《鸡新城疫血凝和血凝抑制实验（五月二十六）.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《鸡新城疫血凝和血凝抑制实验（五月二十六）.ppt（14页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、鸡新城疫的实验室诊断及免疫效果的评价 目的1 掌握鸡新城疫的临诊要点 2 了解和掌握鸡新城疫的实验室诊断和免疫监测技术 内容1 鸡新城疫的临诊要点 2 鸡新城疫的实验室诊断 NDV的分离及鉴定 NDV毒力的鉴定3 鸡新城疫的免疫效果评价 鸡新城疫的免疫监测血凝试验 HA 和血凝抑制试验 HI 血凝试验 HA 和血凝抑制试验 HI HA和HI的原理 HA试验 许多病毒表面有血凝素 能与各种动物的红细胞表面受体结合 而出现红细胞凝集现象 简称为病毒的血凝现象 2 HI试验 病毒的红细胞凝集现象 可以被特异性免疫血清所抑制 称HI试验 一 鸡新城疫的血凝试验 HA 材料 新城疫病毒鸡胚接种尿囊液1份
2、0 5 鸡血球悬液1管生理盐水或PBS1瓶96孔微量血清盘1块微量加样器1支 一 鸡新城疫的血凝试验 HA 方法与步骤 一 制备鸡红细胞悬液 1 用注射器抽取抗凝剂 2 用上述注射器 采用无菌法抽取健康的未免疫鸡的静脉血 3 混匀 加生理盐水适量 洗涤离心 共离心三次 第一 二次2000转 分5分钟 第三次3000转 分5分钟 洗去血清及白细胞 取纯红细胞0 6ml 加生理盐水稀释99 4ml 即成1 的鸡红细胞悬液 一 鸡新城疫的血凝试验 HA 二 加样 1 在96孔微量反应板上进行 自左至右各孔加50 L生理盐水 2 于左侧第1孔加50 L病毒液 混合均匀后 吸50 L至第2孔 依次倍比稀
3、释至第11孔 吸弃50 L 第12孔为红细胞对照 3 自右至左依次向各孔加入0 5 鸡红细胞悬液50 L 在振荡器上振荡 室温下静置后观察结果 一 鸡新城疫的血凝试验 HA 病毒血凝试验的操作方法 单位 L 以100 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价 即为一个凝集单位 一 鸡新城疫的血凝试验 HA 结果判定 置于振荡器上振荡1分钟 静置后30min开始观察结果 待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察 红细胞全部凝集 沉于孔底 平铺呈网状 即为100 凝集 不凝集者 红细胞沉于孔底呈点状 以100 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价 即为一个凝集单位 从表4 1看出 该新城疫病毒液的血凝价为1
4、128 则l 128为1个血凝单位 1 64 l 32分别为2 4个血凝单位 或将128 4 32 即1 32稀释的病毒液为4个血凝单位 二 鸡新城疫的血凝抑制试验 HI 材料 除血球凝集试验所用材料外 血清取鸡免疫血清 鸡群卵黄抗体的制备 1 取鸡蛋卵黄20ml 加入等量生理盐水 振荡 摇匀 2 加入等量氯仿40ml 振荡30分钟 3 取振荡的卵黄液3000 4000rpm30分钟 4 取上清液作为抗体检测材料 二 鸡新城疫的血凝抑制试验 HI 方法 1 根据HA试验结果 确定病毒的血凝价 配制出4个血凝单位的病毒液 2 在96孔微量反应板上进行 用固定病毒稀释血清的方法 先在第1孔加50
5、L生理盐水 3 自第3孔至12孔各加50 L4个血凝单位的新城疫病毒液 4 第 孔加被检鸡血清50 L 吹吸混合均匀 吸50 L至第2孔 依此倍比稀释至第10孔 吸弃50 L 稀释度分别为 1 1 4 1 8 第12孔加新城疫阳性血清50 L 作为血清对照 振荡混合均匀 置室温中作用20min 5 自第l孔至12孔各加0 5 鸡红细胞悬液50 L 振荡混合均匀 室温下静置30 40min后观察结果 二 鸡新城疫的血凝抑制试验 HI 病毒血凝抑制试验的操作方法 单位 L 以100 抑制凝集 完全不凝集 的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价 即HI效价 二 鸡新城疫的血凝抑制试验 HI 结果判定 以100 抑制凝集 完全不凝集 的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价 即HI效价 凡被已知新城疫阳性血清抑制血凝者 该病毒为新城疫病毒 从表4 2看出 该血清的HI效价为1 64 用以2为底的负对数 log2 表示 即6log2
