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1、 细胞免疫荧光技术 实验目的 掌握免疫荧光技术的基本原理熟悉细胞免疫荧光技术的方法了解在免疫细胞化学技术中如何获得好的实验结果 实验原理 原位检测抗原抗体特异反应间接法 间接荧光抗体染色法示意图 Hela细胞 Vinculin 实验用品 试剂 固定液 4 PFA细胞通透 0 2 TritonX封闭试剂 10 正常山羊血清一抗 小鼠源抗Vinculin单克隆抗体二抗 AlexaFluor555标记的山羊抗小鼠IgGDAPI 4 6 二脒基 2 苯基吲哚 PBS洗涤缓冲液 PH7 4 材料 Hela细胞细胞培养皿仪器 荧光显微镜 实验步骤 一 细胞制备和细胞固定 实验步骤 二 细胞免疫荧光ICC染
2、色 0 2 TritonX处理5min 封闭室温30min 4 过夜 37 1 2小时 37 5 10min 荧光显微镜观察 实验结果 三 观察 humanHeLacells 实验中应注意的问题 细胞不要铺的过密 60 70 防止细胞污染固定时间不要太长 一般10 30minTrionX处理时间不宜过长 膜蛋白可不必处理选择合适的封闭液二抗孵育后 一定要洗干净必要时用恒温摇床摇洗 1 免疫荧光技术2 免疫酶技术3 免疫亲和技术4 胶体金技术 标记物使抗体或抗原抗体复合物在各种显微镜下可见的物质 免疫细胞化学技术 免疫细胞化学技术注意事项 选择合适的方法材料要留好选择抗体选择标记酶封闭液的选择设定对照实验 思考题 检测Hela细胞中蛋白A定位情况 思考应选择什么方法 用什么仪器观察 疑难解答 一 缺乏染色 二 高背景 三 细胞 组织的形态被破坏 四 染色不正确
