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1、ICS65.020.20B 05DB34安徽省地方标准DB 34/T XXXXX2020白鹤芋组培快繁技术规程Technical regulations for tissue culture and rapid propagation of Spathiphyllum kochii2020 - XX - XX发布2020 - XX - XX实施安徽省市场监督管理局发布DB34/T XXXXX2020前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由阜阳师范大学提出。本标准由安徽省林业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：阜阳师范大学、安徽大汇生态科技发展有限公司、安徽农之源生
2、态农业有限公司、安徽省农业科学院、太和县淼林现代农业发展有限公司。本标准主要起草人：兰伟、郑萍、凌飞东、任杰、刘晓艳、谢欣雨、尚冰冰、张源、胡新、王静宇、刘峰、王先亮。5白鹤芋组培快繁技术规程1 范围本标准规定了白鹤芋（Spathiphyllum kochii）组培快繁的组培工厂、培养基的配制、外植体接种与继代、组培苗分级、组培苗炼苗、组培苗移栽与管理。本标准适用于白鹤芋组培苗工厂化生产。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。JB/T 10594 日光温室和塑
3、料大棚结构与性能要求3 组培工厂3.1 厂址选择选择交通便捷、地势平坦、干净卫生、光照充足、空气清新、水电配套、排水畅通，与污染源距离不小于500 m，且常年主风向的上风向场地3.2 组培车间3.2.1 洗涤室3.2.1.1 作用：用于培养瓶的洗涤、干燥和存放。3.2.1.2 要求：宽敞明亮、通风良好、水电配套、排水畅通。墙面和地面应便于清洁，地面要做防滑处理。3.2.1.3 主要设备：洗瓶机、烘箱、小推车、毛刷。3.2.2 准备室3.2.2.1 作用：用于玻璃、塑料器皿及其他实验用具的清洗、干燥和保存；蒸馏水的生产、储存；药品的称量、溶解和配制；培养基的配制、分装、包扎和灭菌；外植体材料的预
4、处理、培养材料的观察分析等。3.2.2.2 要求：空间较大、清洁明亮、通风良好、墙壁光滑、地面平坦。设有一个较大工作台和水池。3.2.2.3 主要设备：高压蒸汽灭菌锅、微波炉、托盘、水浴锅、蒸馏水器、冰箱、培养箱、电子分析天平、电子天平、电热磁搅拌器、酸度计、培养基自动定量灌装机。3.2.3 接种室3.2.3.1 作用：放置超净工作台，无菌条件下进行植物材料的消毒、接种和培养物继代转移。3.2.3.2 要求：干爽安静、清洁明亮，墙壁光滑平整，地面平坦无缝。3.2.3.3 主要设备：超净工作台、双筒实体显微镜或生物显微镜、空调、紫外灯、空气净化装置、镊子、剪刀。3.2.4 培养室3.2.4.1
5、作用：用于接种材料的无菌培养和观察。3.2.4.2 要求：温度在（252），光照强度1500 lx5000 lx，光照时间10 h/d16 h/d。3.2.4.3 主要设备：紫外灯、空气净化装置、空调、程控定时器、温度计、湿度计。3.2.5 温室3.2.5.1 作用：用于组培苗的炼苗、移栽和生长，以及母本的保存。3.2.5.2 要求：温室建造按JB/T 10594的规定执行。根据实际情况可选择玻璃温室或薄膜温室，应具备夏季可调节室内温度至32 以下，冬季可调节室内温度15 以上的条件，可以喷水补湿，并且具有良好的防虫隔离条件。4 培养基的配制4.1 培养基类型的选择选择MS培养基为基本培养基，
6、培养基成分参见附录A。4.2 母液与激素的配制4.2.1 大量元素母液的配制按10 倍液配制，放置于棕色瓶中，保存于4 冰箱中备用。4.2.2 微量元素母液的配制按100 倍液配制，放置于棕色瓶中，保存于4 冰箱中备用。4.2.3 有机母液的配制按50 倍液配制，放置于棕色瓶中，保存于4 冰箱中备用。4.2.4 铁盐的配制将硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠分别溶于蒸馏水中，加热不断搅拌，使完全溶解，冷却后，将两者溶液充分混合，定容至所需体积。按100 倍液配制，放置于棕色瓶中，保存于4 冰箱中备用。4.2.5 6-BA（6-苄氨基嘌呤）的配制称取50 mg 6-BA，先用少量1 mol/L盐酸溶液溶
7、解，再用蒸馏水定容至100 ml，浓度为0.5 mg/ml 。4.2.6 NAA（萘乙酸）的配制称取10 mg NAA，先用少量1 mol/L 氢氧化钠溶液溶解，再用蒸馏水定容至100 ml，浓度为0.1 mg/ml。4.2.7 KT（激动素）的配制称取10 mg KT，先用少量1 mol/L盐酸溶解溶解，再用蒸馏水定容至100 ml，浓度为0.1 mg/ml。4.3 培养基配方4.3.1 腋芽诱导培养基：MS6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。4.3.2 增殖培养基：MS6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.05 mg/LKT 0.1 mg/L。4.3.3 生根培养基：
8、1/2 MS6-BA 0.2 mg/L+ NAA 0.5 mg/LAC（活性炭）0.3。注： 以上培养基均含3.0 蔗糖, 0.5卡拉胶，培养基pH值均为5.8。培养基配制完毕后，分装至组培瓶中。在121下高温灭菌15 min20 min，并尽快取出使其冷却备用。5 外植体接种与继代5.1 外植体选取和清洗在生长健壮、无病虫害的白鹤芋植株上采集幼嫩的侧芽为外植体。外植体在加有适量洗衣粉的自来水中浸泡后清洗干净，流水中冲洗15 min20 min。5.2 接种工具的消毒接种前，将剪刀、镊子等接种工具在高压灭菌锅中灭菌，取出后浸入75的乙醇中；接种时，再进行燃烧灭菌，然后在无菌工具放置架上放凉备用
9、。燃烧时应注意进入乙醇的一端斜向下进行，不可倒置，防止烧伤。5.3 外植体的消毒将外植体置于已灭菌的超净工作台上，无菌滤纸吸干表面水分，浸入70乙醇中表面消毒20 s30 s，再浸入2.0次氯酸钠溶液消毒15 min20 min，无菌水冲洗4 次5 次。消毒时间应根据生长季节和材料的带菌程度灵活调整，如接种后污染严重则相应增加灭菌时间。5.4 外植体的接种将已消毒的外植体去除外层苞叶和下端切口，留取1.5 cm2.0 cm长左右顶芽，接种在腋芽诱导培养基上。通长每瓶培养基接种2 个3 个外植体。接种后，在瓶子的下角用记号笔标记接种材料、培养基编号、操作人员编号以及接种时间等信息。5.5 初代培
10、养15 d左右，外植体逐渐膨大，叶腋处萌发许多不定芽。继续培养30 d后，将不定芽转接到增殖培养基上。5.6 增殖培养将转接到增殖培养基上的不定芽，通过以芽繁芽的方式，丛生芽均能大量增殖，每40 d45 d就可以进行继代增殖一次。5.7 生根培养将苗高3.0 cm以上，生长健壮、长势一致的无根组培苗，转接到生根培养基中，30 d左右，可进入温室驯化。5.8 培养条件培养温度为24 26 ，光照强度2000 lx3000 Lx，光照时间12 h/d。6 组培苗分级根据植株长势，叶片色泽，结合苗高，生产中可将白鹤芋组培种苗分为一级苗、二级苗、三级苗和不合格苗，通常一级苗苗高5.0 cm以上，二级苗
11、苗高4.0 cm5.0 cm，三级苗苗高3.0 cm4.0 cm，苗高3.0 cm以下为不合格苗。7 组培苗炼苗当组培苗苗高3.0 cm6.0 cm，具有3片4片叶和3条4条根时，便可移栽。为了保证其成活率，常在瓶苗出瓶以前，先在温室内把培养瓶盖全部打开或半打开，打开时间为培养基不发霉为止。一般为5 d左右。8 组培苗移栽与管理8.1 基质消毒 用40甲醛稀释50倍液均匀喷洒于基质上，充分搅拌均匀后用薄膜密封，堆置5 d后，揭开薄膜摊开基质，每日翻动1次2次，7 d后使用。8.2 移栽炼苗后，用镊子将组培苗从培养基中取出，洗掉基部附着的培养基，置于0.1高锰酸钾溶液中浸泡3.0 min5.0
12、min，在温室内，栽植于穴盘基质中。基质以草炭土与珍珠岩体积比为5：2混合，或草炭土与椰糠体积比2：1混合为宜，pH值在5.56.0之间。基质在使用之前，要求进行彻底消毒。8.3 管理8.31 初期管理组培苗移栽后，需及时浇透水，30 min60 min后，立即喷施一遍体积比800倍1000倍多菌灵或百菌清。水质要求EC值小于0.15 mS/cm，pH值为5.06.5。环境的昼夜温度分别是20 25 和 18 20 。相对湿度保持在8590。移栽初期1 d4 d内，光照强度控制在1500 lx2000 lx；5 d15 d 内光照强度控制在6000 lx8000 lx。8.32 常规管理15
13、d后转入日常常规管理，即光照强度控制在15000 lx22000 lx，6月8月控制在15000 lx左右，其他时间控制在22000 lx左右。根据天气情况，每天浇水2次4次。9 成苗标准根据植株长势，苗高，结合叶片数，生产中可将白鹤芋组培穴盘苗分为一级成苗、二级成苗、三级成苗和不合格成苗，通常一级成苗苗高10.0 cm12.0 cm，叶片数5片；二级成苗苗高8.0 cm10.0 cm，叶片数3片5片；三级成苗苗高 8.0 cm，叶片数3片。AA附录A （资料性附录）MS培养基成分表见表A.1。表A.1 MS培养基成分表单位：mg/L成分含量大量元素硝酸钾KNO31900硝酸铵NH4NO31650硫酸镁MgSO47H2O370磷酸二氢钾KH2PO4170氯化钙CaCl22H2O440微量元素硫酸锰MnSO44H2O22.3硫酸锌ZnSO47H2O8.6硼酸H3BO36.2碘化钾KI0.83钼酸钠Na2MoO42H2O0.25硫酸铜CuSO45H2O0.025氯化钴CoCl26H2O0.025铁盐乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA37.25硫酸亚铁FeSO47H2O27.85有机甘氨酸2.0盐酸硫胺素0.1盐酸吡哆醇0.5烟酸0.5肌醇100_
