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1、临床基因扩增检验实验室技术验收 临床基因扩增检验实验室主要应用把PCR（聚合酶链反应）技术应用于疾病的诊断与治疗监测。PCR技术发明是生物医学领域的一项革命性创举，具有深远历史意义，但在上世纪九十年代中国，在我国由于部分医部机构受利益的驱动，在缺乏技术、设备以及规范化管理的情况下，PCR技术临床应用泛滥，出现大量假阳性和假阴性结果，甚至出现虚假检测报告，造成检验结果和临床意义应用十分混乱，严重扰乱正常医疗秩序，特别在性病基因检测方面，甚至还带来一系列道德伦理、家庭纠纷以及社会和法律问题。PCR技术临床应用所出现的一系列问题引起卫生部管理层高度重视，卫生部医政司于1988年下发了卫医发19989
2、号文件宣布PCR技术暂停应用于临床诊断。经过近四年反复论证，卫生部2002年1月14日发布“临床基因扩增检验实验室管理暂行办法”，同年2月20日卫生部临床检验中心发布“临床基因扩增实验室工作规范”。两个文件宣布了PCR技术临床应用解冻，明确规定临床基因扩增检验实验室开展PCR技术必需具备的基本条件：规范的PCR实验室编写适合本实验室的质量手册经PCR专业知识培训的技术人员（PCR上岗证）使用有生产批文的PCR试剂。具备条件的二级以上医院可向卫生部或省临床检验中心申请技术验收。 本人作为通过卫生部临床检验中心验收的临床基因扩增检验实验室一名实验室工作人员，同时也作为专家多次参与卫生部临床检验中心
3、组织的实验室验收，就临床基因扩增实验室技术验收的前期准备工作和现场技术验收整个过程作一简单介绍，并谈谈本人体会。一、为什么要进行临床基因扩增检验实验室技术增收 临床基因扩增实验室采用PCR技术用于临床基因诊断，由于PCR技术对所检测的核酸模板进行大量扩增，容易出现实验室污染导致临床检测标本假阳性结果；另外由于PCR技术要求高、影响因素多（特别是RNA标本），实验过程处理不当易导致核酸模板无扩增现象，导致临床标本假阴性结果。因此临床基因扩增检验实验室技术验收和规范化管理是PCR技术本身需要，也是在临床上顺利应用该技术前提。二、PCR实验室验收准备工作（一）硬件准备实验室基本建设1.根据文件要求，
4、临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区；标本制备区；扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区，如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。2.各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。3.进入各工作区域必须严格按照单一流向进行，即试剂贮存和准备区标本制备区扩增反应混合物配制和扩增区扩增产物分析区。4.不同的工作区域使用不同的工作服（不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。5.工作区域仪器设备配置标准（1）试剂贮存和准备区 28和-15冰箱：混匀器；微量加样器（覆盖11000l）；移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套
5、、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。（2）标本制备区 28冰箱，-20或-80冰箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器（覆盖11000l）；可移动紫外灯（近工作台面）；超净工作台，消耗品；一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。（3）扩增反应混合物配制和扩增区 核酸扩增仪；微量加样器（覆盖11000l）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。（4）扩增
6、产物分析区 视检测方法不同而定。基本仪器设备如下：微量加样器（覆盖1200l）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。（二）软件建设质量手册编写与实施、人才资源（上岗证培训与相关知识学习）1.临床基因扩增检验实验室的质量手册编写 质量手册是阐明临床基因扩增检验实验室的质量方针，并描述过其质量体系的文件。质量手册规定了质量体系的基本结构，是实施和保持质量体系应长期遵循的文件。临床基因扩增检验实验室质量手册编写应依照卫生部下发两个文件，并结合本实验室实际情况编写适合本实验室的切实可行的质量手册。质
7、量手册的提纲应包括三部分：质量方针和宗旨；工作制度；标准操作文件（SOP）（1）质量方针和宗旨 制定临床基因扩增检验实验室的质量管理目标和质量保证体系的结构体系和总方针。（2）工作制度 一般应包括以下文件：实验室的设置、布局及组织结构；实验室内务管理制度；实验室的人员配置及管理制度；生物的防护与安全制度；实验室废弃物处理制度；实验室清洁消毒制度；仪器设备的管理制度；仪器、试剂、耗材购置程序及管理制度；临床标本的管理制度；实验室记录的管理制度；质量控制工作管理制度；结果报告管理制度；抱怨的内部处理制度；负责人及质检员职责；岗位设置和责任制等（3）标准操作程序（SOP） 一般包括：消毒液配制标准操
8、作程序：消毒标准操作程序；超净工作台使用标准操作程序；超净工作台维护和保养标准操作文件；PCR仪使用标准操作程序；PCR仪维护和保养标准操作程序；高速低温离心机使用标准操作程序；移液器使用标准操作程序；冰箱维护和保养标准操作程序；电热恒温水浴箱操作程序；电子天平使用和校正操作程序；可移动紫外消毒车使用操作程序；加样器校准标准操作程序；离心机维护保养操作程序；温度计校准程序；试剂的质检操作程序；标本唯一标识编号编制规则；临床标本的采集及处理操作程序；临床标本的保存程序；乙肝病毒核酸扩增荧光检测标准操作程序；丙肝病毒核酸扩增荧光检测标准操作程序；结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测标准操作程序；沙眼衣原体
9、核酸扩增荧光检测标准操作程序等（4）引用图表：PCR扩增可接受标本记录表；PCR扩增拒收标本记录表；室内质控结果记录表；室间质控记录表；消耗性材料验收记录表；试剂验收记录表；故障处理表；台阶式高速离心机使用记录表；台式高速冷冻离心机使用记录表；扩增仪维护保养记录表；人员培训计划及培训记录表；实验室工作人员一览表；主要设备一览表；实验室清洁消毒记录表；工作区温度、湿度记录表；抱怨记录表；标本超低温保存记录表；应急处理记录表；垃圾处理记录表；冰箱温度记录表；水浴箱温度记录表；移动紫外消毒车记录表；设备校正记录表；检测结果报告流程；报告单样张；临床送检标本流程图；实验室组织结构图。三、临床基因扩增检
10、验实验室技术验收申请（1）填写临床扩增检验实验室技术验收申请表（a）基因扩增检验实验室基本情况 包括检验科基本情况特别是基因扩增检验实验室基本运行情况，必要性与可行性，着重分析开展项目运行情况、人员配置现状、内部质量管理体系执行情况与效果分析。（b）应提供资料医疗机构执业许可证； 拟设置基因扩增检验实验室医院的医疗卫生资源状况、对临床基因扩增检验的需求情况以及实验室运行的预测分析； 拟设基因扩增检验实验室的设置平面图； 实验室主要负责人简历表； 实验室工作人员一览表（附实验室工作人员简历）； 主要仪器设备表； 拟开展的临床基因诊断项目； 临床基因诊断质量手册； 检验报告单2份。（c）希望验收时
11、间 根据本实验室建设进展情况和试运行进展，提出大致的现场技术验收时间。（d）声明 志愿申请，承担两义务：遵守临床基因扩增检验实验室管理暂行办法和临床基因诊断实验室工作规范及有关规定；不论能否获准通过验收，预付验收阶段的全部费用。（2）卫生部或省临床检验中心预审 对申报文件和现场进行预验收，初步确定是否进行现场验收和验收时间。四、现场技术验收卫生部临床检验中心临床基因扩增检验实验室技术任务书现场技术专家组成员组成技术验收工作日程表验收组预备会首次会议现场验收实验室设置及仪器设备配备情况实验室标准操作程序文件有关记录现场考核现场试验验收组全体会议拟定验收结论和验收报告末次会议验收组宣布验收结论实验
12、室负责人讲话.临床基因扩增检验实验室验收体会（）对验收文件的学习不够、理解不深，导致编制程序性文件偏离，应对照验收要求逐条落实，切实可行。（）目的性认识不足： 受老观念的影响，总以为实验室技术验收准备工作是为专家而准备的，没意识到这是本实验室检验质量的内在需要，以为只要通过专家现场验收，拿到合格证书就万事大吉了。（）质量控制意识不强 我们编写的质量手册的目的是规范实验操作整个过程，做到实验过程有章可循，实验记录有据可查，保证实验结果的可靠性和准确性。由于基因扩增技术特殊性，即使严格按质量手册进行操作，也难免出现错误结果，因此还应该强化质量控制意识。实验过程中严格设置质控标本，包括试剂空白对照、
13、阴性标本对照、临界值阳性标本对照等，分别监测试剂配制与加样过程中是否存在污染？标本核酸模板提取过程中是否存在污染？标本检测过程中是否存在假阴性结果和结果是否准确？等。但有些医院由于考虑到各种实际问题而没有很好落实，应引起高度重视。（4）程序文件实施难问题 在许多医院，由于基因扩增检验实验室是目前大多检验科唯一通过实验室技术验收的实验室，可能受周边其他实验室不规范行为的干扰和存在人员配备方面问题，可能出现文件落实方面问题，特别是原始标本的接收和记录方面。（5）工作量少影响质量保证体系实施 严格按临床基因扩增检验实验室技术要求通过验收的实验室，存在一定运行成本，需要有一定临床标本量的支持；如果某一医院医疗资源不足，标本来源不足以支持运行成本时，就会想方设法去减少运行成本（包括试剂成本和劳务成本），导致检验质量难以得到保证。因此建议欲建立临床基因扩增检验实验室的单位，应充分考虑自己医疗资源情况，确定是自己建立临床基因扩增检验实验室合算？还是外送标本合算？。同时卫生部和省临床检验中心在初审应充分考虑这方面情况，以及现场验收专家应严加把关。
