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1、TORCH IgG 风疹病毒抗体酶免测定 标准操作程序 编写者 宿金涛 日期 2012 年 5 月 26 日 一 实验原理 采用间接法原理检测人血清样品中风疹病毒IgG 抗体 HCMV IgG 以纯化风疹病毒抗原包被酶联板 待检血清中的风疹病毒抗体与包被抗原反应 再与酶 标记鼠抗人 IgG 抗体结合 形成抗原 抗体 酶标抗体复合物 加底物TMB 显色 在酶 标认仪上比色后根据OD 值判定有无风疹病毒IgG 抗体的存在 二 试剂 北京贝尔 规格为1 48Test 试剂文号 国食药监械 准 字2010 第 3400534号 三 仪器 ST 36W 洗板机 reader HT2 酶标仪 四 操作步骤
2、 1 取出试剂盒室温平衡30 分钟 将 20 洗涤液用蒸馏水做20倍稀释 2 加样品 将待检血清做1 10 稀释 取 100ul 标本稀释液加入反应板孔内 再 加 10ul 待检血清 混匀 同时预留阴 阳性及空白对照共5 孔 3 加入阴性对照 3 孔 阳性对照 1 孔 各 100ul 对照血清 空白对照1 孔空置 将反应板轻轻震荡使样品混匀 4 温育 用封板膜封板后 置37 温箱或水浴中反应30 分钟 5 洗板 温育后 将封板膜揭掉 吸干孔内液体 用洗涤液洗板5 次 第次浸泡 30 60 秒钟 6 加酶标工作液 每孔加入100ul 酶标工作液 空白孔除外 7 温育 用封板膜封板后 置37 温箱
3、或水浴中反应30 分钟 8 洗板 温育后 将封板腊揭掉 吸干孔内液体 用洗涤液洗板5 次 第次浸泡 30 60 秒钟 9 显色 每孔加入底物 A B 液各 50ul 轻轻震荡混匀 用封板膜封板后 置 37 温箱或水浴中反应10 分钟 10 终止 每孔加入终止液50ul 轻轻震荡混匀 11 测定 设定酶标仪波长于450nm 双波长 450 630nm检测 测定各孔 A450 值 注意 在终止反应30 分钟内计数 12 当使用单波长时 校准空白孔 设定酶标仪波长于450nm 测定各孔 A450 值 当使用双波和 450 630nm检测时 可以不设空白孔 直接测定各孔A 值 五 结果判断 1 每个试
4、验结果独立使用 通过 Cut off 值判定结果 2 计算临界值 Cut off C O 0 10 阴性对照平均 NC A450 值 当阴性平均 A450 值小于 0 05时 按 0 05 计算 当阴性平均 A450 值大于或等于 0 05 时按实际值计 算 3 阴性结果 标本吸光度值 临界值为 阳性 六 临床意义 风疹病毒属节肢介体病毒中的披盖病毒 Togavirus 群 为风疹的病原病毒 由 T H Weller 与 F A Neva 1962 及 P D Parkman等 1962 自风疹患者的咽部洗涤液中 分离到的 病毒粒子具多形性 50 85 纳米 有包被 粒子 风疹病毒属节肢介体病
5、毒中的披盖病毒 Togavirus 群 为风疹的病原病毒 由 T H Weller 与 F A Neva 1962 及 P D Parkman等 1962 自风疹患者的咽部洗涤液中 分离到的 病毒粒子具多形性 50 85 纳米 有包被 粒子中含有分子量为2 6 4 0 106的 RNA 感染性核酸 乙醚和 0 1 的脱氧胆酸盐可使其钝化 在热中亦弱化 在兔或猪等动物的肾细胞中 或BSC 1 RK 13 BHK 21 等细胞株中可增殖 由于这 些细胞中一般不出现细胞变性 RK 13 和 BHK 21 可以看到细胞变性 是否能够增殖 主要利用它干扰肠变胞病毒等的增值的性质来判断 通过患者鼻咽分泌物
6、的飞沫直接传 染 经 14 21 天潜伏期后 后头部 耳后部 颈部等处的淋巴节肿大 发热 并且1 2 日后 颜面和头部即可出现风疹 并顺次扩大到颈部 躯干部和四肢 约经3 日消 退 如妊娠初期罹患风疹 胎儿常发生白内障 小眼球症 重听 心脏病和小头症等先 天性异常 风疹病毒 RV 为呼吸道病毒 通过呼吸道传播 除引起急性呼吸道传染病外 也是先天性风疹感染引起流产 死产和胎儿畸形的主要因素之一 感染风疹病毒会引起 上呼吸道炎症和病毒血症 如发热 皮疹 浅表淋巴结肿大等 症状轻微 愈后良好 病后产生 IgG 抗体使人获得持久的免疫力 对一般人群来说 得一次风疹并无大碍 但对孕妇非常严重 首先 孕妇
7、发病率比 正常人群高 5 倍 其次是孕妇患病后可通过胎盘感染胎儿 使细胞的有丝分裂受到抑制 染色体断裂增多 从而影响DNA 复制和细胞繁殖 且该病毒在相邻的细胞间传播 因 此不被母体风疹抗体所消灭 而得以广泛传播 引起多系统多组织的畸形 称为先天性 风疹综合征 风疹病毒感染后在晶体和内耳可长期存在 故临床上称白内障 耳聋和先 天性心脏病为先天性风疹综合征的三大症状 还有视网膜病 青光眼 溶血性贫血 糖 尿病 黄疸 肝脾肿大等 约20 的患儿在出生后1 年内死亡 怀孕后在第 1 2 3 4 个月感染风疹病毒 先天性风疹综合征的发生率分别为50 30 20 5 由此可见 妊娠前3 个月内感染风疹
8、致病机率很大 4 个月后明显 降低 因此 妊娠初3 个月内感染风疹宜终止妊娠 检测血清中抗 RV IgM 阳性 表示近期感染 由于现已分离出风疹病毒且已研制 成疫苗 可以对易感人群或孕前抗 RV IgG 阴性者进行预防接种 以预防感染 七 病人及样本要求 1 血清样本可按常规方法彩集 血清样本中混浊或有沉淀的样本应先离心或过滤 后取澄清的液体进行检测 如果未充分沉淀 悬浮的纤维蛋白可能引起假阳性 使用前 样本平衡至室温 平衡30 分钟 冷冻样本实验前需恢复到室温并混匀 2 标本中含有EDTA 柠檬酸钠 肝素钠等抗凝剂时 不影响结果 血清中的内 源性干拢物如血脂 胆红素 血红蛋白在一般情况下不会
9、影响试验结果 RF 因子阳性 孕妇 AFP 阳性标本在一般情况下不影响试验结果 HAV HCV 乙肝 EB HSV RV 等相关疾病抗体阳性标本通常情况下不影响试验结果 3 标本储存在 2 8 一周内不需要检测的标本应储存在 20 以下 避免反得冻 融 八 注意事项 1 使用前仔细阅读说明书 检查试剂组成是否完整 并平稀至室温 2 测定结果的判断必须以酶标仪读数为准 3 任何血清都应作为具有传染性样品对待 4 请将拆封后未用完的包被板放入自封袋内封紧保存 5 实验用的血清及废弃物均应经灭菌后再处理 121 20 分钟 6 本品仅用于体外诊断用 7 打开包装后请在30 天内使用 8 试齐使用前摇匀 洗涤液如有结晶析出 摇匀溶角后不影响使用 9 被检血清新鲜 超过48 小时 请冰冻保存 10 不同批号试剂请不能混用 11 封板膜不可重复使用 12 试剂盒应在 2 8 放置 未用完的板条应及时封存 有效期12个月 九 参 考 文 献 风 疹 病 毒抗 体 酶 免 测 定 试 剂 盒 操 作 说 明 书
