性 神经病变 a 癫痫 没有诱发药物或已知的代谢紊乱 如尿毒症 酮症酸中毒或电解质紊乱 b 精神病 没有药物影响或已知的代谢紊乱 如尿毒症 酮症酸中毒或电解质紊乱 血液学改变 a 溶血性贫血 伴有网织红细胞增多 b 白细胞减少 2次或多次低于4 0 109 L c 淋巴细胞减少 2次或多次低于1 5 109 L d 血小板减少 在没有药物影响下低于100 109 L 1982年标准 免疫学异常 a 阳性
11、LE细胞反应 b 抗DNA抗体和抗天然DNA抗体滴度异常 c 抗Sm抗体阳性 存在抗Sm核抗原的抗体 d 假阳性梅毒血清试验 至少持续6个月 并经梅毒螺旋体固定试验或荧光螺旋抗体吸收试验证实 抗核抗体 在任何恰当时间和在没有用药诱发 药物性狼疮 综合征的情况下 免疫荧光或其它相应的试验检测出抗核抗体滴度的改变 用于临床研究鉴别病人 在任何观察期间 如上述11条标准中有4条以上同时出现 可以认为病人有系统性红斑狼疮 1982年标准 临床标准急性或亚急性皮肤狼疮表现 慢性皮肤狼疮表现 口腔或鼻咽部溃疡 脱发炎性滑膜炎 有 2个外周关节肿痛或压痛伴晨僵 浆膜炎 肾脏病变 尿蛋白 0 5g 24h 或
12、有RBC管型 神经病变 癫痫发作或精神失常 多发性单神经炎 脊髓炎 外周或颅神经病变 脑炎溶血性贫血WBC 4X109 L至少一次 或淋巴细胞 1X109 L至少一次 血小板 100X109 L至少一次 2009年标准 免疫学诊断标准ANA滴度高于正常值 抗dsDNA高于参考值 抗Sm抗体 抗磷脂抗体阳性 即狼疮抗凝物阳性 梅毒血清学试验假阳性 抗心磷脂抗体水平升高 补体降低 包括C3 C4和CH50 直接抗人球蛋白 Comb s 实验阳性 非溶血性贫血状态 2009年标准 确诊条件 肾活检证实为LN 免疫荧光技术 肾小球基底膜广泛的Ig C3 C4 C1q沉积 满堂亮 满足以上4条标准 包括
13、至少一条临床标准和至少一条免疫学标准 与以前标准的差别 明确分为两类标准 临床标准和免疫学标准增加了自身抗体的种类和比重 2009年标准 SLE相关自身抗体 高特异性抗体 核均质型HEp 2 Cells Primateliver EUROIMMUN 检测方法 IIFT Farr 法 RIA ELISAorBlot 抗dsDNA自身抗体 高度特异性抗体70 患者阳性滴度与疾病活动性相关抗体滴度上升但临床症状不明显的患者 抗体检测后5年内80 患者进入活动期 抗dsDNA抗体与SLE 用两种或两种以上的方法进行检测 靶抗原 dsDNA 组蛋白 复合物的构象决定簇方法 IIFA ELISA Blot
14、临床意义 SLE 阳性率50 95 特异性 接近100 抗核小体抗体与SLE ANuA与疾病的活动性相关性强 SLEDAIscore Suetal ClinImmunol122 115 120 2007 抗核小体抗体与SLE 抗核小体抗体与SLE 抗核小体抗体与狼疮性肾炎 LNTP lupusnephritisrequiringrenaltransplantationLN biopsyprovenlupusnephritisCON SLEpatientswithoutnephritis 狼疮肾炎是SLE的一种潜在的严重并发症 高达50 1 2 需要进行肾移植的患者有狼疮肾炎 伴有狼疮肾炎的严重
15、SLE的生物标记物 Stintonetal Lupus15 394 400 2007 U1 nRNPandSm Anti Sm Anti U1RNP MCTD 95 100 SLE 15 40 SLE 5 30 Anti SmandSLE ElizabethBenito Garciaetal ArthritisCare Research51 6 2004 1030 1044 Anti RNPandSLE ElizabethBenito Garciaetal ArthritisCare Research51 6 2004 1030 1044 核糖体60S亚单位的3个蛋白 P0 P1 P2 在羧基
16、末端有相同的免疫反应表位 核糖体P抗原的五聚体复合物 抗核糖体P蛋白抗体 systemicsclerosis Sj gren ssyndrome dermato polymyositis 抗核糖体P蛋白抗体与SLE 对SLE接近100 特异性 9 4 阳性率 抗核糖体P蛋白抗体与SLE 对SLE接近100 特异性 5 4 阳性率 细胞周期蛋白I型 PCNA 靶抗原 细胞周期依赖性表达 S 期 三聚体 36kDa 是DNA多聚酶的辅因子并参与DNA修复调控检测 IIFT Blot临床意义 SLE高特异性 阳性率3 7 特异性接近100 与肾脏和CNS及血小板减少相关 全抗体检测实验 间接免疫荧光法 IIFT 抗核抗体 单抗体检测实验 ELISA或Blot实验 dsDNA Sm U1 RNP 核小体 核糖体P蛋白 PCNA C1q等 SLE相关抗体检测 慢性炎症性结缔组织病 CICTD 慢性炎症性结缔组织病 CICTD SystemischerLupusErythematodes SLE 干燥综合征 SS 系统性硬化症 SSc RheumatoideArthritis RA 多肌炎 皮肌炎
