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1、生理学实验设计 设计人 尚洁王俊俊娄吉祥罗明伟赵锐豪指导老师 2012年05月05日 实验课题 肾上腺素和去甲肾上腺素对心脏和血管的比较 实验原理 实验材料与试剂 实验1实验对象家兔试剂20 氨基甲酸乙脂 0 5 的肝素 生理盐水 5 100000肾上腺素 1 10000去甲肾上腺素实验2实验对象 蟾蜍试剂 任氏液 5 100000肾上腺素 1 10000去甲肾上腺素 实验仪器与设备 实验1哺乳动物手术器械一套生物信号采集处理系统张力换能器兔手术台动脉夹动脉导管铁支架丝线注射器实验2蛙类手术器械一套生物信号采集处理系统铁支架张力换能器双凹夹试管夹蛙心插管滴管丝线 实验方法 实验1动物的分组与处
2、理 取8只身体状况基本相同的家兔 随机等分为两组 一组为在体实验组 另一组为在体对照组指标的观察 以动脉血压为指标 分析肾上腺素和去甲肾上腺素对血管活动的调节实验2取8只身体状况基本相同的蟾蜍 随机等分为两组 一组为在体实验组 另一组为在体对照组 实验2 取8只身体状况基本相同的蟾蜍 随机等分为两组 一组为在体实验组 另一组为在体对照组指标的观察 以心率 心肌收缩力为指标 分析肾上腺素和去甲肾上腺素对心脏活动的调节 实验技术路线 1 麻醉 家兔称重后 耳缘静脉缓慢注射20 氨基甲酸乙酯 戊巴比妥钠 乙酯 5ml kg 1 进行麻醉 当动物四肢松软 呼吸变深变慢 角膜反射迟钝时 表明动物已被麻醉
3、 即可停止注射 2 动物的固定 将麻醉的家兔仰卧位固定于兔手术台上 实验技术路线 3 手术操作剪去颈前部兔毛 沿正中线切开皮肤5 7cm 用止血钳纵向分离皮下组织于正中线分开颈部肌肉 暴露气管 在气管下方穿一根线备用 在甲状软骨下约1cm处剪一倒 T 型切口 插入气管插管 用备用线结扎并固定 在气管两侧找到并辨认迷走神经 交感神经 减压神经 即家兔的主动脉神经 以及颈总神经 用玻璃分针先仔细分离右侧减压神经 然后分离右侧迷走神经 交感神经和颈总神经 分别在各神经 血管下穿一根不同颜色的丝线备用 动脉插管 分离左侧颈总动脉2 3cm 尽可能向头端游离 远心端穿线并结扎 近心端用动脉夹夹闭 在血管
4、下穿线备用 在耳缘静脉注射0 5 肝素生理盐水2ml 并在动脉导管尖端注入0 5 肝素生理盐水0 1ml 用眼科剪在结扎线的近端动脉上剪一斜切口 向心脏方向插入已准备好的动脉导管 注意管内不应有气泡 结扎固定 压力换能器与动物心脏应保持在同一水平 观察项目 1 记录正常血压放开动脉夹 记录静息状态下家兔动脉血压曲线 观察正常血压波动曲线 2 静脉注射小剂量肾上腺素耳缘静脉注射小剂量肾上腺素溶液 观察血压变化3 静脉注射大剂量肾上腺素待动脉血压曲线恢复正常后 耳缘静脉注射大剂量的肾上腺素溶液观察血压的变化4 静脉注射去甲肾上腺素耳缘静脉注射去甲肾上腺素溶液0 2 0 3ml 观察血压变化 实验仪
5、器连接与调试及装置 1 仪器装置将动脉导管与压力换能器相连 通过三通开关用生理盐水冲灌压力换能器和动脉导管 排尽压力换能器与动脉导管中的气泡 然后关闭三通开关备用 若压力换能器没有定标 要对压力换能器定标 2仪器连接将压力换能器与生物信号采集系统相连 将刺激电极输入端与刺激输出端相连 将刺激电极输出端与保护电极相连3调零 压力定标和制压实验前 一般已调整好测量系统 实验过程中 勿轻易改动 实验2 1 备用线将前后腔静脉和左右肺静脉一起结扎 注意勿结扎住静脉窦 将心脏回复指原位1 取蟾蜍一只 用探针捣毁脑和脊髓 将其仰卧固定在蛙板上 用镊子夹起皮肤 然后将胸部剑突软骨下方的皮肤剪出一个 V 字形
6、切口 暴露出剑突 用镊子夹住剑突下端 在肌肉层上剪出 V 形切口 再用粗剪刀沿正中线剪开胸骨 并把左右两侧胸骨完全剪掉 眼科剪仔细剪开心包膜 暴露心脏 2 仔细识别心房 心室 动脉圆锥 主动脉 静脉窦 前后腔静脉等 3 结扎血管 在右主动脉下穿一根线并结扎 再在左右主动脉下穿一根线备用 用玻璃分针将心尖向上翻至背面 以备用线将前后腔静脉和左右肺静脉一起结扎 注意勿结扎住静脉窦 将心脏回复指原位 蛙心插管 在左主动脉下穿两根线 用一根线结扎左主动脉远心端 另一线备用 提起左主动脉远端缚线 用眼科剪在左主动脉上靠近动脉圆锥处剪一 V 形切口 将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入主动脉 插至动脉圆锥
7、时 略向后退 在心室收缩时 沿心室后壁方向下插 经主动脉瓣插入心室腔内 不可插入过深 以免心室壁堵住插管下口 若插管成功进入心室 管内液体会随着心室搏动而上下移动 用左主动脉近心端的备用线结扎插管 并将结扎线固定于插管侧面的小突起上 游离心脏 提起插管 在接线远端分别剪断主动脉左右分支 剪短左右肺动脉和前后腔静脉 将心脏离体 用滴管吸进插管内的余血加入新鲜任氏液反复冲洗数次 直至液体完全澄清 保持灌流液面高度恒定 1 2cm 即可进行试验 仪器连接 用试管夹将制备好的离体蛙心固定于支架上 在心脏舒张期用蛙心夹夹住心尖部 并连接到张力换能器上 勿将心脏受到过度牵拉 将张力换能器的输出线与生物信号
8、采集处理系统相连 观察项目 1 描记正常蛙心收缩曲线幅度 代表心脏波动的强弱 疏密 代表心率 规律性 代表心脏波动的节律性 顶点水平 代表心脏收缩的程度 基线 代表心脏舒张的程度 2 肾上腺素的影响在任氏液中滴加1 2滴5 100000去甲肾上腺素溶液 观察曲线的变化 出现效应后 用新鲜任氏液换洗 直至心跳曲线恢复正常 3 去甲肾上腺素的影响在任氏液中滴加1 2滴1 10000去甲肾上腺素溶液 观察曲线的变化 实验预期结果 实验1 实验2 1 滴加肾上腺素溶液后 心率加快 心肌收缩力增强2 滴加去甲肾上腺素溶液后 心率变慢 实验分析 1 静脉注射氨基甲酸乙酯溶液时 刚开始小兔子异常兴奋 为使兔
9、子快速镇静下来 注射前3ml时应迅速 但不可过速防止兔子死亡 若兔子在注射时出现异常情况 应停止注射观察5分钟后再做决定 2 静脉注射时针不易扎入血管 静脉注射时应该从耳缘静脉远心端开始进针 先进入静脉下端然后在任氏液中滴加1 2滴1 10000去甲肾上腺素溶液 观察曲线的变化 3 插蛙心插管时 稍有不慎 蛙心可能停止跳动而使实验失败 所以插蛙心插管要小心 先使蛙心插管进入动脉圆锥 在向下进入左心室 实验中保持心脏处于任氏液环境中 还有如果蛙心插管稍插入左心室 蛙心搏动就发生很大变化 那么将蛙心稍插入左心室即可 但不过实验过程会变慢 4 为什么用蟾蜍做肾上腺素和去甲肾上腺素对心脏作用的影响的比较 答 最主要的原因是因为蟾蜍是两栖动物 体外条件下易维持其正常的生理环境 从而使实验难度大大降低 更易获得成功 谢谢观赏
