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1、生化需氧量（BOD5）测定一、原理生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解存在于水中的某些可氧化物质，主要是有机物质所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。分别测定水样培养前的溶解氧含量和201培养五天后的溶解氧含量，二者之差即为五日生化过程中所消耗的溶解氧量（BOD5）。对于某些地面水及大多数工业废水、生活污水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以降低其浓度，保证降解过称在有足够溶解氧的条件下进行的。其具体水样稀释倍数可借助于高锰酸钾指数或化学需氧量（CODcr）推算。对于不含或少含微生物的工业废水，在测定BOD5时应进行接种，以引入能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在难于被一般生活
2、污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应接种经过驯化的微生物。二、仪器 1、恒温培养箱 2、5-20L细口玻璃瓶 3、10002000mL量筒 4、玻璃搅棒：棒长应比所用量筒高长20。在棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并带有几个小孔的硬橡胶板。 5、溶解氧瓶：200-300mL，带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口。 6、宏吸管：供分取水样和添加稀释水用。三、试剂 1、磷酸盐缓冲溶液：将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4），21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4），33.4g磷酸氢二钠（Na2HPO47H2O）和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至1000mL。此溶液的
3、PH值应为7.2。 2、硫酸镁溶液：将22.5g硫酸镁（MgSO47H2O）溶于水中，稀释至1000mL。 3、氯化钙溶液：将27.5g无水氯化钙溶于水中，稀释至1000mL。 4、氯化铁溶液：将0.25g氯化铁（FeCl36H2O）溶于水，稀释至1000mL。 5、盐酸溶液（0.5mol/L）：将40 mL（=1.18g/ mL）盐酸溶于水，稀释至1000mL。 6、氢氧化钠溶液（0.5mol/L）：将20g氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL。 7、亚硫酸钠溶液（C1/2 Na2 SO3=0.025 mol/L）：将1.575g亚硫酸钠溶于水，稀释至1000mL。此溶液不稳定，需每天配制。8
4、、葡萄糖谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12O6）和谷氨酸钠（HOOCCH2CH2CHNH2COOH）在103干燥1h后，各称取150mg溶于水中，移入1000 mL容量瓶内并稀释至标线，混合均匀。此标准溶液临用前配制。9、稀释水：在5-20L玻璃瓶内装入一定量的水，控制水温在20左右。然后用无油空气压缩机或薄膜泵，将此水曝气2-8h，使水中的溶解氧接近饱和，也可以鼓入适量纯氧。瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于20培养箱内放置数小时，使水中的溶解氧量达到8mg/L。临用前于镁升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL，并混合均匀。 稀释水的PH值应为7.2，其BOD
5、5应小于0.2 mg/L。10、接种水：可选用以下任一方法，以获得适用的接种液。（1） 城市污水，一般采用生活污水，在在室温下放至一昼夜，取上层清液使用。（2） 表层土壤浸出液，取100g花园土壤或植物生长土壤，加入1L水，混合并静置10min ，取上清液供用。（3） 用含城市污水的河水或湖水。（4） 污水处理厂的出水。（5） 当分析含有难于降解的废水时，在排污口下游3-8km处取水样作为废水的驯化接种液。如无此种水源，可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气、每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低
6、值出现突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用作接种液。一般驯化过程需要3-8天。 11、接种稀释水：取适量接种液，加于稀释水中，混匀。每升稀释水中接种液加入量生活污水为1-10 mL；表层土壤浸出液为20-30mL；河水、湖水为10-100mL。接种稀释水的PH值应为7.2，其BOD5值宜在0.3-1.0 mg/L之间为宜。接种稀释水配制后应立即使用。四、测定步骤 1、水样的预处理（1） 水样的PH若超出6.5-7.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠溶液调节至近于7，但用量不要超过水样体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸进行调节中和。（2） 水样中含有铜、铅、锌、铬、镉、砷
7、、氰等有毒物质时，可使用经过驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或增大稀释倍数，以减少毒物的浓度。（3） 含有少量游离氯的水样，一般放置1-2h，游离氯即可消失。对于游离氯在短时间内不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，以除去之。其加入量的计算方法是：取中和好的水样100 mL，加入1+1乙酸10mL，10%（m/v）碘化钾溶液1 mL，混匀。以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠标准溶液滴定游离碘。根据压硫酸钠标准溶液消耗的体积及浓度，计算水样中所需要加入亚硫酸钠溶液的量。（4） 从水温较低的水域中采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20左右，充分振摇，以赶出过饱和的溶解氧。从水
8、温较高的水域或废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20左右，并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。 2、水样的测定 （1）不经稀释水样的测定：溶解氧含量较高、有机物含量较少的地面水，可不经稀释，而直接以虹吸法将约20的混匀水样转移至两个溶解氧瓶内，转移过程中应注意不使其产生气泡。以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样，加塞水封。立即测定其中一瓶溶解氧。将另一瓶放入培养箱中，在201培养5天后，测其溶解氧。 （2）需经稀释水样的测定 稀释倍数的确定：地面水可由测得的高锰酸盐指数乘以适当的系数求出稀释倍数（见下表）高锰酸盐指数（mg/L）系 数0.5、0.7、1.0工业废水可由重铬酸钾法测得的CO
9、D值确定。通常需作三个稀释比，即使用稀释水时，由COD值分别乘以系数0.075、0.15、0.225，即获得三个稀释倍数；使用接种稀释水时，则分别乘以0.075、0.15和0.225，获得三个稀释倍数。 稀释倍数确定后按照下述方法之一测定水样: 一般稀释法 ：按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水（或接种稀释水）于1000 mL量筒中，加入需要量的均匀水样，再引入稀释水（或接种稀释水）至800mL，用带胶板的玻璃棒小心上下搅匀。搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面，防止产生气泡。按不经稀释水样的测定步骤，进行瓶装，测定每天溶解氧和培养5天后的溶解氧量。另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水（
10、或接种稀释水）作为空白，分别测定5天前、后的溶解氧含量。 直接稀释法：直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。在已知俩个容积相同（其差小于1mL）的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀释水），再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样量，然后引入稀释水（或接种稀释水）至刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。其余操作与上述稀释法相同。 在BOD5测定中，一般采用叠氮化钠改良法测定溶解氧。如遇干扰物质，应根据具体情况采用其它测定法。溶解氧的测定方法附后。五、计算 1、不经稀释直接培养的水样BOD5（mg/L）=C1-C2式中：C1水样在培养前的溶解氧浓度（mg/L）；C2水样经5天培养后，剩余溶解氧浓度（
11、mg/L）。2、经稀释后培养的水样BOD5（mg/L）=（C1-C2）（B1-B2）f1f2式中：C1水样在培养前的溶解氧浓度（mg/L）；C2水样经5天培养后，剩余溶解氧浓度（mg/L）；B 1稀释水（或接种稀释水）在培养前的溶解氧浓度（mg/L）；B 2稀释水（或接种稀释水）在培养后的溶解氧浓度（mg/L）；f 1 稀释水（或接种稀释水）在培养液中所占比例；f 2 水样在培养液中所占比例。六、注意事项 1、测定一般水样的BOD5时，硝化作用很不明显或根本不发生。但对于生物处理池出水，则含有大量硝化细菌。因此，在测定BOD5时也包括了部分含氮化合物的需氧量。对于这种水样，如只需测定有机物的需氧量，应加入硝化抑制剂，如丙烯基硫脲（ATU，C4H8N2S）等。 2、在两个或三个稀释比的样品中，凡消耗溶解氧大于2 mg/L和剩余溶解氧大于1mg/L都有效，计算结果时应取平均值。 3、为检查稀释水和接种液的质量，以及化验人员操作技术，可将20mL葡萄糖-谷氨酸标准溶液用接种稀释水稀释至1000mL，测其BOD5，其结果应在180-230mg/L之间。否则，应检查接种液、稀释水或操作技术是否存在问题。
