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1、本科生毕业设计（论文）论文题目：龙胆提取物高效液相指纹图谱分析方法研究姓 名： 部（院、系）： 药学院 专 业： 药学本科 年 级： 指 导 教 师： 年 5月 20日本科生毕业设计（论文）任务书（由指导教师填写）学生 姓名学号指导教师完成时间毕业设计（论文）题目龙胆提取物高效液相指纹图谱分析方法研究主要研究内 容1.龙胆粉末有效成分的提取2.HPLC指纹图谱分析方法研究3.根据谱图指认龙胆苦苷、獐牙菜苦苷研究方法1. 采用超声法提取龙胆粉末中的有效成分2. 建立HPLC指纹图谱分析方法3. 根据色谱峰指认龙胆苦苷和獐牙菜苦苷主要技术指标(或研究目标)1. 建立龙胆提取物高效液相指纹图谱分析方
2、法2. 通过共有峰指认龙胆苦苷和獐牙菜苦苷主要参考文 献1 国家药典委员会编. 中华人民共和国药典, 2010年版一部. 正文64.2 谢培山.中药色谱指纹图谱M.北京:人民卫生出版社, 2004.3 江蔚新，钦浩，何文顺.龙胆药材的HPLC指纹图谱研究.中草药，2008, 39 (10) ；1563-1565.4 周玉新主编.中药指纹图谱研究技术.北京：化学工业出版社， 2002，20（17）；118-124.批准单位盖章： 日期l龙胆提取物高效液相指纹图谱分析方法研究摘 要：目的 建立龙胆提取物高效液相指纹图谱分析方法。方法：色谱柱：Inertsil ODS-SP柱（1504.6mm,5u
3、m）；流动相A为水，流动相B为甲醇，梯度洗脱:0 min(15%B)15 min(15%B)20 min(20%B)40 min(40%B)70min(80%B)80 min(15%B)85 min(15%B)；流速：1.0mlmin；检测波长：254nm；柱温：室温；进样量：20L。结果：稳定性试验、精密度试验和重现性试验结果RSD均小于2 % ，龙胆样品中共检测到16个主要的指纹色谱峰，经过与对照品的紫外图谱及保留时间的比较,确认5号峰为獐牙菜苦苷，7号峰为龙胆苦苷。结论 本法快速、简便、准确、重复性好。关键词：龙胆 高效液相色谱法 指纹图谱Study on the HPLC Chroma
4、tographic Fingerprint of Radix GentianaeABSTRACT：Objective A high performance liquid chromatography fingerprint method was established to study on the HPLC Chromatographic Fingerprint of Radix Gentianae. Methods：The analytical column was Inertsil ODS-SP（1504.6mm,5um） and the mobile phase was gradien
5、t elution with water（A） and methanol（B）at a flow rate of 1.0 ml/min : 0 min(15%B)15 min(15%B)20 min(20%B)40 min(40%B)70min(80%B)80 min(15%B)85 min(15%B), the UV detection wavelength was 254nm, the colomn temperature was room temperature and the injection Volume was 20L . Results：The method is steady
6、，accurate and repeatable with RSD2.0%, sixteen chromatographic peaks is detected in the extract of Radix Gentianae, peak five is confirmed to be Swertiamarin and peak seven is confirmed to be gentiopicroside by comparing with the reference substance. Conclusion: The results showed that the method wa
7、s rapid, simple, accurate and reapatable.Key Words：Radix Gentianae; HPLC; fingerprint龙胆为龙胆科植物龙胆Gentiana scabra Bunge的干燥根及根茎,性味苦寒,归肝、胆经,具有清热燥湿,泻肝胆火的作用,临床上适用于湿热黄疸、口苦、惊风、抽搐等症1。龙胆的有效成分主要为裂环烯醚萜类化合物,如龙胆苦苷、当药苷及獐牙菜苦苷等。众所周知,单一指标的定量测定很难反映中药的整体质量,而指纹图谱具有系统性、特征性和重现性的特点2,能较全面地反映中药的品质,现已成为控制中药质量的有效途径之一。因此本实验采用HPL
8、C方法建立龙胆药材液相色谱指纹图谱，为龙胆药材提供客观规范的质量评价标准。1.仪器与试药1.1 仪器岛津2010系列高效液相色谱仪，岛津LC-Solution色谱工作站，KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），KQ-500GVDV型三频恒温数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），GZX-DH-50X55-S型电热恒温干燥箱（上海跃进医疗机械厂），DK-98-1型电子恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司），FA1104N型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。2.2试药龙胆苦苷标准品（批号：0912056，购自上海融禾医药科技有限公司），獐牙菜苦苷标准品（批号：0912
9、012，购自上海融禾医药科技有限公司），甲醇（色谱纯，美国fisher公司），95%乙醇（天津市永大化学试剂开发中心，分析纯），甲醇（天津市大茂化学试剂厂，分析纯），纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司），中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版（国家药典委员会）。2. 方法与结果2.1溶液的制备2.1.1 供试品溶液的制备取龙胆药材粉末1.0g，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，加入70%乙醇25 mL,称定重量，超声提取1h，放至室温后再称重，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液10 mL，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL 容量瓶中，稀释至刻度，用0.45L微孔滤膜过滤，作
10、为供试品溶液。2.1.2 对照品溶液的制备龙胆苦苷对照品的配制：取龙胆苦苷对照品10.0 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。獐牙菜苦苷对照品的配制：取獐牙菜苦苷对照品10.0 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。2.2色谱条件与系统适用性实验色谱柱：Inertsil ODS-SP柱（1504.6mm,5um）；流动相A为水，流动相B为甲醇，梯度洗脱:0 min(15%B)15 min(15%B)20 min(20%B)40 min(40%B)70min(80%B)80 min(15%B)85
11、min(15%B)；流速：1.0mlmin；检测波长：254nm；柱温：室温；进样量：20L。理论塔板数以龙胆苦苷计算不低于4000。2.3色谱分离条件的优化2.3.1梯度洗脱条件的选择为了得到基线稳定，分离度好，数目更多的色谱峰，分别对五种梯度洗脱条件进行了考察，典型色谱图如图2-1所示。结果表明条件C能得到分离度好，数目多的色谱峰，因此选择条件3为梯度洗脱色谱条件，五种梯度洗脱条件分别如下：A：020min A8575 B15252040 min A7575 B25254045 min A7550 B25504550 min A5050 B50505060 min A5020 B5080
12、6070 min A5020 B8015B：010min A8585 B15151020 min A8575 B15252040 min A7575 B25254050 min A7550 B25505060 min A5050 B5050 6070 min A5020 B50807080 min A2085 B80158090 min A8585 B1515C：015min A8585 B15151520min A8580 B15202040min A8060 B20404070min A6020 B40807080min A2085 B80158085min A8585 B1515D：02
13、0min A8580 B15202040 min A8050 B20504070 min A5020 B50807080 min A7550 B80158085 min A5050 B1515E：024min A8585 B15152434 min A8575 B15443449 min A7575 B44534960 min A7550 B53796070 min A5050 B791007098 min A5020 B10010098115 min A2085 B10015115120 min A8585 B15152.3.2检测波长及分析时间的选择对样品进行全波长扫描，獐牙菜苦苷的最大吸收为239nm，龙胆苦苷的最大吸收为273nm3。试验中采用270nm和254nm波长提取色谱，发现在270nm下峰的数目较少，峰面积较小，且各峰分离度不好。而在254nm下提取的色谱基线稳定，峰的数目较多，峰的分离度较好，因此选择254nm为检测波长。实验测定样品3，设定运行时间为120min。由所得谱图可知，在70min
