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1、2013年中南大学博士分子生物学一、名词解释1. structure gene:结构基因：是决定合成某一种蛋白质或RNA分子结构相应的一段DNA。结构基因的功能是把携带的遗传信息转录给mRNA（信使核糖核酸）,再以mRNA为模板合成具有特定氨基酸序列的蛋白质或RNA。2. reverse transcriptase：反转录酶（Reversetranscripatase）是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。3. polycistron：在原核细胞中，通常是几种不同的mRNA连在一起，相互之间由一段短的不编码蛋白质的间隔序列所隔开，这种mRNA叫做多顺反子mRNA。
2、单顺反子（monocistron）：真核基因转录产物为单顺反子，即一个基因编码一条多肽链或RNA链，每个基因转录有各自的调节元件。4. untranslated region：非翻译区在分子遗传学中，是指任意一个位于mRNA链编码序列两端的片段。5. directional cloning：定向克隆是指对外源DNA及载体均用两种不同的限制酶消化，再将二者用DNA连接酶连接起来的方法，该法可以使外源DNA以固定的方向插入到载体中，亦可避免载体的自身环化。6. real-time fluorescent PCR：实时荧光定量PCR它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，
3、实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。7. template：DNA在转录的时候为不对称转录，其中的一条链为转录的模板链，另一条为编码链，模板链将DNA上的信息传递到子代DNA或者mRNA中，以维持生物的生长和基因的表达。8. competent cell感受态细胞：理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。9. -complementary：-互补是指lacZ基因上缺失近操纵基因
4、区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的-半乳糖苷酶（ -galactosidase，由 1024 个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。-互补是基于在两个不同的缺陷-半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。大肠杆菌的乳糖lac操纵子中的lacZ基因编码-半乳糖苷酶，如果lacZ基因发生突变，则不能合成有活性的-半乳糖苷酶。例如，lacZM15 基因是缺失了编码-半乳糖苷酶中第 11-41 个氨基酸的lacZ基因，无酶学活性。对于只编码 N-端 140 个氨基酸的lacZ基因（称为lacZ），其产物也没有酶学活性。但这两个无酶学活性的产物混合在一起时，可恢复-半乳糖苷酶的活性，实现基因互补。1
5、0.exon：外显子(expressed region)是真核生物基因的一部分，它在剪接(Splicing)后仍会被保存下来，并可在蛋白质生物合成过程中被表达为蛋白质。外显子是最后出现在成熟RNA中的基因序列，又称表达序列。11. DNA methylation：DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT) 的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸(SAM) 为甲基供体,将甲基转移到特定的碱基上的过程。DNA甲基化可以发生在腺嘌呤的N -6位、胞嘧啶的N -4位、鸟嘌呤的N -7位或胞嘧啶的C-5位等。但在哺乳动物,DNA甲基化主要发生在5-CpG-3的
6、C上.生成5-甲基胞嘧啶(5mC) 。12. micro-satellite DNA：微卫星DNA：重复单位序列最短，只有26bp，串联成簇，长度50100bp，又称为短串联重复序列（Short Tandem Repeat STR)。广泛分布于基因组中。13. single nucleotide polymorphism,SNP：单核苷酸多态性主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。14. BLAST: BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)是一套在蛋白质数据库或DNA数据库中进行相似性比较的分析工具。BLAST程序能迅速与
7、公开数据库进行相似性序列比较。BLAST结果中的得分是对一种对相似性的统计说明。15. epigenetics：表征遗传学研究的是在不改变DNA序列的前提下，通过某些机制引起可遗传的基因表达或细胞表现型的变化。表观遗传的现象很多，已知的有DNA甲基化（DNA methylation），基因组印记（genomic imprinting），母体效应（maternal effects），基因沉默（gene silencing），核仁显性，休眠转座子激活和RNA编辑（RNA editing）等。16. reporter gene：报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物
8、非常容易被鉴定的基因。17. SDS-PAGE: 聚丙烯酰胺凝胶电泳以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。用于分离蛋白质和寡核苷酸。18. gene therapy:基因治疗（gene therapy）是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。也包括转基因等方面的技术应用。也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中，使外源基因制造的产物能治疗某种疾病。19. transfection：转染指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染（永久转染）两大类。20. function
9、al proteomics：蛋白质组学本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代等过程的整体而全面的认识二、问答题1. 从多个层次论述真核基因的表达调控2. southern印迹杂交、northern印迹杂交及western免疫印迹彼此之间有哪些不同是将存在于凝胶中的DNA分子转移（印渍）于固定化介质上并加以检测分析的技术。Southern印迹杂交的基本方法是将DNA标本用限制性切酶消化后，经琼脂糖凝胶电泳分离各酶解片段，然后经碱变性，Tris缓冲液中和和高盐下通过毛吸作用将DNA从凝胶中转印
10、至硝酸纤维素膜上、烘干固定后即可用于杂交。附着在滤膜上的DNA与32P标记的探针杂交，利用放射自显影术确立探针互补的每一条DNA带的位置，从而可以确定在众多消化产物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。利用 Southern 印迹法可进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性片段长度多态性分析 (RFLP)等。Northern印迹杂交是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。Northern印迹杂交的RNA吸印与Southern印迹杂交的DNA吸印方法类似，只是在进样前用甲基氧化汞、乙二醛或甲醛使RNA变性，而不用NaOH，因为它会水解RNA
11、的2-羟基基团。RNA变性后有利于在转印过程中与硝酸纤维素膜结合，它同样可在高盐中进行转印，但在烘烤前与膜结合得并不牢固，所以在转印后不能用低盐缓冲液洗膜，否则RNA会被洗脱。在胶中不能加EB，因它为影响RNA与硝酸纤维素膜的结合，为测定片段大小，可在同一块胶上加标记物一同电泳，之后将标记物胶切下，上色、照像。样品胶则进行Northern转印，标记物胶上色的方法是在暗室中将其浸在含5g/ml EB的0.1mol/L 醋酸铵中10min，在水中就可脱色。在紫外光下用一次成像相机拍照时，上色的RNA胶要尽可能少接触紫外光，若接触太多或白炽灯下暴露过久，会使RNA信号降低。从琼脂糖凝胶中分离功能完整
12、的mRNA时，甲基氢氧化汞是一种强力、可逆变性剂，但是有毒，因而许多人喜用甲醛作为变性剂。所有操作均应避免RNase的污染。Western免疫印迹是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该
13、技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。3. 限制性核酸切酶及其特点限制性核酸切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类切酶，简称限制酶。第一型限制酶。同时具有修饰（modification）及认知切割（restriction）的作用；另有认知（recognize)DNA上特定碱基序列的能力，通常其切割位（cleavage site）距离认知位（recognition site）可达数千个碱基之远。例如：EcoB、EcoK。第二型限制酶。只具有认知切割的作用，修饰作用由其他酶进行。所认知的位置多为短的回文序列（palindrome sequence）；所剪切的碱基序列
14、通常即为所认知的序列。是遗传工程上，实用性较高的限制酶种类。例如：EcoRI、Hind。第三型限制酶。与第一型限制酶类似，同时具有修饰及认知切割的作用。可认知短的不对称序列，切割位与认知序列约距24-26个碱基对。例如：Hinf。4. 反义RNA、RNA干扰及核酶三种基因干预方法的差异反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子，也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 即抑制了该mRNA的翻译。通过反义RNA控制mRNA的翻译是原核生物基因表达调控的一种方式。RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化
15、过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由双链RNA(doublestrandedRNAs，dsRNAs)引发的植物RNA沉默，主要有转录水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录。PTGS是启动了细胞质靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。外源dsRNA进入细胞后产生的小分子干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）的反义链和多种核酸酶形成了沉默复合物(RNA-
16、induced silencing complex，RISC)，RISC具有结合和切割mRNA的作用而介导RNA干扰的过程。RNAi具有特异性和高效性。核酶描述具有催化活性的RNA, 即化学本质是核糖核酸(RNA), 却具有酶的催化功能。核酶的作用底物可以是不同的分子, 有些作用底物就是同一RNA分子中的某些部位。与一般的反义RNA相比，核酶具有较稳定的空间结构，不易受到RNA酶的攻击。更重要的是，核酶在切断mRNA后，又可从杂交链上解脱下来，重新结合和切割其它的mRNA分子。核酶的作用原理为核酶的特异性序列通过互补碱基对形成识别并结合特异性靶RNA，根据这一特性可以人工设计针对某一RNA的核酶分子，破坏病毒转录产物而对机体无害，将针对多个位点的核酶序列串连成一个多靶位核酶分子可以大大提高切割效率，达到治疗目的。因为其独特的优点：（1）序列特异性；（2）不编码蛋白质，无免疫原
