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1、福建中医药大学学士学位论文学号：2006041001福建中医药大学2010届药学专业本科生毕 业 论 文黄药子毒性成分的提取与分离Dioscorea bulbifera Extraction and Separation of toxic components专 业： 药 学姓 名： 张 盈指导老师： 华碧春 教授实习单位： 福建中医药大学药学院 中国福州 目录目录1中文摘要2英文摘要2一前言 3二实验仪器与试药 42.1 仪器42.2 试药52.3 试剂5三.实验操作流程图 6四黄独乙素的提取 74.1 回流提取 7 4.2 萃取84.3 小结与讨论8五.黄独乙素的分离 8 5.1 色谱柱分
2、离 8 5.2 薄层板的检测85.3 埃利希检测85.4 小结与讨论 9 六.化学成分鉴别96.1HPCL色谱条件 96.2 HPCL检测106.3小结与讨论 10参考文献10致谢11综述13个人简介19中文摘要摘要：目的：提取与分离黄药子的毒性成分黄独乙素。方法：回流提取，用三氯甲烷萃取提取液，通过反复常压硅胶柱色谱分离从黄药子三氯甲烷萃取部位中共得该化合物，利用物化性质和谱学手段鉴定这个化合物的结构：黄独乙素。结果：目标成分经重结晶得大量白色柱状结晶（埃利希反应呈阳性）。结论：利用硅胶柱色谱和梯度洗脱能够较好地从黄药子中筛选、分离出的有效成分黄独乙素。关键字：黄药子；提取；分离；鉴定英文摘
3、要Abstract: Objective: Extraction and Separation of toxic components Dioscorea bulbifera Dioscorea bulbifera B factor. Methods: The extraction and extraction with chloroform extract by repeated silica gel column chromatography atmospheric pressure bulbifera chloroform extraction from the Chinese Comm
4、unists were part of the compound, using physical and chemical properties and spectroscopic identification of the compounds means: B prime bulbifera. Results: The target component was crystallized at large white columnar crystal (positive Ehrlich reaction). Conclusion: The use of silica gel column ch
5、romatography and gradient elution can be well screened from Dioscorea bulbifera, isolated the active ingredient bulbifera B factor.Keywords: Dioscorea bulbifera; extraction; separation; identification一、 前 言黄药子为薯蓣科多年生木本植物黄独Dioscorea bulbiferaL的块茎，又名黄药根、木药子、黄独等。其药历史悠久，历代本草均有记载，黄药子性苦寒，具有散结消瘿、清热解毒、凉血的止血
6、作用1，临床用于治疗甲状腺肿、甲亢、癌肿、原发性血小板减少性紫癜，慢性粒细胞性白血病、慢性盆腔炎、卵巢囊肿、子宫肌瘤等疾病2-3。 黄药子中含有薯蓣皂甙及薯蓣毒皂甙、呋喃去甲基二萜类化合物及碘、鞣质等。经研究，其药理作用有：(1)对甲状腺影响：实验表明黄药子对正常鼠甲状腺，硫氧嘧啶等抗甲状腺药物所致甲状腺肿瘤无影响，对硫氰酸钾所致轻度甲状腺肿、缺乏碘甲状腺肿有效4。(2)抗肿瘤作用：黄药子对S180(小白鼠肉瘤)、U14(宫颈癌)、白血病、胃癌均有抑制作用，可抑制肿瘤细胞生长5-6。(3)抗菌和止血作用；5%煎剂对金黄色葡萄球菌有抑制作用，水浸液(1：3)对皮肤真菌有抑制作用7-8。 黄药子治
7、疗多种疾病疗效确切，但毒性反应也较为多见，轻度中毒可见口干、食欲不振、恶心、腹痛等消化道反应。严重者可见昏迷。瞳孔缩小、呼吸困难、心肌麻痹而致死9。一般临床多见中毒性肝炎，主要表现为恶悯、呕吐、厌油腻、肝功能异常或出现黄疸。临床亦有报道有肝肿大、腹水等中毒性肝炎的表现10。实验表明，黄药子的主要毒性成分对肝、肾组织有一定损害，损害程度与给药时间及给药剂量密切相关。动物实验还表明，当功能明显减轻黄药子对肝脏的损害。中毒机制主要是：(1)对肝细胞的直接损伤，使细胞内参与物质代谢的酶(如G-6.P、SDH)活性受抑制，致肝细胞物质代谢障碍；（2）对肾小管的直接损害,进而引起肾功能的降低11。临床一旦
8、发生中毒反应，轻者可以洗胃，导泻，内服活性炭，静点葡萄糖、生理盐，补充能量合剂及维生素B、C，佐以中药清热利湿退黄，健脾和胃；重者加用血制品及凝血酶原复合物。由于肝、肾毒性，限制了黄药子的广泛用药，为了进一步合理地利用其药用资源，为此作者对黄药子进行了系统的研究。通过三氯甲烷萃取提取液，硅胶柱色谱分离并用TCL检测，最后得白色柱状结晶，埃利希反应呈阳性。因此，本文中通过三氯甲烷萃取结合硅胶色谱柱分离基础进行研究，确定其发挥毒性药效的主要成分。二、实验仪器和试药1. 实验仪器实验仪器仪 器 名 称型 号生 产 厂 家真空干燥箱DZF-300郑州长城科工贸有限公司循环水式多用真空泵SHB-郑州长城
9、科工贸有限公司低温冷却循环泵DLSB-5郑州长城科工贸有限公司旋转蒸发器RE-52上海亚荣生化仪器厂电热恒温鼓风干燥箱DHG-9240上海精宏实验设备有限公司高效液相色谱仪SOP600E-2996Waters紫外检测器2996 Photodiode Array Detector Waters高压泵600 ControllerWaters真空在线脱气机In-Line Degasser AFWaters超声波清洗器KQ-500E昆山市超声仪器有限公司 净化稳压电流LFS-C福州自动控制仪器厂调温电热套KDM山东省鄄城振兴仪器厂电子天平FA2004N上海精密仪器科学有限公司HPLC色谱柱Platis
10、il ODS 色谱柱北京迪马科技公司微量进样器25ul 平头上海高鸽工贸有限公司2. 实验试药实验所用的试药试 药批 号来 源黄药子饮片091121福建同春药业有限公司中药分公司3. 实验试剂实验所用的试剂名 称纯 度 等 级生 产 厂 家无水乙醇分析纯天津市福晨化学试剂厂二氯甲烷分析纯天津市福晨化学试剂厂甲醇分析纯天津市福晨化学试剂厂羧甲基纤维素钠分析纯天津市大茂化学试剂厂98%浓硫酸分析纯上海成海化学工业有限公司柱层层析硅胶化学纯青岛海洋化工有限公司对二氨基苯甲醛化学纯上海成海化学工业有限公司甲醇色谱纯山东禹王实业有限公司化工分公司乙酸分析醇江苏强盛化工有限公司三、实验操作流程图 黄药子饮
11、片200g75%乙醇回流提取4次,每次2h浓缩至无醇味稠膏二氯甲烷萃取浓缩黄药子部位（上层）二氯甲烷部位（下层）干燥，二氯甲烷溶解，硅胶拌匀后蒸干，硅胶柱层析，用二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱二氯甲烷：甲醇（20：1）二氯甲烷：甲醇（5:1）二氯甲烷：甲醇（8：1）二氯甲烷：甲醇（10：1）二氯甲烷：甲醇（15:1 ）二氯甲烷：甲醇（50：1）二氯甲烷：甲醇（100：1）LTC检测埃利希检测HPLC鉴别50:1组分中含较多黄独乙素四、 黄独乙素的提取4.1 回流提取用电子天枰称取黄药子饮片200 g，用以下两方法提取，方法1:十倍量的75%乙醇浸泡2小时，用冷凝管回流提取2小时，共提取四次，合并四次提取液，减压回收溶剂至无醇味，蒸馏水溶解，然后浓缩至饱和；方法2：十倍量的蒸馏水浸泡2小时，用超声回流2小时，共四次，合并煎液，减压回收4.2 萃取将提取液倒入分液漏斗，用二氯甲烷萃取12，静置2小时分层，下层为萃取液；然后将萃取液抽滤，减压回收，干燥得萃取物重量为1g。4.3 小结与讨论4.1溶剂用醇比用水好，因为首先醇是有机溶剂黄药子中的成分更容易溶于有机溶剂;其次醇的沸点比水低
