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1、 免疫学检验 第二十五章自身免疫病及免疫检验 目录 1 自身耐受 self tolerance 正常情况下 免疫系统对宿主自身的组织和细胞不产生免疫应答 2 自身免疫 autoimmunity 当某种原因使自身耐受性破坏时 免疫系统就会对自身组织成分 细胞成分及其产物发生免疫应答 第一节概述 一 基本知识 3 自身免疫病 autoimmunedisease AID 自身免疫应答过强或持续时间过久 表现为质和量的异常 所产生的自身抗体和 或 自身致敏淋巴细胞对表达自身靶抗原的细胞和组织发动攻击 导致损伤或功能障碍 并出现相应临床症状 二 自身免疫病的分类 1 按病程分为急性和慢性两种2 按病因清
2、楚与否分为原发性与继发性两种3 按受累的解剖系统分为结缔组织病 神经肌肉疾病 消化系统病和内分泌疾病等4 按自身抗原的分布范围分为器官特异性和非器官特异性两类 按发病部位的解剖系统分类 器官特异性自身免疫病 器官非特异性自身免疫病 患者的病变常局限于某一特定的器官 由对器官的特异性抗原的免疫应答引起 全身性或系统性自身免疫性疾病 患者的病变可见于多种器官及结缔组织 结缔组织病或胶原病 按自身抗原的分布范围分类 三 自身免疫病的共同特点 1 血清中有自身抗体或自身反应性致敏T淋巴细胞 自身抗体和 或 自身反应性T细胞作用于靶抗原所在的组织细胞 导致组织损伤和功能障碍 2 可复制出与AID相似的动
3、物模型 并可通过血清或致敏的淋巴细胞使疾病被动转移 3 有一定的遗传倾向 病情转归与自身免疫反应的强度密切相关 4 部分自身免疫病好发于女性 且发病率随年龄增长而上升 5 免疫抑制剂治疗有效但不能根治 一 自身抗原形成 第二节自身免疫病的发病机制 1 隐蔽抗原的释放 2 自身抗原改变 交感性眼炎 3 分子模拟 4 表位扩展 2 B细胞的多克隆激活 二 免疫细胞和免疫调节功能的异常 3 调节性T细胞的功能异常 1 T B细胞的异常活化 4 MHC II类分子异常表达 三 遗传因素 HLA基因与自身免疫病相关性举例 四 生理因素 五 环境因素 1 自身免疫病的发病率随年龄增长呈上升趋势 2 自身免
4、疫病的发病也具有明显的性别差异 女性发病率较高 自身免疫病的发生与日晒 潮湿 寒冷等环境因素可能有关 1 自身抗体介导细胞破坏 六 自身免疫病的病理损伤机制 病理机制 II型超敏反应 常见疾病 新生儿溶贫 重症肌无力 Graves病 自身免疫性溶血性贫血 重症肌无力 Graves病 3 自身反应性T细胞引发炎症性损伤 2 循环免疫复合物介导组织损伤 病理机制 III型超敏反应 病理机制 IV型超敏反应 抗核抗体 antinuclearantibody ANA 是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称 在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质 激发机体产生许多抗不同核成分的抗体 第三节自身免疫
5、病检验 一 自身抗体的检测 一 抗核抗体检测 ANA主要是IgG 也有IgM IgA IgD和IgE ANA无器官特异性和种属特异性 ANA主要存在于血清中 将检出ANA作为AID存在的依据 抗DNA抗体 抗dsDNA 抗nDNA 抗ssDNA 抗dDNA等抗组蛋白抗体 AHA 抗H1 抗H2A 抗H2B 抗H3 抗H4抗体等抗非组蛋白抗体 抗nRNP 抗U1RNP 抗Scl 70 抗SSA 抗Sm 抗SSB 抗Jo 1 抗Rib抗体 AnuA 抗DNP 抗DM53抗体抗RANA抗体 抗着丝点 抗Ku抗体等抗核仁抗体 抗PM Scl抗体 抗Th To抗体 抗U3 RNP 抗4 6 S RNA抗
6、体等 1 ANA的类型和临床意义 ANA谱 抗天然DNA nativeDNA nDNA 抗体 又称抗双链DNA doublestrandedDNA dsDNA 抗体 抗变性DNA denaturedDNA dDNA 抗体 又称抗单链DNA singlestrandedDNA ssDNA 抗体 对SLE有高特异性 SLE诊断标准之一 缓解期降低 70 90 SLE活动期增高 药物疗效 抗dsDNA抗体 抗DNA抗体 抗组蛋白抗体 anti histonicantibody AHA 由H1 H2A H2B H3和H4五个亚单位 各自都有特异性抗体 AHA 检出百分率 抗dsDNA 50 70 90
7、 100 药物诱导性狼疮只能检出此 SLE AHA AHA 抗组蛋白抗体 可提取性核抗原 extractablenuclearantigen ENA 是盐水可提取性核抗原的总称 是非组蛋白的核蛋白 属酸性核蛋白抗原 由许多小分子量的RNA和多肽组成 抗ENA抗体 对类风湿有特异诊断价值的ENA 抗nRNP nuclearRNP nRNP 抗体 抗Sm抗体 抗SSA抗体 抗SSB抗体 抗Scl 70抗体 抗Jo 1抗体 抗核糖体抗体 核蛋白 DNP 由DNA和蛋白质组成 DNP抗原有不溶性及可溶性两种 分别产生相应的抗体 检出百分率 抗DNP 20 40 60 80 SLE非活动期 SLE活动期
8、 抗不溶性DNP抗体 抗DNP 抗DNP 100 RA滑膜液中 抗DNP 抗可溶性DNP抗体 1 抗DNP抗体 抗核小体抗体 anti nucleosomeantibody AnuA 核小体是细胞核染色质的基本组成单位 细胞凋亡致核小体大量蓄积 并诱导B细胞产生AnuAAnuA是SLE特异的标志性抗体 抗dsDNA抗体 抗核小体抗体 抗dsDNA和抗Sm阴性的SLE阳性率为60 80 特异性 97 2 抗核小体抗体 2 ANA的检测方法 稀释患者血清可做定量检测 1 80稀释仍呈阳性对诊断SLE有较大参考价值 1 间接荧光免疫法 均质型 抗核抗体核型 着丝点型 核仁型 斑点型 用间接ELISA
9、检测抗dsDNA抗体 抗组蛋白抗体和抗核小体抗体 2 ELISA法 SDS PAGE 加待检血清 形成分子大小不同区带 分离 电转移 PVDF膜或NC膜 抗ENA与相应抗原特异结合 抗人IgG HRP ENA 抗ENA 抗人IgG HRP 3 免疫印迹法 显色并判读结果 类风湿因子 rheumatoidfactor RF 抗变性IgG的自身抗体 可为19S的IgM 也可为7S的IgG和IgA 可与人变性IgG结合 但不与正常IgG发生凝集 RF可在RA患者检出 约70 90 的血清 约60 的滑膜液可检出IgG类的RF 二 类风湿因子测定 IgG类抗体与相应抗原结合后发生变性 炎症过程亦可发生
10、IgG变性 构成自身抗原 刺激机体产生各种抗IgG抗体 滑膜液中的IgG类RF与变性IgG结合可形成中等大小的免疫复合物 相比血清中的IgM类RF更易致病 RF检测方法 最常采用的检测方法 以吸附在聚苯乙烯胶乳颗粒上的IgG作诊断试剂 与待检血清中的RF结合后 出现胶乳凝集颗粒 此法的灵敏度和特异性不高 且只能检出血清中的IgM类的RF 1 间接胶乳凝集试验 稀释待检血清至一定浓度后 加入定量的变性IgG诊断试剂 即用透射比浊或速率散射比浊仪 检测血清中的RF 此法快速 敏感性高 精密度高 稳定性好 可定量分析 但仍只能检测IgM类RF 2 免疫比浊法 IgM IgG和IgA类RF可用ELIS
11、A检测 临床上多采用双抗原夹心法或间接ELISA进行测定 3 ELISA法 三 其他自身抗体测定 二 细胞检查 一 淋巴细胞检测 1 特异性致敏淋巴细胞 2 淋巴细胞数量和比例 如淋巴细胞转化试验或吞噬细胞移动抑制试验 检测淋巴细胞的总数 T B细胞分类与计数 CD4 CD8亚群比例等进行 二 狼疮 lupuserythmatosus LE 细胞试验 LE细胞为胞浆内含有大块状聚合DNA的中性粒细胞 有75 80 的SLE病人LE呈阳性 RA 结节性动脉炎 多发性硬化症 硬皮病 部分肝炎 皮肌炎和变态反应病等偶尔亦可呈阳性反应 三 免疫复合物和补体检测 四 细胞因子检测 1 CK在自身免疫病的
12、免疫病理损伤中有重要作用 2 检测CK 对研究疾病的发生机制 了解病情 指导治疗均有意义 对诊断部分自身免疫病和判断疾病的活动情况有一定的意义 1 筛选试验与确诊性试验的合理组合 2 结合临床症状选择性检测相关的自身抗体 3 切忌盲目的全面检测自身抗体 4 通常以抗核抗体作为筛选试验 ANA在许多AID中可呈阳性 5 ANA阳性时 再进行针对特异性靶抗原成分的自身抗体的检测 达到明确诊断的目的 第四节自身抗体的检测实验选择的原则 一 自身抗体检测的一般原则 二 实验室方法的选择及结果的确认 IIF法 筛选试验 ANA 抗dsDNA IB法ELISA法IFA法 特异性实验 抗原基质片 如Hep 2 小鼠肝印片 切片 加入自身抗体后与抗原相结合 再与荧光标记的抗抗体结合 根据细胞的荧光着色进行定性 定位分析 以特异性纯化抗原包被载体 检测特异性自身抗体 但特异性抗原不易纯化或不明确 用ELISA和IBT等检测自身抗体存在一定误差 小结 自身免疫病是由于某种原因使自身免疫应答过强或持续时间过久 表现为质和量的异常 所产生的自身抗体和 或 自身致敏淋巴细胞对表达自身靶抗原的细胞和组织发动攻击 导致损伤或功能障碍 并出现相应临床症状
