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1、大庆师范学院本科生毕业论文 大庆师范学院本科生毕业论文绿茶抗氧化作用研究院(部)、专业生命科学学院 生物技术 研 究 方 向 生物化学 学 生 姓 名 学 号 200801122389 指导教师姓名 指导教师职称 讲师 2012 年 06 月 02日I摘 要本实验以市售绿茶为研究对象，为了摸索一个绿茶浸提物的最佳提取工艺以及鉴定提取物的抗氧化活性。通过对不同浸提时间、浸提温度与料液比等浸提条件对浸提效果影响的比较，结果表明，绿茶在提取时间为30min，料液比为1：20，提取温度为80时，具有最佳的提取效果。通过在豆油中的抗氧化活性研究表明提取物有着比维生素E强的抗氧化性。关键词：绿茶；绿茶浸提
2、物；最佳提取工艺；抗氧化性AbstractIn this study, purposed to find an optimal extractive plan and identified the antioxidative of green tea by using the commercial green tea as the object. Though comparing influences of different extractive conditions such as extractive periods, extractive temperatures and materi
3、al-liquid proportion, found the optimal extractive plan is 80, 30min, 1:20, meanwhile, discovered theres more powerful antioxidative in green tea than that in Vitamin E by a antioxidative experiment in the oil.Key words: green tea; TP(tea polyphenol) ; optimal extractive plan; antioxidative目 录中文摘要I英
4、文摘要II目 录III1 引 言11.1 研究背景11.1.1绿茶和绿茶浸提物11.1.2绿茶浸提物提取的研究现状11.2 本实验的目的和意义22 材料与方法32.1实验材料32.1.1实验试剂32.1.2仪器及用具32.2实验步骤32.2.1绿茶浸提物的提取32.2.2浸提物的纯化42.2.3绿茶浸提物抗氧化研究43 结果与讨论53.1结果53.1.1不同浸提条件对浸提效果的影响结果53.1.2绿茶浸提物与普通抗氧化物的抗氧化效果的比较63.2讨论74 结 论8参考文献9致 谢10大庆师范学院本科生毕业论文1 引 言第1章 TC01.1 研究背景1.1.1绿茶和绿茶浸提物绿茶（Green T
5、ea）又被称作为不发酵茶。是以茶树的新梢为原料，其制作工艺包括杀青、揉捻、干燥等,因茶叶的色泽和冲泡后的汤汁、叶片大多为绿色，故名。绿茶的鲜叶经高温杀青可以杀灭茶叶中的各种氧化酶，保持了茶叶的绿色。绿茶的制作过程不含发酵。它的特点是汤汁清澈，富含营养，可以预防一些病症1。绿茶是在产业生产中占有最大的比重，其浸提物的提取对茶资源的开发和研究有着很大的促进作用，茶叶的保健功能和一些生理生化作用就是是在浸提物的研究过程中发现的2。以茶多酚为主的绿茶浸提物含有丰富的儿茶素等多酚类化合物，是茶叶中主要的起生理活性和药理作用的物质。而在众多种类的茶叶中，由以绿茶中含量最高，高达将近20%。1.1.2绿茶浸
6、提物提取的研究现状目前国内提取浸提物的方法主要包括有机溶剂提取法和热水提取法等，近年又发现超声波提取法的报道。但是提取的方法又受多种提取因素的制约和影响，因为浸提物是活性物质，所以高温等极性条件可能会使提取物失活。所以由于工艺条件的局限，提取方法仍集中于一些传统的工艺方式3。溶剂提取法是目前所使用的最广泛的方法之一，其原理是利用不同的化合物在不同的溶剂中溶解度的差异而将混合物质直接从茶叶中提取出来。常用的溶剂有水、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇等。乙醇和无菌水是现在应用的较多的试剂4。用不同溶剂提取提取的特点是不同的：用水提取产品纯度较低，一般提取率为5%6%，产品易氧化的同时且含有大量杂质；而利
7、用有机溶剂提取时，产品纯度提高，提取率增加到约10%，氧化程度降较低，但咖啡因、茶碱等杂质含量增高。若将茶叶先用氯仿萃取去除咖啡碱，萃取后的水层再用乙酸乙酯萃取后并进行干燥，将会得到较高纯度的提取物，且产品氧化程度较低5.6。1.2 本实验的目的和意义实验根据不同的条件提取这些混合物，目的是要确定这些提取物在绿茶中的含量以及确定一个最佳方案来提取这些物质，避免提取物的损失和变质，并进一步验证提取物具有比一般抗氧化物质更强的抗氧化性。确定了的最佳提取方案可以应用于实验研究以及化工生产，有了一套最佳提取条件，就可以免去一些不必要的测试、鉴定等。可以直接作为提取方案，既省时省力，也节约能源。绿茶的抗
8、氧化性目前也可用于多种领域，例如生物医学、卫生保健和食品工业等，因为这是一种天然绿色能源，所以它的应用前景比较广阔。3 2第2章 TC0第3章 TC0 材料与方法2.1实验材料2.1.1实验试剂75%乙醇、氯仿、乙酸乙酯。冰乙酸、维生素、可溶性淀粉、碘化钾植酸、冰乙酸、酒石酸。2.1.2仪器及用具万能粉碎机(FW-80)、恒温水浴锅(HH-S6)、电子分析天平(BS224S)、离心机(TD25-WS)、鼓风干燥箱(DHG-9245A)、烧杯(50ml、100ml各10个)、试管、量筒（10ml、100ml）、玻璃棒、分液漏斗、滴定管。2.2实验步骤2.2.1绿茶浸提物的提取先取100g绿茶用万
9、能粉碎机粉碎，再取1500ml 75%乙醇备用。通过对茶叶提取物研究方面的文献和相关资料的查阅，了解到影响提取效果的因素主要有加热温度、加热时间以及加热时的料液比等7。根据这三个提取条件分别做三个单因素实验。（1） 最佳提取温度的摸索首先利用实验验证提取时间对绿茶浸提效果的影响，因为提取效果通常与提取温度成正比，但是过高温度的提取会降低提取效果。固定料液比与提取时间，分别对不同提取温度的绿茶进行浸提。取5份10g茶叶粉末，将绿茶粉末与200ml75%乙醇混合、搅拌、静置后，分别在50、60、70、80、90的水浴锅中提取30min。另外要做两次重复实验。最后取三次实验的提取率的平均值。（2）
10、最佳提取时间的摸索确定最佳提取温度后，在这个提取温度下，固定料液比，对不同温度下的绿茶进行浸提。取5份10g茶叶粉末，将绿茶粉末与200ml75%的乙醇混合、搅拌、静置后，在80的水浴锅中分别加热10min、20min、30min、40min、50min。做两次重复实验，结果取三次提取率的平均值。(3) 最佳提取料液比的摸索取5份10g茶叶粉末，分别与75%的乙醇100ml、150ml、200ml、250ml、300ml混合、搅拌、静置后，在80的水浴锅中分别加热30min，并做两次重复实验，取三次实验提取率的平均值。2.2.2浸提物的纯化将经过上述处理后的茶叶2000r/min，离心2min
11、，弃掉沉淀。在剩余的溶液中加入等体积的氯仿对溶液进行萃取8。震荡、静置分层后取出上层水相。再向水相中加入等量的乙酸乙酯。震荡、静置分层后取下层有机相。因为乙酸乙酯易挥发的性质，加热有机相使其蒸发结晶，最后得到纯度较高的绿茶提取物9。2.2.3绿茶浸提物抗氧化研究(1) 将150g的豆油与100mg硫酸亚铁混合均匀后将混合物等量分成五组。(2) 将其中一组作为对照组，另外四组分别加入以下物质：组添加6ml绿茶浸提物、组添加6ml维生素E、组添加6ml绿茶浸提物和6ml植酸、组添加6ml绿茶浸提物和6ml酒石酸。并将5组豆油样品于65，无光条件下放置10.11.12。(3) 每隔3天时间做一次测量
12、豆油的抗氧化值，分别称取各样品3g，加入30ml三氯甲烷-冰乙酸混合液并立即摇动使其溶解，然后加入1ml饱和KI溶液，加塞后轻微震荡30s，置于暗处3min。(4) 静置后取出样品并加入100ml的水，轻轻摇晃，立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定样品，滴定至淡黄色后，向样品中加入1ml的淀粉指示剂，继续滴定样品，滴定至蓝色时则为滴定终点13。3第4章 TC0 结果与讨论3.1结果3.1.1不同浸提条件对浸提效果的影响结果以下是不同条件影响下浸提物提取质量的数据。表31 不同温度对绿茶浸提物提取效果的影响提取温度（）5060708090浸提物比例5.9%6.7%7.5%8.4%10.3%由表31可知，
13、当提取时间和料液比固定的情况下，提取物率是随着提取温度的升高而递增，但是当90时，由于加热温度过高，可能会导致提取物的抗氧化活性丧失14，所以绿茶浸提物的最佳提取温度为80。表32 不同提取时间对绿茶浸提物提取效果的影响提取时间（min）1020304050浸提物比例6.1%6.9%7.9%7.1%6.5%由表32可知，当料液比和提取温度固定的情况下，改变提取时间对最后得到的提取率的影响较小15，提取率先是随着提取时间的增加而增加，但温度超过30后，随着提取温度的增高，提取率减小。由结果比较得出，当料液比和提取温度两个条件确定时，最佳提取时间应该是在30min左右。表33 不同料液比对绿茶浸提
14、物提取效果的影响料液比1:101:151:201:251:30提取率6.2%7.3%8.2%6.8%5.6% 由表33可知，当提取时间和提取温度固定的情况下，逐步增加料液比会改变影响提取的效果，初步增加液料比时可以增加提取率，当料液比大于1:20后，随着料液比例的增加，提取率逐渐减少，这是由于浸提物混合物中不同物质的不同溶解度造成的16，所以当提取温度和提取时间确定时，最佳液料比大约为1:20。这个结果与文献7中的描述一致。 3.1.2绿茶浸提物与普通抗氧化物的抗氧化效果的比较油脂氧化时会在油脂当中产生一些氧化物质，这些物质的氧化性可以将碘离子氧化成碘，而碘可以使淀粉溶液变蓝。当用硫代硫酸钠滴定时，这些碘又变成碘离子，而蓝色也随之消失。所以，当油脂的氧化程度较高时，其中的氧化物的含量必定也高，用来滴定的硫代硫酸钠消耗量也会越多17。消耗的硫代硫酸钠的体积可用于油脂的过氧化值（PV）的计算：PV = 1000（V-Vo）c/m其中：V 代表滴定消耗的硫代硫酸钠体积（ml） Vo代表空白组消耗的硫代硫酸钠体积（ml） C 代表硫代硫酸钠的浓度（mol/
