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1、 山东农业大学细菌性传染病分子发生学绿脓杆菌研究现状学 院 动物科技学院 专 业 兽医硕士 学生姓名 冯柳柳 学 号 2013120181 指导老师 胡敬东 老师 1绿脓杆菌研究现状摘要：绿脓杆菌存在于环境以及正常畜禽体内，是一种条件致病菌。近年来，随着动物疾病研究的深入，其中有关绿脓杆菌感染的报道也越来越多。本文从病原学、流行病学、发病机理、临床学等方面对绿脓杆菌的研究进展进行了综述，期望为控制绿脓杆菌的感染奠定基础。关键词：绿脓杆菌；条件致病菌；血清型Abstract: Pseudomonas aeruginosa is a conditional pathogenic bacteria
2、existing in environment and normal livestock and poultry body. In recent years ,with the deepening of animal disease research, more and more infections have been reported .In order to lay the foundation for the control of infection, research advances on were reviewed from some aspects of etiology, e
3、pidemiology, pathogenesis and clinical in this paper.Key words: Pseudomonas aeruginosa;conditional pathogenic bacteria; serotypes绿脓杆菌是 1882 年首先由 Gersard 氏从伤口脓液分离得到。该菌在自然界广泛存在于水、土壤、空气以及动物肠道和皮肤中，为一种条件性致病菌，在特定的情况下能引起动物及人感染发病，如规模化养狐场母狐的流产、羊群的化脓性肺炎，雏鸡的败血症和绿脓杆菌感染鸽子、鹧鸪和人等。养殖业规模的不断扩大使绿脓杆菌引起的疫病也呈现上升的趋势。绿脓杆菌对
4、禽属条件性致病性菌，常从正常禽的肠道、呼吸道和卵中分离出来，能引起各种年龄的禽发病，致死率在 1% 90%以上，应激是幼禽暴发绿脓杆菌病的主要原因。该菌给规模化养殖场和人类的健康造成了很大威胁.在人医上,绿脓杆菌能引起术后和伤口的感染 还能引起人的关节炎和角膜炎等疾病免疫力下降是重要的发病诱因,绿脓杆菌的毒素残留还能引起食物中毒为了探讨有效控制和治疗绿脓杆菌病的方法,对绿脓杆菌的生物学特性及其致病性的研究也越来越多。1 病原学1.1 形态和培养特性 绿脓杆菌属假单胞菌属,中等大小的革兰氏阴性杆菌,单在、成双或成短链。所有菌株均能运动。电子显微镜下可以见到菌体一端有一根很长的鞭毛和很多绒毛。该菌
5、最适宜的生长温度为 3037，41可生长，4不生长。该菌在普通培养基上生长良好，菌落为圆形，光滑带蓝绿色荧光。可以产生 2 种类型的菌落，一种为大而光滑、边缘平坦、中间凸起（煎蛋样）的菌落，另一种为小而粗糙、隆起的菌落。临床材料多见大菌落，而环境分离的常为小菌落，大菌落易变为小菌落，但极少发生回变。呼吸道和尿道排泄物中还可见到黏液型菌落。大多数菌株能产生水溶性的绿脓素（蓝色）和荧光素（带绿色荧光） 。蓝绿色素向菌落周围扩散，使培养基带有颜色，某些菌株也分泌一些暗红色素。而有些菌株不产生色素，或只在特定的培养基上才产生色素。该菌在麦康凯生长良好，但菌落不呈红色。在血平板上，菌落稍变大，菌落周围有
6、明显的溶血环。绿脓杆菌纯培养物的保存，传统的方法是保存于普通斜面上。该方法需要1 个月移种 1 次，保存到半年则会出现存活率低。复苏后色素不明显，长期保存容易变异等缺点。有报道了用超低温甘油保存的方法，试验结果表明，菌种保存 2 年多其活力高达 100%，且细菌的生物特性未发生变异，这为实验室保存菌种提供了一种新方法。21.2 生化特性 绿脓杆菌在三糖铁琼脂上生长不产生 H2S 底部也不黄，接触酶阳性。该菌能在 NAC 和 SS 培养基上生长，发酵糖的能力不强。绿脓杆菌的主要生化特性见表 1。表 1 绿脓杆菌的主要生化特性试验项目葡萄糖乳糖麦芽糖蔗糖木糖半乳糖菊糖运动性亚硝酸盐产气结果+-+-
7、+注；+表示能发酵相应的糖或能产生相应的酶；-表示不能发酵相应的糖或产生相应的酶。1.3 毒素及致病性 菌体崩解后释放出来的内毒素，构成细胞壁的一种脂多糖，毒力较弱，23mg 才能致死 20g 体重的小白鼠；绿脓杆菌分泌的色素也是毒素之一，它们是抗菌素样的物质，有抑制细菌生长的能力，也有一直抗体吞噬细胞的作用。一般来说，分泌色素较少的菌株毒力强，大量分泌色素的菌株则毒力弱。绿脓杆菌代谢产物中有种毒力很强的外毒素 A 是种致死性外毒素。外毒素A 可用福尔马林脱毒成为类毒素，使毒力减弱。有防治绿脓杆菌感染的作用。另外毒素为磷脂酶 C 是一种溶血毒素，它能给入侵的细菌提供营养，增加绿脓杆菌的毒力。外
8、毒素 A 在食品上的残留会引起人的食物中毒。2 流行病学人和各种动物对绿脓杆菌都易感。由于该菌在自然界中分布广泛，在烧伤、外科创伤以及术后，或其他疾病如奶牛子宫炎、乳房炎等，都会为该菌的继发感染创造条件。在畜禽饲养管理条件低劣幼年畜禽长途运输过程中，因应激反应导致体质下降，特别是环境污染及注射用具消毒不严时，可经消化道、呼吸道、创伤引起群体绿脓杆菌病的暴发流行。出生雏鸡接种马立克病疫苗时，注射用具及疫苗的污染是该病近年来常见的发病原因。 绿脓杆病的流行不分季节、，一年四季都可发生。3 发病机理绿脓杆菌长期存在于皮肤、消化道、呼吸道、和尿道中，成为健康带菌者。若体内外有创伤，首先在入侵之处定居下
9、来 并迅速分裂繁殖 在多数情况下形成局灶性脓肿。幼年动物因免疫系统尚不健全，病原菌即可沿着淋巴系统进入体内，并在组织中扩散蔓延，最后进入血液中引起菌血症。该菌在代谢过程中产生溶血素使大量红细胞溶解，造成血液成分改变、血管壁受损和循环系统障碍，最终导致实质器官充血或出血。该菌代谢过程中产生的外毒素 A 和磷脂酶C 在体内有抑制或杀死吞噬细胞的能力，使宿主抵抗力下降，尤其外毒素 A 被认为是一种致死毒素，将这种毒素注射于家兔皮肤，18h 后可引起局部脓肿。3研究发现，外毒素 A 通过受体结合亚单位和跨膜亚单位将具有 ADP2 核糖基化活性的毒性单位导入细胞催化细胞内的延伸因子 EF22 发生 AD
10、P2 核糖基化反应，使 EF22 灭活，从而抑制蛋白合成而杀死细胞。对于绿脓杆菌的各种致病因子的致病作用及致病机理仍是目前绿脓杆菌研究的热点.目前,国内外对外毒素A 磷脂酶 C 绿脓色素等致病因子的报道较多,已成功对外毒素 A 进行了提取、克隆和表达。4 临床学4.1 症状表现 该菌主要引起各种动物的化脓性炎症、败血症。该菌感染鸡后，可引起肺炎、肝周炎、心包、心肌炎、败血症、关节炎、眼炎，但每次暴发所引起的症状不一致。鸭有引起的报道，奶牛感染后可拉稀，水貂感染可引起出血性化脓性肺炎，此外还有引起狐狸流产和兔肺炎的报道。山东农业大学研究发现，羊感染后，可发生慢性化脓性肺炎。主要表现为羊咳嗽、气喘
11、、消瘦、病程长短不一，多持续 23 个月。剖检病死羊发现多数肺脏呈大叶性肺炎，整个胸腔积满浓液，有的病例可发现肺部水肿、肺尖肉变、人的伤口感染主要表现为伤口化脓。4.2 病理变化 主要病变腹部增大，胸腔内心包膜肥厚混浊，常与心脏黏连，肝周炎，肝质脆呈土黄色。脾肿大。气囊膜、腹膜发炎、增厚同豆腐样缠绕腹腔脏器。腹水增多有呼吸困难症状的病尸。单侧或双侧肺肿胀、暗红色、局部有小硬结节，胸膜发炎与肺脏黏连 肺不易完整剥离，气管内泡沫状黏液。4.3 诊断 根据该病的流行病学特点、临床症状表现其病理变化，进行细菌学检验，血清学定型等才能作出完整的诊断报告。细菌学检验是诊断绿脓杆菌病最可靠的方法挑取单个可疑
12、菌落接种于 NAC 鉴别培养基上培养 18h 置室温逐渐产生明显的色素，该种色素渗透入培养基中，涂片镜检革兰氏阴性杆菌，即可判定为绿脓杆菌。少数菌株在 NAC 培养基上不出现色素，但如果在 42 和50g/mLNaCl 溶液中能够生长。氧化酶、乙酰胺酶和精氨酸阳性者亦可判定为绿脓杆菌。血清学分型鉴定方法是用分离菌株的活菌液与诊断血清进行玻片凝集试验判定出其型别治疗。有报道认为，高免血清注射保护力为 100%大量注射庆大霉素亦有较好疗效。口服治疗的效果较差，对雏鸡而言，为了节省工作量，通过口服大剂量庆大霉素或链霉素有防治作用。绿脓杆菌病的流行有一定的条件性，但不分季节、月份，只要有该菌增殖条件和
13、皮肤烧伤，体内外的术后创伤等可发生感染。幼年动物的暴发流行，多见于炎热气候下长途运输。转载频繁或饲养管理恶劣，消除各种应激因素，结合清洁卫生、消毒及抗菌素注射是防治杆菌感染不可缺少的工作。目前已经研制应用有单价苗 7 价 LPS 苗 16 价绿脓杆菌苗，绿脓杆菌多成分混合苗 SPT 联合苗 OEP 苗，绿脓菌素及外毒素A 的类毒素等。人工被动免疫可用多价免疫血清等，但应注意，绿脓杆菌抗原型别繁多，致病因素很多，感染机制复杂，因此接种有原则性和针对性。5 存在的问题与展望 近年来，随着绿脓杆菌病的不断报道 该病在国内外均已引起了广泛的重视，并在防治绿脓杆菌感染方面做了大量的工作。但主要还存在以下
14、两方面的问题：一是绿脓杆菌的血清学监测方面，由于没有统一的分型标准导致很难对不同地区分离得到的菌株进行比较。不能了解各地的常在菌株。二是对绿脓杆菌的防治方面，虽然目前已经有很多可用的疫苗。但是由于绿脓杆菌为自然界的常在4菌且型别较多，每一种疫苗都有缺陷，所以针对绿脓杆菌的理想疫苗仍然有待开发。参考文献：1牛钟相,李雅林 .动物绿脓杆菌病研究进 J.动物医学进展,2003,24(1);16-18.2河南农业大学.动物微生物学 M .3 版.北京;中国农业出版社,2004,12.3周学章,田东林 ,邓旭明.雏鸡绿脓杆菌病病原菌的分离和鉴定J.中兽医医药杂志 ,2004,3; 19-21.4艾启俊,
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