《《精编》色谱柱和色谱系统的故障检修》由会员分享，可在线阅读，更多相关《《精编》色谱柱和色谱系统的故障检修（34页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、2020 6 4 1 HPLCColumnandSystemTroubleshooting色谱柱和色谱系统的故障检修 WhatEveryHPLCUserShouldKnow每个HPLC使用者应该知道什么 2020 6 4 2 HPLCComponentsHPLC的组成 Pump泵Injector Autosampler进样器 自动进样器Column色谱柱Detector检测器DataSystem Integrator数据系统 积分仪表Allofthesecomponentscanhaveproblemsandrequiretroubleshooting 所有这些部件可能出现故障而需要检修 20
2、20 6 4 3 CategoriesofColumnProblems色谱柱问题的类型 A Pressure压力B Peakshape峰形C Retention保留时间 2020 6 4 4 PressureIssues压力问题 ColumnObservationsPotentialProblems色谱柱观测潜在的问题HighpressurePluggedfrit压力高堵塞滤头Columncontamination色谱柱污染Piuggedpacking堵塞填料 2020 6 4 5 DeterminingtheCauseandCorrectingHighBackPressure查出原因纠正压力
3、 Checkpressurewith withoutcolumn manypressureproblemsareduetoblockagesinthesystemorguard有 无柱子时检查压力 许多压力问题是由于系统或保护柱的阻塞IfColumnPressureishigh如果柱压高 Washcolumn Eliminatecolumncontaminationand冲洗柱子pluggedpacking排除柱污染和填料堵塞 highmolecularweight adsorbedcompounds高分子量 被吸附化合物 precipitatefromsampleorbuffer样品或缓冲液
4、中的沉淀物Backflushcolumn Clearpluggedfrit反冲柱子 清洁阻塞的滤头Changefrit Clearpluggedfrit更换滤头 2020 6 4 6 ColumnCleaning柱子清洗 Flushwithstrongersolventsthanyourmobilephase用比你的流动相更强的溶剂冲洗Reversed PhaseSolventChoicesinOrderofIncreasingStrength为了增加强度选择反相溶剂Useatleast25mlofeachsolventforanalyticalcolumns对于分析柱每种溶剂至少用25ml冲
5、洗Mobilephasewithoutbuffersalts没有缓冲盐的流动相100 Methanol甲醇100 Acetonitrile乙腈75 Acetonitrile 25 Isopropanol75乙腈 25 异丙醇100 Isopropanol异丙醇100 MethyleneChloride 二氯甲烷100 Hexane 已烷 WhenusingeitherHexaneorMethyleneChloridethecolumnmustbeflushedwithIsopropanolbeforereturningtoyourresvered phasemobilephase 当用已烷蔌二
6、氯甲烷柱子时 必须先用异丙醇冲洗 然后再用你的反相流动相 2020 6 4 7 ColumnCleaning柱子清洗 NormalPhaseSolventChoicesinOrderofIncreasingStrength为了增加强度选用正相溶剂Useatleast50mlofeachsolvent每种溶剂至少用50ml50 Methanol 50 Chloroform50 甲醇 50 氯仿100 EthylAcetate乙酸乙酯 2020 6 4 8 HowtoChangeaFrit怎样更换滤头 ColumnInletFrit柱进口滤头ColumnBody柱身CompressionFerru
7、le压缩金属套圈Weargloves戴手套Donotallowbedtodry不要让底座干燥Donottouchthecolumn bodyheatwillextrudepacking不要使柱身受热 否则填料会喷出Donotovertighten不要旋得太紧FemaleEndFitting旋好尾端螺母MaleEndFitting旋好尾端螺头 2020 6 4 9 PreventingBackPressureProblems压力问题的预防 Usecolumnprotection柱保护 Guardcolumns保护柱 预柱 In linefilters在线过滤器SamplePreparation样
8、品预处理Appropriatecolumnflushing适当的柱冲洗Filterbufferedmobilephase过滤缓冲流动相 2020 6 4 10 PreventingBackPressureProblems In LineDevices压力问题的预防 在线装置 MobilePhasePre ColumnInjectorFilterGuardFromPump预柱进样器滤头Column从泵来的流动相保护柱AnalyticalColumnFilterandGuardColumnActonSample分析柱滤头和保护柱作用于样品Pre ColumnActsonMobilePhase预柱作
9、用于流动相ToDetector到检测器 2020 6 4 11 PreventingBackPressureProblems SamplePreparation压力问题的预防 样品制备 Solvent ChemicalEnvironment溶剂 化学环境Particulate AggregateRemove微粒 凝聚物的除去Filtersamples过滤样品Centrifugation离心分离SolidPhaseExtraction S P E 固相萃取CartridgesorPlates薄膜或薄层板DisksorMembranes圆盘或生物膜 2020 6 4 12 PeakShapeIss
10、ues峰形问题 Splitpeaks裂峰Peaktailing峰拖尾Broadpeaks宽峰Poorefficiency低柱效Manypeakshapeissuesalsocombinations I e Broadandtailingortailingwithincreasedretention许多峰形问题是结合在一起的 例如 展宽和拖尾或拖尾和保留时间增加 2020 6 4 13 SplitPeaks裂峰 Canbecausedby 可能的原因 Columncontamination柱污染Partiallypluggedfrit部分阻塞滤片Columnvoid柱头塌陷Injectionso
11、lventeffects溶剂效应 2020 6 4 14 SplitPeaks裂峰ColumnContamination柱污染 Column StableBondSB C8 4 6 250mm 5 mMobilePhase 60 25mMNa2HPO4 pH3 0 40 MeOHFlowRate 1 0mL minTemperature 35 CDetection UV254nmSample FilteredOTCColdMedication 1 Pseudoephedrine2 APAP3 Unknown4 ChlorpheniramineInjection1峰3峰形较好Injection3
12、0峰3裂峰Injection1AfterColumnWashwith100 CAN经100 乙腈冲洗后峰3峰形极好 2020 6 4 15 SplitPeaks裂峰InjectionSolventEffects溶剂化效应 Column StableBondSB C8 4 6 250mm 5 mMobilePhase 82 H2O 18 ACNInjectionVolume 30 LSample 1 Caffeine咖啡因2 Salicylamide水杨酰胺A InjectionSolventB InjectionSolvent100 AcetonitrileMobilePhase峰形宽拖尾峰形
13、尖锐对称样品溶剂尽可能与流动相匹配 2020 6 4 16 DeterminingtheCauseofSplitPeaks裂峰原因的确定 1 Complexsamplematrixormanysamplesanalyzed likelycolumncontaminationorpartiallypluggedfrit复杂样品的基质或分析许多样品 柱污染或部分阻塞滤片2 MobilephasepH 7 likelycolumnvoidduetosilicadissolution unlessspecialtycolumnused 流动相pH 7 由于硅胶溶解使柱塌陷 除非使用专门的柱子 3 In
14、jectionsolventstrongerthanmobilephase likelysplitandbroadpeaks dependentonvolume溶剂比流动相的可能性大 裂峰和宽峰 由样品量来决定 2020 6 4 17 PeakTailing BroadeningandLossofEfficiency峰拖尾 变宽和柱效降低 Canbecausedby 可能的原因Column secondaryinteractions 柱 次级效应 Columnvoid柱塌陷Columncontamination柱污染Columnaging柱老化Columnloading柱负荷超载Extra c
15、olumneffects柱外效应 2020 6 4 18 PeakTailingColumn SecondaryInteractions 峰拖尾柱 次级效应 Column Alkyl C8 4 6 150mm 5 mMobilePhase 85 25mMNa2HPO4 pH7 0 15 ACNFlowRate 1 0mL minTemperature 35 CSample 1 Phenylpropanolamine苯丙醇胺 去甲麻黄碱2 Ephedrine麻黄碱3 Amphetamine安非他明 苯丙胺4 Methamphetamine脱氧麻黄碱5 Phenteramine苯三胺NoTEA无三
16、乙胺10mMTEA10mM三乙胺USPTF 5 美国药典拖尾因子USPTF 5 美国药典拖尾因子1 1 291 1 192 1 912 1 183 1 633 1 204 2 354 1 265 1 575 1 14Peaktailingeliminatedwithmobilephasemodifier TEA atpH7用流动相减尾剂 三乙胺 在pH7消除峰拖尾 2020 6 4 19 PeakTailingColumn SecondaryInteractions 峰拖尾柱 次级效应 Column Alkyl C8 4 6 150mm 5 mMobilePhase 85 25mMNa2HPO4 pH7 0 15 ACNFlowRate 1 0mL minTemperature 35 CSample 1 Phenylpropanolamine苯丙醇胺 去甲麻黄碱2 Ephedrine麻黄碱3 Amphetamine安非他明 苯丙胺4 Methamphetamine脱氧麻黄碱5 Phenteramine苯三胺pH3 0pH7 0USPTF 5 美国药典拖尾因子USPTF 5 美国药典拖尾
