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1、Dikma固相萃取 液相色谱柱技术 DikmaTechnologies 迪马科技简介 发展历史 迪马科技成立 专注于色谱消耗品业务 1993 2000 Diamonsil一代HPLC色谱柱上市应用实验室成立 2003 客服中心成立 2005 天津CRC生产基地和研发中心成立通过ISO9001质量管理体系认证 2007 美国研发中心成立北京研发中心成立ERP系统启动 2008 Diamonsil二代HPLC色谱柱上市三聚氰胺检测 迪马ProElut样品前处理产品大获成功 发展历史 承担十一五国家科技支撑计划项目 科研用试剂产业示范Inspire和SpursilHPLC色谱柱登陆北美市场 2009
2、 迪马科技多款液相色谱柱 Inspire Endeavorsil Spursil Leapsil Bio Bond 入选美国药典 国家处方集USP PQRI数据库 2010 2011 荣获 2010年度最具影响力色谱消耗品配件类厂家 奖项 2012 承担十二五国家科技支撑计划 新型分离材料研发与集成示范 课题 迪马DikmaPure高纯溶剂作为北京2008奥运会兴奋剂检测中心指定使用品牌 2008 十二五国家科技支撑计划课题 课题名称 新型分离材料研发与集成示范课题编号 2012BAK25B02课题承担单位 迪马科技课题参与单位 中国人民解放军第四军医大学 新药研发和药物代谢方面应用中国食品药
3、品检定研究院 药物分析方面应用中国科学院生态环境研究中心 环境方面应用秦皇岛出入境检验检疫局 食品安全方面应用 迪马多款液相色谱柱入选美国药典USP数据库 迪马科技自有品牌产品线 迪马科技代理产品线 国内办事机构分布 国外办事机构分布 Customers Customers Customers ANDMANYOTHERS 出口工厂 北京总部 北京总部 上海分公司 上海分公司 美国分公司 加拿大分公司 北京研发中心 北京研发中心实验室 北京研发中心实验室 北京研发中心实验室 十万级净化生产车间 应用实验室一角 物流中心 2012年公司联欢会 2012年公司联欢会 公司活动 联系我们 行业应用和热
4、点解决方案请见 32 目录 第二部分ProElutSPE产品介绍 第六部分Dikma高效液相色谱柱 第四部分SPE常见问题及解决方法 第五部分高效液相色谱柱的选择方法 第三部分固相萃取方法的建立 第一部分固相萃取技术简介 第七部分色谱柱的使用与维护 33 第一部分固相萃取技术简介 34 34 样品分析流程 液液萃取 LLE 固相萃取 SPE 免疫亲和柱GPC 高速均质器溶剂加速提取微波提取 旋转蒸发仪氮吹仪 提取 净化 浓缩 检测 GCGC MSHPLCHPLC MS 固相萃取技术优点 1 与液液萃取技术相比 试剂用量少 避免乳化现象出现2 适用范围广3 样品处理量大4 可供选择的吸附剂种类多
5、5 净化效果明显6 回收率高 重现性好7 形式多样 已趋于自动化 36 固相萃取的原理 固相萃取 SolidPhaseExtraction 简称SPE 也称固相提取 是一项结合了选择性保留 选择性洗脱等过程的分离技术 当复杂的样品溶液通过吸附剂时 吸附剂会通过作用力选择性地保留目标化合物或者干扰物 其他组分则透过吸附剂流出小柱 然后用另一种洗脱能力较强的溶剂体系选择性地把目标物洗脱下来 从而实现对复杂样品的分离 纯化和富集 37 固相萃取的作用 1 1 1 1 1 净化 去除干扰物 优化色谱图 增加定量准确性 1 富集 浓缩样品增加灵敏度 转换溶剂 适合色谱分析 38 离子交换相互作用Coul
6、ombPower 非极性相互作用Non PolarInteraction 极性相互作用Polar Interaction 共价键Covalent 固相萃取过程涉及的作用力 色散力 取向力和氢键 相反电荷的相互吸引 化学键 固相萃取过程涉及的作用力 39 固相萃取的净化模式 淋洗 洗脱 洗脱 上样 活化 目标物 干扰物 保留目标化合物 保留干扰物 40 第二部分ProElutSPE产品介绍 41 Dikma固相萃取柱 硅胶基质 聚合物基质 专用柱 Dikma公司自主开发了ProElutSPE系列产品 涵盖硅胶键合 有机聚合物 专用柱以及其它吸附剂三十四种固相萃取柱 其它吸附剂 42 黄色代表离子
7、交换吸附剂 硅胶键合吸附剂的基团类型 1 ProElut硅胶键合吸附剂 R C2H5R C8H17R C18H37R C6H5R CH2 3CN R CH2 3NH2R CH2 3NH CH2 2NH2未进行键合处理 C2C8C18PHCN NH2PSASi 红色代表反相吸附剂 蓝色代表正相吸附剂 ProElut硅胶键合吸附剂的技术参数 44 含亲水基团的聚苯乙烯 二乙烯基苯共聚吸附剂 简称PLS 典型的亲水亲脂平衡吸附剂 极性亲水基团 能够与化合物上的极性基团发生相互作用 非极性亲脂基团 能够与化合物上的非极性基团发生相互作用 PLS共聚物结构示意图 2 ProElut高分子聚合物吸附剂 4
8、5 混合型聚合物吸附剂的结构示意图 PXC PXA PWC PWA PLS 2 ProElut高分子聚合物吸附剂 46 高分子聚合物吸附剂与传统硅胶键合反相吸附剂比较 2 ProElut高分子聚合物吸附剂 47 3 专用柱 纺织品偶氮检测ProElutAZO茶叶农残检测ProElutTPC苯并芘检测ProElutBaP乳品中农残 氯霉素检测ProElutDPC 48 ProElutFlorisil ProElutCarb 石墨化碳黑 ProElutAluminaN 中性氧化铝 ProElutAluminaA 酸性氧化铝 4 其他类型的吸附剂 ProElutAluminaB 碱性氧化铝 49 第
9、三部分固相萃取方法的建立 50 固相萃取方法的建立步骤 1 吸附剂类型选择2 引入通用操作方法3 方法优化4 方法验证 51 1 吸附剂类型选择 1 根据目标化合物的性质选择 52 1 吸附剂类型选择 2 根据基质的性质选择 3 其它选择原则当某一种或一类化合物可以被一种以上的SPE填料从基质中萃取出来时 选择性较好的SPE柱应被选择选择性 离子交换 正相 反相固相萃取部分与分析部分的分离机理不同时 最终的分析效果往往较好 1 吸附剂类型选择 1 吸附剂类型选择 4 SPE柱规格选择 54 55 2 标准操作方法 1 反相固相萃取柱操作方法操作流程 活化 首先用甲醇活化 然后用水或样品溶剂平衡
10、上样 将溶有目标化合物的样品溶液加入小柱淋洗 纯水或含适量甲醇的水溶液 或样品溶剂洗脱 含适量甲醇的水溶液 甲醇或极性更低的有机溶剂 56 2 标准操作方法 2 正相固相萃取柱操作方法操作流程 活化 正己烷或样品溶剂活化 平衡上样 将溶有目标化合物的样品溶液加入小柱淋洗 正己烷 含适量甲基叔丁基醚的正己烷溶液或样品溶剂淋洗洗脱 含适量甲基叔丁基醚的正己烷溶液 甲基叔丁基醚或极性更强的有机溶剂 57 2 标准操作方法 3 离子交换固相萃取柱操作方法操作流程 活化 甲醇 水上样 溶有目标化合物 酸碱离子化 的样品溶液加入小柱淋洗 依次用水和甲醇淋洗洗脱 阳离子交换 氨水甲醇 阴离子交换 甲酸甲醇
11、58 3 方法优化 59 3 方法优化 淋洗曲线的建立对于反相模式 可将目标化合物的水溶液上样 然后分别用5 100 的甲醇水溶液洗脱 分别收集洗脱液分析 对于正相体系 可将目标化合物的正己烷溶液上样 然后依次用5 100 的正己烷甲基叔丁基醚溶液洗脱 分别收集洗脱液分析 60 氯霉素在ProElutPLS上的淋洗曲线 3 方法优化 61 添加回收率 80 120 相对标准偏差 n 6 RSD 10 净化效果 有无和目标物重叠或接近的干扰物 4 方法验证 62 第四部分SPE常见问题及解决方法 63 固相萃取过程中常见问题 64 A目标化合物在吸附剂上的保留不足 超过5 的目标化合物出现在样品
12、流出液或淋洗液 回收率低 65 B目标物未被完全洗脱 当目标物在样品流出液或淋洗液中未出现而且洗脱液中仅有少量出现 回收率低 66 C其它环节 如果目标化合物在在样品流出液或淋洗液中未出现且在洗脱液中正常出现 回收率低 67 重现性差 68 流速过低 69 五 高效液相色谱柱的选择方法 分离度方程 70 71 增加K流动相比例流速柱温增加N增加柱长减少内径减小填料粒径增加a流动相组成 PH固定相 72 一款新填装的5 m的反相色谱柱柱效大约是每米80000块理论塔板 而3 m色谱柱柱效大约是每米100000块理论塔板 塔板可使用下面的公式估算 N 3500L dpL代表柱长 单位是cm dp代
13、表填料粒径 单位是 m 柱效 73 柱压 与流动相粘度 固定相颗粒粒径 柱长 填充方法等有关为最大限度延长柱寿命 操作压力应最小日常分析时柱压应保持在3000psi以下P 250L F dp2dc2L 柱长 cm 流动相粘度 mPa s F 流速 mL min dp 填料直径 m dc 柱内径 mm 高效液相色谱柱的选择 确定分离目的 确定你的应用是要求高分离度 短分析时 间 高灵敏度 长柱寿命 低操作成本等 评估分析物的化学性质 诸如化合物结构 溶解度 稳定 性等 选择合适的色谱柱 了解色谱柱的物理和化学性质 根据相关标准 文献资料进行选择 74 分析物理化性质确定色谱柱的类型 分子量 小分
14、子 肽 蛋白质 聚合物溶解性样品成分的化学结构 logP样品是否解离 pKa值 75 样品成分的化学结构 logP logP分配系数ChemOfficeACDLABS化合物logP 固定相logP 76 样品是否解离 pKa值 碱性样品 残余羟基少金属杂质少 活化 OH 最好含有极性基团PH影响保留时间样品存在形式不同 离子 非离子 极性不同Pka 2起始缓冲PH小于3 0ACDLABS 77 分析物理化性质确定色谱柱的类型 78 填料性质选择色谱柱 基质粒径孔径比表面积硅胶纯度颗粒形状机械强度键合密度封端 79 基质 硅胶最通用的基质机械强度大化学修饰容易pH值范围有限 一般2 8 经过特殊
15、修饰后可以拓宽聚合物机械强度不够大 批次重复性相对较差应用pH范围宽 1 14 温度稳定商品化的色谱柱不多 且价格较贵 80 粒径 根据速率理论 塔板数与填料的粒径近似成反比 因而减小填料粒径可以提高柱效高的柱效能有效抑制色谱峰展宽 从而提高分析的灵敏度粒径越小 色谱柱柱压越高 柱子容易被污染 寿命低分析工作者应综合柱效 分析时间和灵敏度的要求对填料的粒径进行合理的选择 81 孔径 比表面积 硅胶是多孔颗粒 分子必须进入孔内才能被吸附和分离孔径和比表面积是相辅相承的两个概念孔径小 含孔率高 则比表面积大 碳载量高 增加样品与键合相之间的反应 增加保留 上样量和分离度 比表面积小 平衡时间快 适
16、合梯度分析分子量小于4000的小分子使用100 填料分力量4000 10000之间使用100 200 填料分子量大于10000的大分子使用300 填料 82 硅胶纯度 A型硅胶是以无机金属硅酸盐制备而来 具有很高的金属含量 B型硅胶是用有机硅的工艺制备得到 只含有微量的金属 一般ppm级 待测组分与金属发生螯合作用导致色谱峰拖尾和前延金属离子能够活化硅羟基 增加其酸性 83 颗粒形状 无定型硅胶 最初的HPLC填料 粒径 5 m 柱床稳定性差 比表面积小 价格便宜 目前多用于中压色谱 球形硅胶 现代HPLC填料 粒径小 5 m 3 m sub2 m 重现性好 比表面积大 柱效高 柱压低 分离能力强 稳定性好 柱寿命长 84 键合相 键合相不同 对化合物的选择性不同C18 C8常用反相键合相NH2 CN等可用于正相 也可以用于反相 Alkyl Polar modified 85 键和密度 碳载量 好的键合相色谱柱应在表面附着高浓度的甲基硅烷基团现代键和技术只能覆盖硅胶表面硅羟基的 50 一般为2 8 3 3 mol m2键合物 密度低表示未能完全键合一般厂家不给出键合密度 只给出C 硅胶
